Работа №1. Подсчет эритроцитов камерным способом

Цель работы: Овладеть методикой подсчета красных кровяных телец.

Материалы и оборудование: кровь, 2-3% р-р NaCl, микроскопы, счетные камеры Горяева, покровные стекла, игла, спирт, вата, меланжеры. Камера Горяева - толстое стекло, разделенное желобками на опорные пластинки. Средние опорные пластинки ниже боковых на 0,1 мм (глубина камеры). Поперечной канавкой средние опорные пластинки разделены пополам, на каждой части опорных пластинок нанесены сетки для подсчета кровяных телец. В каждой сетке камеры Горяева имеется 25 больших квадратов, каждый из которых состоит из 16 маленьких. Сторона одного малого квадрата равна 1/20 мм, площадь - 1/400, объем жидкости над малым квадратом равен 1/4000 мм³.

Смеситель (меланжер) для подсчета эритроцитов имеет деление 0,5; 1,0; 101 (в расширенной части смесителя имеется красная бусинка).

Ход работы и техника подсчета: К камере Горяева притирают покровное стекло до появления радужных колец и под микроскопом знакомятся с сеткой.

В смеситель набирают кровь до метки 0,5 или 1,0. Обтерев кончик смесителя ваткой от приставшей к нему крови опустить его в 2-3% р-р поваренной соли и набрать его до метки 101 (если кровь была взята до метки 0,5; разбавление ее будет в 200 раз, а если до метки 1,0, то в 100 раз.)

Тщательно в течение 2-3 минут жидкость перемешивают, встряхивая меланжер, концы которого при этом зажимают 1 или 3 пальцами правой руки. Откладывают меланжер на 5-10 минут.

По прошествии этого времени после повторного перемешивания выпускают 2-3 капли раствора на ватку (т.к. они не содержат эритроцитов), а последующую каплю выпустить на среднюю опорную пластинку под притертое к камере покровное стекло, не допуская попадания пузырей воздуха.

Подсчет эритроцитов производится при большом увеличении (7*40) в 5 больших квадратах (каждый из них состоит из 16 маленьких). Рекомендуется подсчитывать эритроциты, расположенные внутри каждого маленького квадрата, а также на верхней и левой его сторонах. Подсчитав количество эритроцитов в 5 больших (или 80 маленьких квадратах), рассчитывают содержание эритроцитов в 1 мм³ крови.

Для этого используют формулу:

Х=	А* 4000 *200 (100)	или А*10000 (5000 при разведении в 100 раз), где

Х - содержание эритроцитов в 1 мм³ крови

А - количество эритроцитов, подсчитанных в 5 больших (80 маленьких) квадратах

1/4000 мм³ - объем жидкости над одним маленьким квадратиком

200 или 100 - разбавление крови

80 - количество маленьких квадратов

Записать в тетрадь результаты подсчета.

 

Работа №2. Подсчет лейкоцитов.

Цель опыта. Отработать технику подсчета лейкоцитов.

Материалы и оборудование: микроскопы, счетные камеры Горяева, покровные стекла, смесители для лейкоцитов, 1% р-р уксусной кислоты с метиленовой синькой (жидкость Тюрка), скарификатор, спирт, вата.

Ход работы: Для подсчета лейкоцитов берется кровь в смеситель (до метки 0,5 или 1) и разбавляется в 10 или 20 раз жидкостью Тюрка (до метки 11). Тщательно перемешивают, встряхивая меланжер, концы которого при этом зажимают 1 или 3 пальцами правой руки. Откладывают меланжер на 10-15 минут для того, чтобы уксусная кислота разрушила эритроциты, а ядра лейкоцитов окрасились метиленовой синью.

По прошествии этого времени после повторного перемешивания выпускают 2-3 капли раствора на ватку и затем одну каплю в счетную камеру под покровное стеклышко. Подсчет лейкоцитов ведут в счетной камере Горяева под малым увеличением микроскопа в 100 неразграфленных больших квадратах. Большой квадрат равен 16 малым.

Техника подготовки камеры Горяева для подсчета лейкоцитов та же, что и для эритроцитов.

Расчет количества лейкоцитов в 1 мм³ крови ведут по формуле:

Х=	А* 4000 *20 (10)	или А*50 (25), где

А - количество лейкоцитов, сосчитанных в 100 больших квадратах

1/4000 мм³ - объем жидкости над одним маленьким квадратом

20 (10) - разведение крови в 20 (или 10 раз)

1600 - количество малых квадратов в 100 больших квадратах.

Результаты подсчета записать в тетрадь.