Метод выделения дезоксирибонуклеопротеина из ткани зобной железы или селезенки.

Метод основан на способности ДНП растворяться в солевых растворах большой ионной силы и выпадать в осадок при снижении их концентрации.

 

47. Клинико-диагностическое значение количественного определения пировиноградной кислоты в моче. Количество пировиноградной кислоты в моче может значительно увеличиваться при ожирении, сахарном диабете и мочекаменной болезни. Пировиноградная кислота в больших количествах образуется при гликонеогенезе как промежуточный метаболит при превращении аминокислот и жирных кислот в глюкозу. Повышенное употребление белков и/или жира при дефиците углеводов приводит к переходу организма с гликогенеза на путь гликонеогенеза и выделения в мочу больших количеств пировиноградной кислоты, где и образуются камни из пирувата кальция.

 

48. Клинико-диагностическое значение определения общего белка биуретовым методом в сыворотке крови. ПРИНЦИП МЕТОДА. Белки, реагируя в щелочной среде с сульфатом меди, образуют соединение, имеющее розово-фиолетовую окраску. Интенсивность получаемой окраски, прямо пропорциональной концентрации белка в растворе, измеряется с помощью фотоэлектроколориметра.Результаты определения общего белка сыворотки крови могут быть ложно завышены при наличии липидемии, желтухи, гемолиза. Продолжительное наложение жгута повышает концентрацию всех белков в пробе. Пробы, полученные выше места внутривенной инфузии, могут дать ошибочно заниженные результаты из-за локальной гемодилюции.
Увеличение содержания белка более 90 г/л имеет место при гипериммуноглобулинемии, поликлональных или моноклональных гаммопатиях.
Снижение содержания белка ниже 60 г/л в сочетании с потерей белка наблюдается при белоктеряющих гастроэнтеропатиях, острых ожогах, нефротическом синдроме.
Понижение содержания белка, вызванное снижением синтеза белка, наблюдается при белковой недостаточности (тяжелая форма), хронических болезнях печени, синдроме мальабсорбции, нарушениях питания, а-γ-глобулинемии.

 

49. Изучение влияния желчи на активность липазы. Скорость д-я липазы в отдельных порциях жира молока можно узнать по кол-ву жирных кислот,обр-ся при гидролизе жира за определенный промежуток времени. Кол-во жирных к-т определяют титрованием щелочью в присут.фенолфталеина. рез-ты выражают в мл титрованного р-ра щелочи. Строят график.

 

50. Исследование действия пепсина. В основе метода лежит способность пепсина в жел.соке створаживать белок молока – казеиноген. Створаживание молочно-ацетатной смеси при рН 4,9 и t=25 пепсином происходит строго параллельно его способности переваривать белки.за единицу активности пепсина принимают то его кол-во,кот.при указанных условиях створаживает 5мл молочно-ацетатной смеси за 60с. Значение:желудочный сок в норме содержит 40-60ед.пепсина. при ахилии уропепсин в моче и пепсин в желуд.соке могут полностью отсутствовать,а при язв.болезни желудка кол-во пепсина резко увеличино.

 

51. Метод изучения влияния слюны,поджел.сока. Крахмал подвергается перевариванию в желудочно-кишечном тракте до образования продуктов, имеющих свободный полуацетальный гидроксил (мальтоза, глюкоза).

Для выявления продуктов переваривания применяют реакцию Троммера. Нарушение пищеварения вызывается недостатком ферментов и биохимическими или механическими нарушениями процессов всасывания веществ в кишечнике.

Нарушения переваривания углеводов проявляются при недостатке (врожденном или приобретенном) амилолитических ферментов. Основным признаком этой патологии служит непереносимость отдельных углеводов. Часто наблюдается непереносимость лактозы, особенно у детей раннего возраста, вскармливаемых в течение длительного времени грудным молоком. Синдром мальабсорбции - нарушение всасывания нутриентов из пищеварительного тракта.

Наиболее важным углеводом организма человека является глюкоза. Она поступает с пищей, в глюкозу превращаются углеводы в печени, из глюкозы могут образоваться все остальные углеводы в организме. Она является универсальным топливом. Глюкоза превращается в гликоген в печени, и гликоген служит источником глюкозы в организме. Ряд наследственных заболеваний связан с нарушением обмена гликогена. Эти болезни получили название гликогенозов. Они возникают в связи с дефицитом или полным отсутствием ферментов, катализирующих процессы распада или синтеза гликогена, и характеризуются его избыточным накоплением в различных органах и тканях.

 

53. Определение липопротеинов низкой плотности (ЛПНП) в сыворотке крови. формирование модифицированных ЛПНП играет критическую роль в раннем развитии и прогрессировании атеросклероза и рассматриваются как важные факторы локального воспаления и дестабилизации атеросклеротических бляшек. ЛПОНП и ЛПНП в противоположность липопротеинам высокой плотности ЛПВП образуют нерастворимые комплексы с гепарином в присутствии ионов марганца. В надосадочной жидкости, оставшейся после осаждения ЛПНП и ЛПОНП, остается α-холестерин или ЛПВП.
Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9—1,9 ммоль/л. Принцип метода: Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) и ЛПНП (липопротеины низкой плотности) осаждаются добавлением фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния.После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП (липопротеины высокой плотности) — фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.

