Определение количества фага (титрование)

Титр бактериофага ___________________________________________________________

___________

Индекс бактериофага_________________________________________________________

___________

 

1. Титрование в жидкой среде по Аппельману. Принцип метода состоит в выявлении максимального разведения фаговой суспензии (титра), которое дает просветление (лизис) стандартного количества индикаторной культуры бактерий. Для этого в 10-кратные разведения исследуемой фаговой суспензии вносят одинаковые количества бактерий (около 250 млн/мл среды). Инкубируют в термостате 16-18 ч и определяют максимальное разведение, в котором имеется просветление. Титр выражают степенью разведения, напр. 10⁸.

Определите титр бактериофага:

	Разведение фага
10 -1	10 -2	10 -3	10 -4	10 -5	10 -6	10 -7	10 -8	10 -9	10 -10
Результат	-	-	-	-	-	-	+	+	+	+

 

Титр бактериофага______________________

2. Титрование бактериофага по методу Грациа. 1,0 мл фага смешивают в пробирке с 0,5 мл бактериальной культуры и добавляют в эту же пробирку расплавленный МПА. Все содержимое выливают в чашку с МПА. Дают застыть верхнему тонкому слою и ставят в термостат. При встрече фага с бактерией, происходит лизис последней и образуется негативная колония фага. Такие негативные колонии затем подсчитывают для определения титра. Титром фага называют количество фаговых частиц в 1 мл препарата фага.

Определите количество негативных колоний в разведениях:

10 ^-4 ____________ 10 ^-5 __________ 10 ^-6_________

Индекс бактериофага _________ БОЕ/мл

 

Применение бактериофагов в диагностике и медицине

1. Применение бактериофагов в терапии и профилактике заболеваний:

Местно применяют бактериофаги:_______________________________________________

_____________

Перорально применяют бактериофаги:____________________________________________

_____________

 

Фагодиагностика

Идентификация культуры возбудителя с помощью известных (диагностических) фагов. Бактериальную культуру засевают на плотную питательную среду. Чашку делят на сектора и на каждый сектор наносят диагностические бактериофаги. Фаг помещенный в сектор, в котором произошел лизис культуры, является специфичным для данной культуры и идентифицирует ее.

Контроль культуры Фаг к E.coli

 

 

Фаг к S.aureus Фаг к S.pyogenes

 

Вывод: Выделена культура _______________________

 

 

Фаготипирование

Фаготип (фаговар)____________________________________________________________

____________

Строгая специфичность типовых фагов дает возможность типировать варианты внутри вида (фаговары). Фаготипирование имеет большое значение в эпидемиологии, так как позволяет установить источник инфекции и решить ряд других вопросов; Исследуемый материал (от больного или из объектов внешней среды) засевают методом бактериального газона, чашку делят на сектора, в каждый сектор вносят специфичный индикаторный фаг. После инкубации в термостате определяют фаговар культуры возбудителя.

Определите фаговар S.Typhimurium ________________________________ (на сегодняшний день выделено 90 фаговаров S.Typhimurium)

 

Список литературы:

1. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. МУК 4.2.1890-04 от 4 марта 2004 года

2. ГОСТ Р 51600-2000 Методы определения наличия антибиотиков http://docs.cntd.ru/document/gost-r-51600-2000

3. М. В. Гусев, Л. А. Минеева. Микробиология. — М: МГУ, 1992. — С. 56.

4. А. А. Воробьев. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. — МИА, 2003. — С. 44. — ISBN 5-89481-136-8.

5. Л. Б. Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. — Медицина, 1992. — С. 31-44. — ISBN 5-2225-00897-6.

6. Методические указания по бактериологической диагностике брюшного тифа, паратифа А, В и других заболеваний салмонеллезной этиологии http://bestpravo.ru/sssr/eh-dokumenty/r9k.htm