Иммунохимические методы определения липазы

Разработано множество иммунохимических методов определения липазы. Они включают как количественные, так и полуколичественные процедуры, основанные на агглютинации частиц латекса. Антитела к липазе адсорбируют к латексным частицам, и эти частицы смешивают с образцом. Присутствие липазы в исследуемом материале приводит к агглютинации частиц латекса [42].

Был предложен высокочувствительный и специфический иммунохимический метод, проводимый в варианте «сэндвича» [43]. Специфические антитела к липазе, конъюгированные с пероксидазой хрена, связывают панкреатическую липазу; величина поглощения пропорциональна количеству липазы в образце. Предел обнаружения составляет 300 нг/л; референтный интервал для здоровых взрослых от 7,7 до 56 мкг/л (среднее значение 23). Метод обладает широким диапазоном, превышающим в 20 раз верхний предел референтного значения. Важное преимущество метода — его способность определить низкое содержание липазы, характерное для муковисцидоза, хронического панкреатита и в некоторых случаях для опухолей поджелудочной железы.

В радиоиммунном методе используют кроличьи антитела к человеческой панкреатической липазе и 125I-меченую липазу. Средние значения для плазмы крови и мочи здоровых взрослых составляют 32 и 4,4 мкг/л соответственно.

Макроамилаземия (МАЕ) - это состояние, при котором в крови циркулируют комплексы нормальной сывороточной амилазы с белками или углеводами. Выделяют три формы МАЕ: первая - классическая (устойчивая гиперамилаземия, снижение уровня амилазы в моче, высокая концентрация макроамилазных комплексов в крови); вторая - гиперамилаземия, но активность амилазы в моче снижена незначительно, а соотношение макроамилазы и обычной амилазы в крови меньше, чем при первой форме; третья - нормальная активность амилазы в крови и моче, низкое соотношение макроамилазы и обычной амилазы в крови. Патогенез объясняют связью амилазы крови с острофазовыми белками при различных воспалительных, инфекционных заболеваниях, при мальабсорбции. Клинические проявления могут отсутствовать, иногда возможны боли в животе. Характерны гиперамилаземия и снижение активности амилазы в моче. Диагностика состоит в выявлении в крови макроамилазных комплексов (хроматография и др.).

В норме амилазо-креатининовый индекс не выше 3; превышение считается признаком панкреатита

52 Гаммаглутамилтранспептидаза (ГГТП), методы определения, клинико-диагностическое значение.

Переносит глутаминовую кислоту от глутатиона или другого γ-глутамилпептида на акцепторный пептид или на L-аминокислоты. Индуцируется алкоголем.

Ход определения ГГТ(измеряют фотометрически)

Опытная проба: в пробирку вносят 0,5 мл раствора субстрата и помещают в водяную баню при температуре 37°С, приливают 0,05 мл сыворотки крови; содержимое перемешивают и инкуби­руют точно 15 минут при температуре 37°С. Затем прибавляют 3 мл раствора уксусной кислоты и перемешивают. Холостую пробу ставят так же, как опытную, но сыворотку добавляют после инку­бации.

Измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм или на фотоэлектроколориметр (ФЭК) при длине волны 400—500 нм (фиолетовый или синий светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 1 сантиметр против холостой пробы. Окраска стабильна в течение нескольких часов.

Расчет активности производят по калибровочной кривой. По­строение калибровочной кривой: из основного калибровочного раствора готовят рабочие растворы.

Норма: мужчины — 10,4-33,8 МЕ/л, у женщин – 8,8-22 МЕ/л (определение проводить в пробе без гемолиза).

Содержание в органах - почки (локализован преимущественно в щетковидной каемке извитых канальцев, а в клубочках и собиральных канальцах ГГТП не обнаружен), в меньшем количестве в поджелудочной, печени, селезенке.

Основные процессы, повышающие активность ГГТ в сыворотке

-Цитолиз

-Холестаз

-Интоксикация алкоголем

-Опухолевый рост в печени

-Лекарственная интоксикация