Биохимические и молекулярно-биологические методы диа­гностики

1. Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Позволяет разделять сложные смеси органических соединений. Метод используют для обнаружения продуктов жизнедеятельности микроорганизмов в исследуемом материале (летучих жирных кислот, спиртов, нелетучих органических кислот и т.д.). Прин­цип метода основан на различной скорости движения соеди­нений, растворенных в инертном газе (подвижной фазе), через разогретую колонку, заполненную жидкими смолами (непо-

движная фаза). На выходе колонки имеется детектор, регистри­рующий присутствие соединения. Идентификацию веществ производят путем сравнения со стандартами.

2. Методы обнаружения нуклеиновых кислот возбудителя. Ну­клеиновые кислоты (НК) возбудителя можно обнаружить в исследуемом материале от больного с помощью методов гиб­ридизации НК (ДНК-зондов) и полимеразной цепной реак­ции — ПЦР (см. тему 3.2). Эти методы применяют преимуще­ственно для обнаружения плохо- или некультивируемых воз­будителей, присутствующих в материале в малых количествах (ВИЧ, вирус гепатита В, М.tuberculosis и др.) в связи с их высокой чувствительностью: метод нуклеиновых "зондов" позволяет обнаруживать НК возбудителя в концентрации Ю^-10 г/мл; ПЦР теоретически позволяет обнаружить единич­ные копии НК. Метод "зондов" является высокоспецифич­ным. При использовании ПЦР существует высокая вероят­ность получения ложноположительной реакции, что требует квалифицированной интерпретации полученных результатов. Не­обходимо также помнить о возможности контаминации материа­ла посторонними НК. ПЦР рационально использовать в качестве экспресс-метода для постановки предварительного диагноза, нуждающегося в обязательном подтверждении с помощью других более достоверных диагностических исследований.

• Серодиагностика и аллергодиагностика

1. Серодиагностика. Метод основан на обнаружении антител в сыворотке крови больного и определении динамики их на­растания в ходе заболевания. Для серодиагностики применяют различные иммунологические реакции (агглютинации, связы­вания комплемента, непрямой гемагглютинации и др., см. тему 10.2). В качестве стандартных антигенов используют живые культуры микроорганизмов (бактерий, вирусов, грибов) или диагностикумы — убитые взвеси микроорганизмов или экстра­кты из них, полученные химическим путем.

Серодиагностические исследования часто проводят и для эпидемиологического анализа инфекционной заболеваемости. С этой целью определяют наличие специфических антител у здоровых лиц, что свидетельствует о перенесении ими инфек­ции или о контакте с соответствующим возбудителем. Кроме того, серологические реакции используют наряду с другими иммунологическими показателями для оценки эффективности вакцинопрофилактики.

При серодиагностических исследованиях необходимо учи­тывать диагностический титр обнаруженных антител, т.е. такое разведение исследуемой сыворотки, начиная с которого поло­жительная реакция имеет диагностическое значение. Более вы­сокую информативность дают серологические исследования парных сывороток крови больного, взятых в начале болезни и

через разные промежутки времени в ходе ее развития. Диагнос­тическое значение имеет нарастание титра в 4 раза и более в динамике заболевания.

2. Аллергодиагностика. Кожно-аллергические пробы приме­няют для выявления гиперчувствительности к различного рода антигенам (аллергенам) при диагностике ряда инфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез, туляремия и др.), а также различных неинфекционных аллергических состояний (атопии и др.).

Кроме того, используют методы аллергодиагностики in vitro, позволяющие оценить состояние специфической сенсибилиза­ции лейкоцитов крови в отношении определенного антигена, например реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в присутствии специфического антигена (см. тему 10.4).