- ( ) (- ). . -, 3 . -, , 57 . - .
5 10 , 100 200 . 60 . t 37 , .. , . , , . 1 . 199 ( 200 100 1 ) , 1 mi 1 000000 - 2 000000 , 20% 80% .
1 , 0,1 , 5% . t 37 5 7 . , , , , , , .
.
- 1000 . , 4% ; 35%.
, , 3 -, . (/) .
( ) , .
.
|
|
. (, ), ( ). (, 209, , .).
.
: ; ( ) ; ; ; ; 5% ; , 209; 5, 10, 20 ., 0,5 -, 1- 2- .
, 0,1 5% , 0,2 0,1 2- . 30 37. , 1 . -. 100 , .
in vitro : 30 2 . : , 100 30 2 ( ), 1 30 2 . ( , 2 , 30 ). 1.
-
(-) . . : , . - .
-. , . in vitro. - , .
.
: 42 0PO 44 0, Na 42 0 44 0, NaCI, , , , , 1% ( ), , , .
|
|
:
. 1% 15 7,2 0,2% 0,6% ( 25 1/15 42 0 44 0 36 1/15 Na 42 0 44 0; 61 4 0 120 370 4 0 NaCI).
. 0,1% . .
10 2 4 . , 30 - 37. , . 0,1 . 25 37, 10 . , 3 5 , , 10 . .
-. 25 37 (, 2- - 209, , .) . .
: - , - . 100 200 . , .
4 . , , 25 30% (1 ), , 30 70% (II ); - , 100% , (III ). , . () . . , :
- = 1 + 2 + ,
, , - , 1, 2, 3 .
()
() (Polymerase chain reaction, PCR) "Cetus"() 1983 ., , (, ).
- , -. .
:
1) ( , );
2) (, );
|
|
3) ( )
, , .. , .
- (Taq-) Thermis aquaticus, 70-72, in vitro. (), , . , , .
, - . , . (20 ), . , .
, () - .
:
- ( , ); ( (20-30 ), ). , . () ( , ) Taq- ( -, ) ( , Mg2+, )
. 25.
- , - -, (RT), ( ).
(20-40) .
3 ,
1 : ( ). 93-95 30-40 .
2 : (). . , 50-65. -20-60 .
|
|
3 : . 5- 3- , . (). - (Taq-) 70-72. - 20-40 .
. 26. ().
, (). . 2n, n- . , , 30-40 108 . . (), .
, ( ), , . :
. 27. ().
1. ()
2.
3.
()
, , , , .
() .
, . .. . (nested) , 2 ( - 1 , - 2- ).
, 2- , . , , . - , - . , : , , . ( 2- - "") .
, , -, , . .
, , . , , , - .
|
|
. - , (, , ) . - 10-1000 ( - 103-105 ).
. , . . . (, , ), , , .
- , . , 4-4.5 .
, , , , , . - .
, , , , (, ..)
, .
.
, , .
, . , . , , .
- , , , , , ; - , ; - ; - - , , , G; - , .
(. )
.28. : ; 1: -, dNTPs " "; 2-3: -, dNTPs .