Жануарлардың қан сары суынан Leptospirainterrogans-қа қарсы антиденелерді анықтайтын иммуноферментті тест-жүйе

 

Талдаудың қағидасы

ИФТ-ның негізгі құрамдыры – иммуносорбент және

иммуноферментті конъюгат. Иммуносорбент –	ұяшықтары
		тазартылған лептоспироз антигендерімен
Анти-IgG-КРС	Фермент				сезімталдандырылған
антитело		(сенсибилизацияланған)	полистиролды
		планшет. Конъюгат – ақжелкек (хрен)
		пероксидазасымен конъюгацияланған, ірі
	Специфическое	қара	малдың	G	класындағы
	иммуноглобулиндерге қарсы антидене.
	антитело
		Планшет	ұяшықтарына	зерттелінетін
	Антиген Leptospira	сары	суды		құйған	кезде	ІҚМ
	лептоспирозы	қоздырғыштарының	тәнді
Твердая фаза
антиденесі антигендермен	қатты	фазада

қосылады да антиген-антидене кешенін түзеді. Түзілген кешендерді

 

тәнді иммуноферментті конъюгатттың көмегімен анықтайды. Байланыспаған бос компоненттерді шайып тастағаннан кейін ұяшықтарға пероксидаза ерітіндісін (сутегінің асқын тотығы) және ТМБ хромогенін қосады. Егер кешенде қатты фазада иммунопероксидазды конъюгат болатын болса ерітінді боялады.

 

Пероксидазды реакцияны стоп-реагент қосу арқылы тоқтатады және ұяшықтардағы ерітіндінің 450/620 нм. кезіндегі оптикалық тығыздығын өлшейді.

 

Талдауды жүргізудің негізгі кезеңдері

 

Процедура	Кешен
түзілуі

 

 

· Тазартылған лептоспирозды антигендермен сенсибилизацияланған полистиролды планшет

 

· Планшет ұяшықтарына үлгілерді сұйылту үшін 80 мкл-ден ерітінді және 20 мкл-ден бақылау мен сары су үлгілеріненгізу керек.

 

· 60 мин бойы 37 °С-та ұстайды (антиген-антидене кешені түзіледі).

 

· Ұяшықтарды шаюға арналған буферлік ерітіндімен 4 рет шаю.

 

· Ұяшықтарға конъюгаттың 100 мкл ерітіндісін енгізу

 

· 30 мин бойы 37°С –та ұстайды(конъюгатпен кешен түзеді).

 

· Ұяшықтарды шаюға арналған ерітіндімен 6 рет шаю.

 

· Ұяшықтарға 100 мкл сутегі асқын тотығы мен ТМБ-ның анықтаушы қоспасын енгізеді.

 

· 30 мин бөлме температурасында ұстайды

(боялады)

 

· Реакцияны 50 мкл стоп-реагент қосу арқылы тоқтату

 

· 450/620 нм кезінде оптикалық тығыздығын тіркеу

 

 

 

 

 

Сапа көрсеткіштерінің сипаттамасы

 

„DIA – Leptospirosis - C” тест-жүйесінің сезімталдығын және тәнділігін анықтау үшін лептоспиралардың әр түрлі сероварианттарына оң нәтиже берген (микроагглютинация реакциясы бойынша) сары судың 955 үлгісі, сондай-ақ МАР бойынша теріс нәтиже берген сары судың 1414 үлгісі зерттелінді. Нәтижесінде МАР бойынша оң нәтиже берген сары сулар ИФТ бойынша да оң нәтиже берді. Ал МАР бойынша теріс нәтиже берген 154 үлгі ИФТ бойынша оң нәтижеге ие болып шықты, оларды 14-28 күннен кейін МАР бойынша қайта тексергенде 120-сында оң нәтиже расталды.