Осаждение белков при нагревании.

Опыт 1. Качественный анализ аминокислотных смесей методом тонкослойной хроматографии.

Реактивы и оборудование: р астворы аминокислот 0,04 М, смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (15:3:7), раствор нингидрина в ацетоне 0,5%, пластины хроматографические,капиллярные пипетки, сосуд хроматографический с крышкой, палочки стеклянные, термостолик, спрей-камера, пульверизатор.

Проводят карандашом линию на расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластины. На линии на равном расстоянии размечают 4 точки. В пипетку набирают раствор первой аминокислоты. Прикасаясь кончиком пипетки к пластине в точке 1, выпускают раствор. То же проделывают для точек 2, 3, 4 с растворами оставшихся аминокислот и их смесью, каждый раз используя чистую пипетку.

Хроматограмму помещают в хроматографический сосуд, на дно которого налита смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (15:3:7) так, чтобы край пластины был погружен в проявитель на 1 см. Сосуд плотно закрывают крышкой и оставляют в нем хроматограмму на время, за которое проявитель пройдет по ней путь снизу вверх, равный примерно 10 см. Хроматограмму вынимают из сосуда, отмечают границу фронта проявителя и высушивают. На высушеннуюхроматограмму наносят в спрей-камере при помощи пульверизатора 0,5%-ный раствор нингидрина в ацетоне до равномерного (без подтеков) смачивания. Затем хроматограммунагревают. Позиции аминокислот на хроматограмме выявляются в виде фиолетовых пятен.

Идентификацию аминокислот можно осуществить по значению R_f (коэффициент распределения). Для этого измеряют расстояние, пройденное проявителем от линии старта до границы фронта проявителя, а так же расстояние от точки нанесения каждой аминокислоты до центра цветного пятна, образовавшегося в результате нингидриновой реакции. Путем деления величины пути, пройденного аминокислотой на хроматограмме, на величину пути, пройденного проявителем, находят значение коэффициента распределения (R_f) каждой аминокислоты-свидетеля. Такие же расчеты проводят с аминокислотами исследуемой смеси. Сопоставляя величины R_f аминокислот-свидетелей и аминокислот исследуемой смеси, делают заключение о природе аминокислот в составе изучаемой смеси. Аминокислоты, располагающиеся на одном уровне, идентичны.

 

1. Зарисуйте хроматограмму.

 

 

2. Рассчитайте значения Rf для всех веществ. Сопоставьте значения.

 

 

Вывод:

 

 

Опыт 2. Реакции осаждения белков.

Реактивы и оборудование: сыворотка крови, конц. азотная кислота, конц. соляная кислота, конц. серная кислота, 20% раствор сульфосалициловой кислоты, 5% раствор трихлоруксусной кислоты, насыщенный раствор сульфата аммония, сульфат аммония кристаллический измельченный, 5% раствор сульфата меди, 5% раствор ацетата свинца, пробирки, пипетки, спиртовки, воронки, фильтровальная бумага.

Осаждение белков при нагревании.

В пробирку наливают 0,5 мл раствора белка и нагревают.

Наблюдения:

 

 

Вывод: