Методика определения количества лейкоцитов

Подсчет количества лейкоцитов крови может быть произведен в счетной камере Бюркера с сеткой Горяева или в электронно-автоматических анализаторах («Целлоскоп», «Культер», «Техникан»).

Методика подсчета в камере Бюркера с сеткой Горяева

Принцип метода: аналогичен таковому подсчету эритроцитов, суть его состоит в точном отмеривании кро­ви и ее разведении в определенном объеме жидкости с по­следующим подсчетом клеточных элементов в счетной ка­мере и пересчете полученного результата на 1 крови.

Оборудование и реактивы:

1) смесители или пробирки для подсчета лейкоцитов;

2) 3% раствор уксусной кислоты, к которому прибавлено несколько капель метилвиолета или метиленового синего;

3)счетная камера;

4) микроскоп.

Смеситель для лейкоцитов отличается от такового для эритроцитов тем, что имеет более широкий просвет капил­ляра и меньший по величине резервуар. На смеситель нане­сены три метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10 либо в 20 раз (чаще разводят в 20 раз).

Ход исследования: при взятии крови для подсчета лей­коцитов с кожи предварительно удаляют ватным тампо­ном остатки крови и, слегка сдавливая палец, выпускают свежую каплю крови. При работе со смесителями кровь набирают до метки 0,5, затем разводят 3 % раствором ук­сусной кислоты до метки 11. Энергично встряхивают в те­чение 3 мин, после чего сливают 1-2 капли и заполняют счетную камеру. При работе с пробирками для подсчета лейкоцитов наливают 0,4 мл 3% раствора уксусной кисло ты и в нее выпускают 0,02 мл крови, отмеренной пипет­кой от гемометра Сали. Тщательно встряхивают пробир­ки, затем в жидкость опускают пипетку и, набрав содер­жимое, заполняют счетную камеру. Так как лейкоцитов гораздо меньше, чем эритроцитов, то для получения до­стоверного и точного результата подсчет производят в 100 больших (неразграфленных) квадратах. Обычно в одном большом квадрате находится 1-2 лейкоцита. Число лей­коцитов в 1 мкл крови рассчитывается аналогично расче­ту числа эритроцитов по формуле

X = (А х 4000 х В)/Б,

где X - количество лейкоцитов в 1 мкл крови; А - количе­ство лейкоцитов, сосчитанных в 1600 малых квадратах; Б - количество сосчитанных малых квадратов (1600); 4000 - величина, умножая на которую, мы получаем ко­личество клеток в 1 мкл.

Интерпретация полученных данных. Нормальное количество лейкоцитов: 4.0 – 9.0 х 10⁹/л. Уменьшение их числа в кро­ви называется лейкопенией, увеличение - лейкоцитозом.

Лейкоцитоз может быть абсолютным (истинным) и от­носительным (перераспределительным).

Абсолютный лейкоцитоз – наблюдается при острых воспалительных процессах, некрозе тканей, острых бактериальных инфекциях (за исключением брюшного тифа, бруцеллеза, туляремии и др.), аллергических состояниях, злокачественных опухолях (с деструкцией тканей), закрытых травмах черепа и кровоизлияниях в мозг, диабетической и уремической коме, шоке, острой кровопотере, как первичная реакция – при лучевой болезни. Значительное повышение количество лейкоцитов встречается при лейкозах.

От­носительный (перераспределительный) является следствием поступления лейкоцитов в ток крови из органов, служащих для нее депо. Это происходит после приема пищи (пищевой лейкоцитоз), горячих и холодных ванн, сильных эмоций (вегетососудистый лейкоцитоз), интенсивной мышечной работы (миогенный лейкоцитоз) и т.д.

Лейкопения. Лейкопения рассматривается как показатель угнете­ния функциональной способности костного мозга в ре­зультате воздействия токсических веществ (мышьяк, бен­зол и т.п.), некоторых медикаментов (сульфаниламиды, левомицетин, бутадион, иммуран, циклофосфан и т.п.), вирусов (гриппа, вирусного гепатита, кори и т.п.), микро­бов (брюшного тифа, бруцеллеза и т.п.), ионизирующей радиации, рентгеновского излучения и гиперспленизма (увеличение функции селезенки).

Лейкоцитоз и лейкопения редко характеризуются пропорциональным увеличением (снижением) суммарного числа лейкоцитов всех видов (например лейкоцитоз при сгущении крови); в большинстве случаев имеется увеличение (уменьшение) числа какого-либо одного типа клеток, поэтому применяют термины «нейтрофилез», «нейтропения», «лимфоцитоз», «лимфопения», «эозинофилия», «эозинопения», «моноцитоз», «моноцитопения», «базофилия».

При клинической оценке изменения количества лейкоцитов большое значение придается процентному соотношению отдельных форм лейкоцитов, то есть лейкоцитарной формуле.