 

54. Значение: Согласно данным экспериментальных и эпидемиологических исследований, обнаружена выраженная связь между высоким уровнем холестерина сыворотки крови, особенно ХС липопротеинов низкой плотности (ЛНП), низким уровнем ХС липопротеинов высокой плотности (ЛВП) и развитием атеросклероза. Кроме того, широко обсуждается, что повышенные уровни триглицеридов и липонротеинов очень низкой плотности (ЛОНП) также являются атерогенными. Принцип метода: Хиломикроны, ЛПОНП (липопротеины очень низкой плотности) и ЛПНП (липопротеины низкой плотности) осаждаются добавлением фосфорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния. После центрифугирования супернатант содержит ЛПВП (липопротеины высокой плотности) — фракцию, содержание холестерина в которой определяется ферментативно.

55. Определение общего холестерина в сыворотке крови по методу Илька. Холестерол в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной кислоты и серной кислоты дает зеленое окрашивание – метод Илька.

56.

57. Определение кетоновых тел в моче. Кетоновые тела - нормальный продукт липидного обмена. Значение кетоновых тел - энергетическое. Кетоз возникает при патологических состояниях, связанных с недостатком углеводов в тканях (сахарный диабет, голодание, мальабсорбция пищевых сахаров у детей младшего возраста, токсикозы беременности и др.). Кетоз сопровождается ацидозом тканей, что приводит к нарушению метаболизма. При этом определяется повышение уровня кетоновых тел в крови - кетонемия и появление их в моче - кетонурия. ПРИНЦИП МЕТОДА.Смесь нитропруссида Nа и аммиака при наличие кетоновых тел в тканях дает малиновое окрашивание.

58. Как вы изучали переваривание белков подж.ж. Белки и полипептиды,не расщепившиеся в желудке, подвергаются действию сока поджелудочной железы. Их переваривание мы изучали на лабораторных занятиях с помощью панкреатина. Панкреатин – сухой ферментный препарат, получ.из панкреатич.железы. О действии панкреатина можно судить по расщеплению белка фибрина, окрашенного генциановым фиолетовым или кармином,так как краска при этом переходит переходит в р-р. В 3 пробирки наливают по 3 мл панкреатина. 1 пробирку оставл.без изменений, 2 кипятят, 3 подкисляют 2%р-ром уксусной к-ты. Во все 3 пробирки добавляют по 100мг окраш.фибрина и помещают в термостат 38’ на 15-20мин. Отмечают окраш.жидкости,где фермент активен. Выводы

60. Клинико-диагностическое значение определения общего холестерина в сыворотке крови. Холестерин в присутс.уксусного ангидрида и смеси укс.и серной к-т даёт зелёное окрашивание. При нарушении жирового обмена хс может накапливаться в кроаи. Увеличение сод-я хс в крови (гиперхолистеринемия) наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете,механич.желтухе,нефрите, нефрозе, гипотиреозе. Понижение хс в крови (гипохолистеринемия) – при анемиях, голодании, туберкулезе,раковой кахексии,панкрематозной желтухе, поражении ЦНС,лихорад-х сост-ях,при введении инсулина

 

61. Качественные реакции на адреналин. 1. с хлорным железом. Адреналин обладает слабощелочной р-й,легко окисл-ся на воздухе с обр-м аденохрома,вследствие чего р-р окраш.в красный цвет. Р-я с хлорным железом хар-на для пирокатехинового кольца,входящ.в молекулу адреналина и норадр.2.диазореакция. при вз-и диазореактива с адреналином жидкость окрашивается в крас.цвет вследствие обр-я сложного соединения типа азокрасителя.

 

62. Обнаружение йода в препарате щитовидной железы. При разрушении тиреодина обр-ся иодид калия,из кот.йод легко вытесняется йодатом калия.Вытеснение йода из соли йодистоводородной к-ты яв-ся ОВР,где йодид калия служит восстанов-м, а йодат калия – окислителем. Выделивш-ся йод обнаруживается с помощью крахмала в кислой среде: 5KI+KO₃+3H₂SO₄=3I₂+3K₂SO₄+3H2O

 

64. Анализ желудочного сока. Анализ желудочного сока проводят для выявления заболеваний желудка и контроля за состоянием его выделительной функции в процессе лечения. Анализ желудочного сока является очень важным.Химический анализ содержимого желудка позволяет судить о кислотообразующей и ферментной функциях. Для исследования желудочного сока применяются такие реакции, как: цветная реакция на свободную соляную к-ту, кот.позволяет выявить наличие HCl – появляется синее окраш.; реакция на молочную к-ту-; реакция на кровь с бензидином – если желудочный сок содержит кровь, то проба развивает синее окрашивание. Для определения общей кислотности и свободной соляной кислоты используется метод титрования 0,1н раствором NаОН в присутствии соответствующих индикаторов (фенолфталеина и диметиламиноазобензола). Кислотность желудочного сока оценивается в единицах кислотности по количеству миллилитров 0,1н раствора NAOH, необходимого для нейтрализации 100 мл желудочного сока.