Самостоятельная работа студентов. 1. Знакомство с питательными средами для культивирования микроорганизмов (демонстрация)

1. Знакомство с питательными средами для культивирования микроорганизмов (демонстрация). Для выделения чистых культур микроорганизмов и их идентификации (определения вида) разработан широкий набор питательных сред. Основой питательных сред является непищевое рентабельное сырье. Питательные среды должны содержать необходимые питательные вещества в легкоусвояемой форме, иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть изотоничными и прозрачными.

Питательные среды могут быть жидкими, полужидкими, плотными. В зависимости от целевого назначения питательные среды классифицируются следующим образом:

· простые (основные) питательные среды: мясо-пептонный бульон (МПБ – состоит из мясного отвара, содержащего минеральные вещества и факторы роста, 1% пептона в качестве питательной добавки и 0,5% хлорида натрия для придания изотоничности среды), мясо-пептонный агар (МПА – к МПБ для придания плотности добавляют 1,5-2% агара – полисахарида морских водорослей). МПА готовят в виде скошенной среды, столбика, пластинчатой среды в чашках Петри;

· элективные питательные среды предназначены для избирательного накопления и выделения микроорганизмов определенного вида из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. К этим средам относятся 1% пептонная вода (для культивирования холерного вибриона), свернутая сыворотка (для культивирования палочки дифтерии), желточно-солевой агар (для культивирования стафилокок­ков). Среда Плоскирева для культивирования шигелл – возбудителей дизентерии, содержит питательный агар с лактозой, раствор бриллиантового зеленого, минеральные соли и индикатор нейтральный красный; лактозоположительные бактерии на этой среде образуют колонии красного цвета с металлическим блеском, лактозоотрицательные – бесцветные.

· среды обогащения: магниевая среда, сахарный МПБ;

· дифференциально-диагностические среды предназначены для дифференциации видов бактерий при определении у них биохимических свойств.

Протеолитические свойства бактерий (например, у холерного вибриона) устанавливаются по их способности растворять желатин.

С ахаролитические свойства определяются на специальных питательных средах с углеводами и различными индикаторами. Например, среды Гисса содержат различные углеводы – глюкозу, мальтозу, лактозу, сахарозу или многоатомные спирты (маннит) и индикатор Андреде – кислый фуксин в растворе едкого натра. При разложении субстрата среда приобретает красный цвет. Среда Эндо состоит из лактозного агара с индикатором (основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Лактозоположительные бактерии образуют колонии красного цвета с металлическим блеском, лактозоотрицательные – бесцветные. Среда Левина представляет собой лактозный агар с индикатором в виде красителей – эозина и метиленового синего. Лактозоположительные бактерии образуют колонии красно-фиолетового цвета с металлическим блеском, лактозоотрицательные – бесцветные. Среда Ресселя – полускошенный питательный агар с лактозой, глюкозой и индикатором бромтимоловым синим. Микроорганизмы, разлагающие глюкозу до кислоты, изменяют первоначальный зеленый цвет среды в столбике в желтый цвет; скошенная часть приобретает синий цвет. Лактозоположительные бактерии меняют цвет столбика и скошенной части в желтый цвет.

Гемолитические свойства (в частности у стафилококков, стрептококков и других видов бактерий) определяют на кровяном агаре.

· синтетические среды состоят из растворов химических веществ в строго определенных дозировках. К ним относятся среды№ 199, Хенкса, Игла, Эрла, применяемые в вирусологии для культивирования клеток культур тканей;

· полусинтетические среды содержат наряду с химическими соединениями нативные компоненты, в частности, различные гидролизаты, дрожжевой экстракт, гидролизат кильки, растительные белки и т.д.;

· натуральные питательные среды представляют собой природные компоненты,например, яичные среды, картофельные и т.д.

· среды для анаэробов: Китт-Тароцци - питательный бульон с 0,5% глюкозы и кусочками печени для адсорбции кислорода, Вильсон-Блера (железосульфитный агар, на котором патогенные анаэробные клостридии образуют колонии черного цвета за счет восстановления сульфита натрия Na₂SO₃ в сульфид натрия Na₂S, который при соединении с хлоридом железа дает осадок сульфида железа черного цвета).

· консервирующие среды.

По консистенции среды бывают жидкими, полужидкими, плотными.