Микробиологическая диагностика хламидиозов

Экспресс-тесты. В основе экспресс-тестов (рис.2) диагностики лежит метод иммунной хроматографии. Чувствительность данных тестов варьирует в пределах 20-50%.

 

Рис. 2 Экспресс-тест для диагностики хламидиоза

Бактериоскопический метод. Чувствительность данного метода применительно к обнаружению хламидий невысока, и составляет лишь 15-30%.

Серологические методы - РСК, ИФА, РИФ.

Молекулярно-биологические методы – полимеразная цепная реакция (ПЦР), лигазная цепная реакция (ЛЦР), метод ДНК-зондов и транскрипционной амплификации (ТА).

Систематическое положение микоплазм согласно классификации Берджи, 2001	Микоплазмы
Домен	BACTERIA
Тип	TENERICUTES
Класс	MOLLICUTES
Порядок	MYCOPLASMATALES
Семейство	Mycoplasmataceae
Род	Mycoplasma	Ureaplasma
Вид	M. gallisepticum, M. hominis, M. genitalium, M.haemofelis, M. hyopneumoniae, M. laboratorium, M. ovipneumoniae, M. pneumoniae	U. canigenitalium, U. cati, U. diversum, U. felinum, U. gallorale, U. loridis, U. parvum, U. urealyticum

 

Микоплазма (Mycoplasma) -- род мелких аспорогенных, не имеющих ригидной клеточной стенки грам- хемоорганотрофных аэробных или анаэробных организмов из семейства Mycoplasmataceae.

 

Отличительные черты микоплазм:

1. Отсутствует клеточная стенка, микоплазмыне способны синтезировать её компоненты. Функции клеточной стенки у микоплазм выполняет трёхслойная цитоплазматическая мембрана, богатая холестерином, который сообщает ей некоторую ригидность, поэтому микоплазмы устойчивы к осмотическому лизису, что отличает их от дефектных по клеточной стенке форм – сферопластов и протопластов.

2. Из-за отсутствия формообразующего каркаса – клеточной стенки, микоплазмы плеоморфны и могут образовывать кокковидные, нитевидные, шаровидные, ветвящиеся формы, что обусловило их название от греч. mykes, гриб, + plasma, нечто имеющее форму.

3. Микоплазмы не способны к образованию холестерина и получают его из животных тканей или питательных сред. Для культивирования микоплазм нужны питательные среды, содержащие холестерин (желточные среды).

4. Отсутствие клеточной стенки отражено в систематике этих микроорганизмов. Микоплазмы относят к типу Tenericuies (буквально «нежнокожие»), классу Mollicutes (буквально «мягкокожие»). Семейство микоплазм объединяет: микоплазмы, и уреаплазмы, включающих патогенные и сапрофитические виды.

5. M.genitalium — это самая мелкая из известных на сегодняшний день бактерий; ее геном составляет 580 т.п.о.

6. Микоплазмы считаются поверхностными паразитами клеток слизистых оболочек. Их часто рассматривают как оптимальных паразитов, так как вызываемые ими инфекции редко приводят к летальному исходу.

7. Микоплазмы размножаются бинарным делением, способны к почкованию и сегментации. По Граму окрашиваются отрицательно, но лучшие результаты даёт окраска по Романовскому-Гимзе.

 

Биологические свойства.

Микоплазмы растут на питательных средах богатых стеролами, жирными кислотами, являются факультативными анаэробами, не способны к синтезу пептидогликана, в связи с чем устойчивы к бета-лактамным препаратам, в т.ч. к пенициллину.

Микоплазмы относятся к привередливым микроорганизмам, они растут на средах с добавлением нативной сыворотки, холестерина, нуклеиновых кислот, углеводов, витаминов и различных солей. На плотных средах образуют характерные мелкие полупрозрачные колонии с приподнятым зернистым центром, придающим им вид «яичницы-глазуньи». На средах с кровью некоторые виды микоплазм дают а- и бета-гемолиз.

В организме человека они прикрепляются к мембране клетки, выделяя продукты метаболизма и токсические субстанции, они нарушают функции клетки, приводят к развитию воспаления (мембранные паразиты). Рост микоплазм подавляют тетрациклины, макролиды; не действуют антибиотики, подавляющие синтез клеточной стенки (бета-лактамы), а также рифампицин, налидиксовая кислота.

