Этапы выделения чистой культуры аэробов

6. Изучение смеси – мазок окраска по Грамму.

7. Разобщение бактериальных клеток в смеси и получение колоний:

· По Дригальскому – штрихами по поверхности агара (петлей с материалом делают штриховые движения по пластинчатому агару, к последних штрихах выросту единичные колонии).

· Метод серийных разведений Пастера в физ растворе.

· Метод серийных разведений Коха в расплавленном агаре.

8. Проверка частоты колоний (мазок → окраска по Граму → микрокопирование).

9. Пересев колоний на скошенный агар для накопления чистой культуры.

10. Идентификация микроорганизма по:

· Морфологическим свойствам

· Тинкториальным свойствам

· Культуральным свойствам

· Ферментативным свойствам

· Патогенным свойствам

· Антигенными свойствам

· Чувствительность к антибиотикам…

 

 

Выделение чистой культуры анаэробов:

 

6. Накопление анаэробов: смесь засевают на среду Китт-Тароцци и прогревают при t 80 ⁰С 10 мин, спорообразующие анаэробы споры сохраняются, а прочие вегетативные формы м/о погибают. Затем питательная среда культивируется, споры прорастают, и анаэробы размножаются и накапливаются и накапливаются.

7. Получение колоний:

· по Цейслеру – колонии анаэробов получают на поверхности агара в анаэростате

· по Вейнбергу – колонии получают в трубках Вейон-Веньяла.

8. Проверка частоты (мазок → окраска по Граму → микрокопирование) – все анаэробы Гр(+).

9. Пересев Колоний на среду Китт-Тароцци и накопление чистой культуры анаэробов.

10. Идентификация, определение вида анаэроба.

 

Другие способы выделения чистых культур.

1. Можно использовать оптимальные температуры (зависит от термофильности бактерии).

2. Выделение спор при прогревании смеси 10 минут при t 80 ⁰C

3. Использование феномена роения – распространение за территорию посева (посев делают в центре, а по мере роста бактерии обрастаю, поверхность агара, край колонии будет ЧК).

4. Метод Шукевича – выделение чистой культуры м/о обладающих ползучим ростом – на дно пробирки со скощенным агаром засевают материал, по мере деления бактерии ползут верх по агару, образую ЧК (Proteus vulgaris).

5. Фильтруемость бактерий – способность проходить через фильтры с определенной величиной спор.

6. Обработка смеси УФ-лучами, ультразвуком, антисыворотками, получение ЧК – устойчивы к этим факторам.

7. При электрофорезе смеси у анода или катода будут скапливать организмы с определенным зарядом.

8. Использование микроманипулятора (под микроскопом берут одну клетку и получают ЧК – клон на элективных питательных сред – потомство одной микробной клетки.

9. В питательные среды добавляют желчь, соли тиурита, NaCl, антибиотики, и выделяют ЧК устойчивых м/о к этим факторам.

10. Можно использовать дифференциально-диагностические среды.

11. Можно использовать биологический метод - внутрибрюшинно заражают смесью бактерий белых мышей и за счет тропизма, бактерии накапливаются в определенном органе.

 

Культуральным свойства бактерий.

Культуральные свойства м/о – это особенности роста бактерий на питательных средах.

 

На жидких питательных средах – бактерий вызывают:

· помутнение среды

· образование осадка придонного и пристеночного

· образование пленок на поверхности среды

 

На плотных питательных средах образуются колонии.

 

Колония – изолированное скопление м/о одного вида на плотной питательной среде, имеет определенный размер, форму, цвет, поверхность, структура, край.

 

Типы колоний

· S-колонии – гладкие, круглая форма, ровные края, гладкая поверхность.

· R-колонии – шероховатые, неровные края, исчерченная поверхность

· SR-колонии – промежуточные – слегка неровные края и поверхность.

 

Характеристика колоний.

 

Признаки	Описание свойств колоний
Размер	Проводится измерение диаметра колоний
Форма	Круглая, неправильная
Цвет	Красный, желтый… Беспигментные колонии имеют оттенок среды (сероватый на МПА)
Поверхность	Выпуклая, плоская, блестящая, матовая, гладкая, морщинистая, шероховатая, исчерченная…
Структура	Структура может быть: гомогенной, мелкозернистой, крупнозернистой, неравномерно-зернистой, волокнистой. При малом увеличении с опущенным конденсором изучается у края колонии изучается структура под малым увеличением, чашка дном вверх
Край	Изучается вместе со структурой. Может быть ровным, изрезанным, волнообразным, фестончатым
Консистенция	Определяется при взятии петлей для приготовления мазка. Консистенция м.б: слизистой (культура тянется – подозрение на наличие капсулы), влажная (легко берется) и сухая (крошится – подозрение на спорообразование)
Тинкториальные и морфологич св.	Изучаются соответствующие свойства бактерий, находящихся в колонии