Фермента могут существенно отличаться от условий для оптимального

Режима синтеза биомассы. Поэтому условия среды в ходе протекания про-

Цесса ферментации контролируются и изменяются. Известны стадийные

Процессы в двух последовательных аппаратах. В первом создают условия

для развития мицелия; во втором – для синтеза и накопления фермента.

На промышленном уровне реализованы также проточные режимы, напри-

Мер, для получения глюкозоизомеразы с использованием бактериальной

Культуры Bacillus coagulans. Ферментацию проводят при дефиците глюко-

Зы и кислорода в среде (глюкозоизомераза ингибируется кислородом);

Максимальная продуктивность сохраняется длительное время, до 200 ч.

После завершения ферментации для предотвращения инактивации

ферментов культуральную жидкость охлаждают до 3–5°С и направляют

На обработку. После отделения мицелия культуральную среду освобож-

Дают от грубых взвешенных частиц и концентрируют под вакуумом или

Подвергают ультрафильтрации. В связи с термолабильностью многих

Ферментов процессы обработки ведут при контролируемых, часто пони-

Женных температурах. Глубокая очистка ферментов приводит к сущест-

Венной потере активности препаратов и также очень дорогостояща. Более

Того, высокоочищенные белки менее стабильны по сравнению с неочи-

Щенными. Поэтому при использовании растворимых ферментов редко

Пользуются полной очисткой. Тем более что в зависимости от сферы при-

1.4

1.3

1.2

1.1

1.0

0.9

0.8

0.7

Время, часы

сухой вес мицелия, г/100 мл

сухие вещества, %

активность α-амлазы, ед./1 мл

Рис. 3.1. Рост мицелия, образование α-амилазы и потребление субстрата

В глубинной культуре A. oryzae (по Р. В. Фениксовой, 1973).

1 – α-амилаза, 2 – мицелий, 3 – сухие вещества среды.

Менения требования к чистоте ферментных препаратов различны. Так, ряд

Ферментных препаратов, получаемых при поверхностной ферментации,

Выпускают в виде высушенных отрубей с остатками мицелия, а также вы-

Сушенных осадков белков или высушенных растворов. Товарные формы

Таких препаратов известны в виде сухих препаратов или растворов фер-

Ментов. Последние хранят при отрицательных температурах, с примене-

Нием стабилизаторов (соли кальция или магния, а также хлорид натрия,

Сорбит, бензоат и др.). Для получения очищенных препаратов ферментов

Применяют различные методы (осаждение солями или органическими

Растворителями, высаливание, сорбционную и хроматографическую очи-

Стку с использованием высокоселективных ионитов). Процесс завершает-

Ся стадией высушивания на распылительных или вакуумных аппаратах в

Щадящем температурном режиме, не допускающем больших потерь ак-

Тивности ферментов. После стандартизации продукт направляется потре-

Бителю.

ИММОБИЛИЗОВАННЫЕ ФЕРМЕНТЫ

Широкие перспективы открылись перед инженерной энзимологией в ре-

Зультате создания нового типа биоорганических катализаторов, так назы-

ваемых иммобилизованных ферментов. Термин «иммобилизованные фер-

менты» узаконен сравнительно недавно, в 1974 г. Сандэремом и Реем, хотя

Еще в 1916 г. Нельсон и Гриффи показали, что инвертаза, адсорбированная

На угле или алюмогеле, сохраняет свою каталитическую активность. Однако

Начало целенаправленных исследований, ориентированных на создание та-

Кого рода стабилизированных ферментных катализаторов, относится к сере-

Дине XX века, при этом широкий фронт работ и ощутимые успехи достиг-

нуты в последние 20–25 лет. Иммобилизация – это процесс прикрепления

Ферментов к поверхности природных или синтетических материалов, вклю-

Чение их в полимерные материалы, полые волокна и мембранные капсулы,

Поперечная химическая сшивка. Иммобилизацию также можно характери-

Зовать как физическое разделение катализатора и растворителя, в ходе кото-

Рого молекулы субстрата и продукта легко обмениваются между фазами.