Раздел 3. Лабораторно-практические занятия

Занятие № 1

 

1. Тема: Введение в биохимический практикум.

2. Форма учебного процесса: Лабораторно-практическое занятие.

3. Актуальность темы: Знания, полученные на данном занятии, будут применяться в будущей практической деятельности, навыки работы на колориметре - для вы­полнения практических работ в курсе клинической биохимии.

4. Цель общая:

4.1.1. Познакомиться с основными правилами проведения лабора­торных анализов, объектами биохимических исследований, основными методами, применяемыми в клинической биохимии.

4.1.2. Научиться работать на фотоэлектроколориметре (КФК), получить навыки работы с лабораторной посудой.

4.2. Конкретные цели:

Знать:

1. Правила техники безопасности при работе в биохимической лаборатории.

2. Принцип колориметрии и правила работы на КФК.

3. Принцип центрифугирования и области его применения.

Уметь:

1. Правильно пользоваться пипетками и другой мерной посудой.

2. Получить данные для построения калибровочного графика и построить его на примере определения содержания белка биуретовым методом.

 

Вопросы для самостоятельной подготовки студентов

1. Правила техники безопасности в биохимической лаборатории.

2. Значение биохимических анализов.

3. Оборудование биохимической лаборатории.

4. Мерная посуда и работа с ней.

5. Требования к анализируемому биологическому материалу.

6. Физико-химические методы в биохимии:

- колориметрия;

- центрифугирование;

- флюориметрия;

- пламенная фотометрия.

7. Способы оценки полученных результатов при фотоэлектроколориметрии:

- формула расчета;

- калибровочный график.

 

Учебно-исследовательская работа студентов на занятии

 

1. Построить калибровочный график на примере определения содержания белка биуретовым методом.

2. Определить содержание белка в предложенном биологическом материале биуретовым методом с использованием калибровочного графика.

 

Лабораторная работа

Определение белка биуретовым методом

 

Оборудование:	1.	Штатив с пробирками.
	2.	Пипетки на 0,1 мл и 5 мл.
	3.	КФК.
	4.	Кюветы на 1 см.
Реактивы:	1.	Биуретовый реактив.
	2.	Стандартный раствор белка (70 г/л).
	3.	0,9% раствор NaCl.
	4.	Сыворотка крови.

Принцип метода. Белки в щелочной среде образуют с сернокислой медью соединения сине-фиолетового цвета (биуретовая реакция). Интенсивность окраски пропорциональна концентрации.

Ход работы. В три пробирки внести реактивы согласно схеме:

Реактивы (мл)	Опытная проба	Стандарт. проба	Контроль. проба
Сыворотка	0,1	-	-
Стандарт.р-р белка (70 г/л)	-	0,1	-
0,9% раствор NaCl	-	-	0,1
Биуретовый реактив	2,5	2,5	2,5

Пробы хорошо перемешать, оставить на 15 мин при комнатной температуре. Колориметрировать опытную и стандартную пробы при зеленом светофильтре в кювете толщиной 0,5 см против контроля.

Концентрацию белка рассчитать по формуле:

 

Х = Е_ОП х С_СТ/ Е_СТ ,

 

где: Х – концентрация белка в опытной пробе;

Е_ОП – оптическая плотность опытной пробы;

Е_СТ - оптическая плотность стандартной пробы;

С_СТ – концентрация стандартного раствора белка.

 

Концентрацию белка можно определить по калибровочному графику.

 

 

Построение калибровочного графика

 

Для построения калибровочного графика берут три раствора с известной концентрацией белка в каждом из них. Эти образцы можно приготовить разведением исходного стандартного раствора белка концентрацией 70 г/л. Затем с каждым образцом проводят биуретовую реакцию как описано выше. Оптическую плотность этих растворов определяют на КФК. По результатам строят график зависимости оптической плотности от концентрации белка.

 

Занятие №2

1. Тема: Химия аминокислот, пептидов, белков и их функции.

2. Форма учебного процесса: Лабораторно-практическое занятие.

3. Актуальность темы: Знания, полученные на данном занятии, являются основой для изучения таких разделов биохимии как ферменты, обмен аминокислот и белков, биохимия регуляций. Они будут необходимы при обучении на клинических кафедрах.

4. Цель общая:

4.1.1. Повторить химию аминокислот и белков. Изучить их основные функции в организме.

4.2. Конкретные цели:

Знать:

1. Аминокислоты. Классификация. Свойства.

2. Пептиды. Классификация.

3. Белки. Строение. Свойства.

4. Белки плазмы крови. Функции.

 

Уметь:

1. Правильно пользоваться спиртовками, пипетками.

2. Проводить пробу Вельтмана и реакции осаждения белков кипячением.

3. Делать выводы по результатам проведенных опытов.

 

Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию

1. Аминокислоты, определение, классификация.

2. Функциональные группы аминокислот.

3. Физико-химические свойства аминокислот.

4. Биологическое значение аминокислот.

5. Определение пептидов, классификация, функции.

6. Белки. Определение, классификация. Функции.

7. Структуры белковых молекул. Физико-химические свойства белков.