Полуколичественное определение белка

ПРИНЦИП МЕТОДА: метод основан на реакции Геллера с концентрированной азотной кислотой. Путем последовательного разведения мочи достигают такого максимального разведения, при котором еще появляется кольцо между 2-й и 3-й минутой.

ХОД РАБОТЫ:

1.отмерить в 4 пробирки по 1 мл HNO₃;

2. в других 4-х пробирках приготовить разведения мочи по схеме:

ОТМЕРИТЬ	ОПЫТ 1	ОПЫТ 2	ОПЫТ 3	ОПЫТ 4 и т.д.
Разведение Моча Н2О	неразвед. 1,0 мл -	1: 10 0,1 мл 0,9 мл	1: 20 0,1 мл 1,9 мл	1:30 0,1 мл 2,9 мл
Наслоить с помощью пипетки разведенную мочу (1мл) на азотную кислоту
HNO3 конц.,	1,0 мл	1,0 мл	1,0 мл	1,0 мл

РЕЗУЛЬТАТ:

 

КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ: Умножают разведение на 0,033, получают содержание белка в моче в г/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: то же, что и в работе “Качественная реакция на белок”.

В Ы В О Д:

КАЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ (проба Гайнеса).

ПРИНЦИП МЕТОДА: метод основан на способности глюкозы восстанавливать при нагревании в щелочной среде гидроксид меди в оксид меди красного цвета.

ХОД РАБОТЫ: взять пробирку: опыт

ОТМЕРИТЬ	ОПЫТ
Реактив Гайнеса Моча	9 капель 2 капли

Перемешать, нагреть до начала кипения.

РЕЗУЛЬТАТ:

 

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Присутствие глюкозы в моче – глюкозурия наблюдается при сахарном диабете, при поражении почек, отравлении оксидом углерода, эфиром, хлороформом и т.д.

Алиментарные физиологические глюкозурия и фруктозурия встречаются только у грудных детей, что связано с физиологической незрелостью транспортных систем, участвующих в реабсорбции этих углеводов. Галактоза, пентозы и дисахариды никогда не подвергаются реабсорбции, вследствие чего у детей грудного возраста (особенно у недоношенных новорожденных) возможны алиментарные галактозурия, пентозурия, дисахаридурия в физиологических условиях. Обычно галактозурия и лактозурия исчезают у детей к 10-му дню жизни, но иногда могут сохраняться дольше.

 

В Ы В О Д:

 

 

4. экспресс-методы

Дата: ______________

ЗАНЯТИЕ № 36

РАБОТА № 1: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА В СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Содержание белка в спинномозговой жидкости, в отличие от сыворотки крови, незначительно. Определение общего белка в спинномозговой жидкости имеет большое значение для диагностики опухолей мозга и воспалительных заболеваний центральной нервной системы.

ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА. Раствор белка в щелочной среде в присутствии сульфата меди (NaOH/CuSO₄) окрашивается в сине-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации белка в сыворотке крови и определяется фотометрически.

 

ХОД РАБОТЫ: взять опытную и контрольную пробирки.

ОТМЕРИТЬ	ОПЫТ	КОНТРОЛЬ
РЕАКТИВ ГОРНАЛА СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ NaCl 0,9%	4,0 мл   0,1 мл -	4,0 мл   - 0,1 мл
Перемешать, фотометрия через 20 минут. Кювета 1 см, λ=540 нм (зеленый светофильтр)

 

РЕЗУЛЬТАТ:

 

Е_оп =

С общего белка =

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

 

Нормальное содержание общего белка в спинномозговой жидкости – 0,22-0,33 г/л.

Гиперпротеинорахия – увеличение уровня белка в СМЖ наблюдается при менингитах (серозный и гнойный), опухолях головного мозга, полиомиелите, арахноидите, кровоизлияниях в мозг, абсцессах мозга, рассеянном склерозе.

Гипопротеинорахия – снижение уровня белка в СМЖ отмечается при гидроцефалии, гиперсекреции ликвора, доброкачественной внутричерепной гипертензии.

 

ВЫВОД:

 

 

 

 

РЕФЕРЕНТНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ ОСНОВНЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ВЗРОСЛЫХ

КРОВЬ

Показатель	Значение
АлАТ	0,1 - 0,68 ммоль/ч×л
Альбумины	40 - 50 г/л
Амилаза	16 -30 г/ч×л
АсАТ	0,1 - 0,45 ммоль/ч×л
Белок общий	65 - 85 г/л
Билирубин общий	5,0 - 20,5 мкмоль/л
Гемоглобин	115 - 145 г/л (женщины) 130 - 160 г/л (мужчины)
Глобулины	20 - 30 г/л
Глюкоза	3,3 - 6,4 ммоль/л
Железо	8,8 - 31,0 мкмоль/л
Калий	3,2 - 5,6 ммоль/л
Кальций	2,25 - 2,75 ммоль/л
Креатинин	53 – 115 мкмоль/л
Мочевая кислота	140-340 мкмоль/л у женщин 200-415 мкмоль/л у мужчин
Мочевина	2,5 - 8,33 ммоль/л
Натрий	130 - 155 ммоль/л
Общие липиды	4,0 - 8,0 г/л
Триглицериды	0,4 - 1,54 ммоль/л у женщин 0,45 – 1.82 ммоль/л у мужчин
Фибриноген	2 - 4 г/л
Хлор	95 - 110 ммоль/л
Холестерин	3,1 - 5,2 ммоль/л

 

МОЧА

Показатель	Значение
Амилаза	28 -160 г/ч×л
Мочевая кислота	1,6 – 6,44 ммоль/сут
Мочевина	333 – 583 ммоль/сут

 

СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ

Показатель	Значение
Белок	0,22 – 0,33 г/л
Глюкоза	2,5 – 3,89 ммоль/л
Хлориды	120 – 130 ммоль/л