Лейкоцитарная формула крови здорового человека:

Относительное количество Абсолютное количество

Базофилы……………………….0-1% 0-0,0650 х 10⁹/л

Эозинофилы…………………….0.5-5% 0,02-0,30 х 10⁹/л

Нейтрофилы: - миелоциты…………0% отсутствуют

- метамиелоциты……0% отсутствуют

- палочкоядерные…...1-6% 0,040-0,300 х 10⁹/л

- сегментоядерные….47-72% 2,0-5,5 х 10⁹/л

Лимфоциты……………………….19-37% 1,2-3,0 х 10⁹/л

Моноциты………………………….3-11% 0,09-0,6 х 10⁹/л

Подсчет лейкоцитарной формулы производят в окрашенных мазках периферической крови. Для правильной интерпрепатации результатов исследования лейкоцитарной формулы рекомендуется производить подсчет в абсолютных количествах, а не в относительных. Наиболее распространены методы окраски мазков по Романовскому-Гимзе, по Паппенгейму. Под иммерсией считают не менее 200 клеток, а затем выводят процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов. Анализ лейкограммы с учетом других показателей крови и клинической картины является ценным методом обследования, помогает в постановке диагноза и определении прогноза заболевания.

Основные причины нейтрофилеза.

1. Острые бактериальные инфекции – локализированные и генерализованные.

2. Воспаление или некроз ткани.

3. Миелопролиферативные заболевания.

4. Интоксикация.

5. Лекарственные воздействия (кортикостероиды).

6. Острые кровотечения.

Основные причины нейтропении.

1. Инфекции – бактериальные (брюшной тиф, бруцеллез, туляремия, паратифы) и вирусные (инфекционный гепатит, корь, грипп, краснуха и другие).

2. Миелотоксические влияния и супрессия гранулоцитопоэза (ионизирующая радиация; химические агенты – бензол, анилин, ДДТ; лекарственные воздействия – цитостатики и иммунодепрессанты; витамин-В₁₂-фолиеводефицитная анемия, острый алейкемический лейкоз, апластическая анемия).

3. Воздействие антител (иммунные формы) – гиперчувтвительность к медикаментам, аутоиммунные заболевания (СКВ, ревматоидный артрит, хронический лимфолейкоз), изоиммунные проявления (гемолитическая болезнь новорожденных).

4. Перераспределение и депонирование в органах – шоковые состояния, заболевания со спленомегалией и гиперспленизмом.

5. Наследственные формы (семейная доброкачественная хроническая нейтропения).

Основные причины эозинофилии.

1. Аллергические заболевания.

2. Паразитарные инвазии (трихинеллез).

3. Хронические поражения кожи - псориаз, пузырчатка, экзема.

4. Опухоли (эозинофильные варианты лейкоза).

5. Другие заболевания – фибропластический эндокардит Леффлера, скарлатина.

6. В фазе выздоровления при инфекциях и воспалительных заболеваниях (благоприятный прогностический признак).

Причины эозинопении (анэозинофилии).

1. Повышенная адренокортикостероидная активность в организме.

2. Брюшной тиф.

Основные причины базофилии:

1. Хронический миелолейкоз и эритремия.

Основные причины моноцитоза.

1. Подострые и хронические бактериальные инфекции.

2. Паразитарные инфекции – лейшманиоз, малярия.

3. Гемобластозы – моноцитарный лейкоз, лимфогранулематоз, лимфомы.

4. Другие состояния – СКВ, саркоидоз, ревматоидный артрит, инфекционный моноцитоз; в период выздоровления от инфекций, при выходе из агранулоцитоза, после спленэктомии.

Снижение числа моноцитов имеет значение главным образом при оценке лимфоцитарно-моноцитарного соотношения при легочном туберкулезе.

Основные причины лимфоцитоза.

1. Инфекции – острые вирусные (инфекционный мононуклеоз, корь, краснуха, ветряная оспа), хронические бактериальные (туберкулез, сифилис, бруцеллез), протозойные (токсоплазмоз).

2. Гемобластозы (лимфолейкоз, лимфомы).

3. Другие заболевания - гипертиреоз, аддисонова болезнь, витамин-В₁₂-фолиево-дефицитная анемия, гипо- и апластические анемии.

Лимфоцитопения наблюдается при СКВ, лимфогранулематозе, распространенном туберкулезе лимфоузлов, в терминальной стадии почечной недостаточности, острой лучевой болезни, иммунодефицитных состояниях, приеме глюкокортикоидов.

Увеличение или уменьшение числа отдельных видов лейкоцитов в крови может быть относительным или абсолютным. Если изменяется только процентное содержание того или иного вида лейкоцитов, то имеет место относительная нейтрофилия, относительная эозинопения и т.д. Увеличение или уменьшение абсолютного содержания какого-либо вида лейкоцитов, то есть количества данных клеток в единице объема крови, называют абсолютной нейтрофилией, абсолютной эозинопенией и т.д.

Сдвиг формулы влево (увеличение количества молодых форм нейтрофилов) – признак воспаления или некротического процесса в организме.

Сдвиг лейкоцитарной формулы вправо характерен для лучевой болезни и витамин-В₁₂-фолиеводефицитной анемии.

Отсутствие или значительное снижение числа всех видов зернистых лейкоцитов – гранулоцитов (нейтрофилов, эозинофилов, базофилов) обозначают термином агранулоцитоз. В зависимости от механизма возникновения различают миелотоксический (воздействие ионизирующего излучения, прием цитостатиков) и иммунный (гаптеновый и аутоиммунный агранулоцитоз).