Учет численности микроорганизмов в воде и других жидкостях

Число микроорганизмов в воде, навозной жиже, огуречном рассоле и других жидких субстратах можно также определять методом питательных пластин. Для этого исследуемые жидкости 3 мин хорошо взбалтывают, затем берут стерильной пипеткой 1 мл жидкости и вносят ее в 99 мл стерильной водопроводной воды. Это исходное разбавление субстрата в 100 раз. Далее готовят методом разведения разные концентрации исследуемой жидкости и определяют число КОЕ методом, описанным выше.

 

Учет численности микроорганизмов в воздухе

Для определения количества КОЕ в воздухе часто применяют очень простой метод Коха (осаждение клеток микроорганизмов на плотных питательных средах).

Стерильные чашки Петри с питательной средой открывают в исследуемом помещении (или на исследуемой площади) на 5 мин. В качестве питательной среды используют МПА. Частицы пыли с микроорганизмами под действием силы тяжести оседают на поверхность плотной питательной среды. Затем чашки помещают с термостат. Через определенное время инкубации клетки микроорганизмов образуют на среде колонии, которые можно подсчитать. Чашки Петри рекомендуется размещать на уровне 1 м от поверхности пола или земли. В одной точке желательно размещать 2-3 чашки Петри.

На площади 100 см² за 5 мин осаждается столько клеток, сколько их находится в 10 л воздуха (0,01 м³). Зная площадь чашки Петри, можно подсчитать количество клеток в 1 м³ воздуха. Для этого число колоний, выросших в чашке Петри, относят к общей площади чашки, затем пересчитывают, сколько таких колоний поместилось бы на 100 см² и далее в 1 м³ воздуха.

 

Идентификация микроорганизмов

При определении вида микроорганизмов на первом этапе учитывают морфологические и культуральные признаки.

 

Морфологические признаки

Морфологическими признаками у бактерий служат:

- форма клеток (шаровидные, палочковидные и извитые);

- у палочковидных бактерий отмечают форму концов клетки (вогнутые, закругленные, закругленные или усеченные);

- расположение клеток (клетки могут быть одиночные, соединенные попарно, в цепочки или в виде пакетов);

- размеры клеток;

- способность к спорообразованию и расположение в клетках спор (бациллярное, клостридиальное и плектридиальное);

- способность к движению и тип жгутикования (один жгутик – монотрих, пучок жгутиков на одном конце – лофотрих, пучки жгутиков на обоих концах клеток – амфитрих, жгутики по всей поверхности клеток – перитрих);

Основные формы бактерий представлены на рис. 1.

Культуральные признаки

Характер роста культуры на МПБ и других жидких средах или колоний на МПА и других плотных средах (сусло-агар, агаризованная синтетическая среда) - важные систематические признаки микроорганизмов.

При развитии культуры на жидких средах отмечают: характер развития пленки (тонкая, сухая, складчатая, слизистая) и ее цвет; наличие мути (слабая, умеренная, сильная); присутствие, характер осадка (обильный, плотный, хлопьевидный) и его цвет.

Культуральные признаки, выявляемые на плотных средах, следующие:

-формаколоний (рис. 2);

- профильколоний;

-крайколоний (гладкий, волнистый, зубчатый, лопастной, реснитчатый, ворсистый, ветвистый);

-размеры колоний(10 мм и более в диаметре - крупная, от 1 до 10 - средняя, не превышает 1 мм - точечная);

-поверхность колонии (гладкая, морщинистая, шероховатая, складчатая, бугристая);

а - микрококки	б - диплококки	в – тетракокки (сарцины)
г- стрептококки	д - палочковидные, не образующие спор	е – палочковидные, бацилярный способ спорообразования
ж - палочковидные, клостридиальный способ спорообразования	з - палочковидные, плектридиальный способ спорообразования	и – вибрионы

Рис. 1. Форма бактерий: шаровидная (а, б, в, г), палочковидная (д, е, ж, з,), извитая (и)

 

- оптические свойства поверхности(прозрачная, просвечивающая, непрозрачная, блестящая, матовая, флуоресцирующая);

 

 

Круглая	Круглая с фестончатым краем	Круглая с валиком по кругу
Ризоидная	Ризоидная	Круглая с ризоидным краем
Складчатая	Неправильная	Концентрическая

 

Рис. 2. Форма колоний микроорганизмов

 

-цвет(грязно-белый, белый, желтый, оранжевый, сиреневый, синий, красный, черный и т. д.);

-структураколоний (однородная, мелко- или крупнозернистая, радиально или концентрически исчерченная, мучнистая, пленчатая, врастающая в агар, легко снимающаяся иглой с агара);

-консистенция(маслянистая, тестообразная, слизистая, сухая, плотная, сметанообразная).

 

При изучении колоний актиномицетов обращают особое внимание на пигмент, выделяемый в среду, окраску воздушного и субстратного мицелия. Значение имеет запах колоний (землистый, эфирный, фруктовый).