Микоплазмы имеют адгезины, ответственные за прикрепление к клеткам хозяина. Некоторые компоненты микоплазменной клетки могут действовать как суперантигены, и в литературе описано несколько случаев аутоиммунных реакций. Микоплазмы имеют факторы ускользания от действия иммунной системы. Микоплазмы способны проникать в клетки хозяина и вызывать слияние клеток, апоптоз.

 

РЕСПИРАТОРНЫЕ МИКОПЛАЗМЫ

Мicoplasma pneumoniae имеют типичную морфологию микоплазм. На питательных средах дают видимый рост на 5-10-е сутки. Для формирования характерных колоний типа глазуньи необходимо несколько пересевов. У М. pneumoniae выявлен группоспецифический антиген.

 

Основные факторы патогенности:

Адгезины – поверхностные белки обусловливают взаимодействие с гликопротеиновыми рецепторами, содержащими нейраминовую кислоту, на поверхности клетки хозяина, что имеет ведущее значение в развитии начальной фазы инфекционного процесса.

Эндотоксин - проявляет пирогенный эффект, вызывает тромбогеморрагические поражения, коллапс и отёк лёгких.

Гемолизины и экзотоксины -.вызывают блокаду мукоцилиарного транспорта, а затем и гибель эпителия воздухоносных путей.

Перекрёстно реагирующие антигены приводят к аутоиммунным поражениям (артритаи и кожнымпоражениям) и ускользанию от действия иммунной системы.

Мелкие размеры способствуют проникновению через ГЭБ с развитием менингита.

 

Механизм передачи. Аэрозольный. Эпидемическое распространение часто получают в закрытых коллективах – домах престарелых, домах инвалидов, детских домах.

 

Приводят к развитию респираторного микоплазмоза: 1) в виде ограниченной инфекции верхних дыхательных путей; 2) в виде пневмонии.

Микоплазменные пневмонии носят обычно очаговый характер, реже — сегментарные, долевые. Обычно имеют субклиническое течение и переносятся на ногах. Внереспираторные проявления микоплазменной пневмонии включают гемолитическую анемию, менингиты, мио- и эндокардиты, реактивные артриты и др.

 

Микробиологическая диагностика. Применяют бактериологические и серологические методы.

Материал для исследований — слизь из глотки, мокрота, плевральный выпот, биоптаты легочной ткани.

Антигены М. pneumoniae в исследуемом материале выявляют с помощью РИФ, РПГА, ИФА и др. Выделение возбудителя микоплазменной пневмонии проводят посевом на питательные среды.

 

Лечение. Антибиотикотерапиямакролидами и тетрациклинами. Средства специфической профилактики микоплазменной пневмонии находятся на стадии разработки.

 

УРОГЕНИТАЛЬНЫЕ МИКОПЛАЗМЫ

M.genitalium рассматриваются как патогенные микроорганизмы. Другие виды микоплазм (M.hominis, M.fermentans, U.urealyticum) относятся к условно-патогенным. M.hominis и U.urealyticum присутствуют в уретре, влагалище, прямой кишке у 20–75% здоровых людей. Обязательному лечению подлежит урогенитальная микоплазменная инфекция, вызванная M .genitalium, другими же видами микоплазм – при наличие показаний.

 

Пути инфицирования. Генитальные микоплазмы передаются при половом контакте, при прохождении плода через половые пути матери.

 

M. hominis, U.urealyticum, М. genitalium вызывают:

1. Микоплазмозы (уреаплазмоз) – воспалительные заболевания органов мочеполовой системы у мужчин и женщин;

2. Патологию беременности, плода и новорожденного: неразвивающаяся беременность, выкидыши, преждевременные роды, раннее излитие околоплодных вод, лихорадку во время родов и в послеродовой период у матерей. При интранатальном заражении могут приводить к поражениям глаз, у новорожденных девочек может развиться микоплазмоз органов мочеполовой системы. У новорожденных детей M.hominis u U.urealyticum могут быть выделены из полости рта, носа, глотки, гениталий, мочи, причем у девочек чаще, чем у мальчиков. Колонизация мочеполовых путей у детей транзиторна и исчезает довольно быстро, но у 5–20% она сохраняется и в пубертатном возрасте.

3. Изменения в структуре сперматозоидов, приводя к мужскому бесплодию (уреаплазмы прикрепляются к головке сперматозоида в средней его части, что может снижать их подвижность и фертильность);

4. Женское бесплодие.

M. hominis обычно вызывает: 1) бактериальный вагиноз в ассоциации с другими микроорганизмами гарднереллами, превотеллами; 2) воспалительные заболевания органов малого таза.

U.urealyticum обычно вызывает: 1) осложнения беременности (аборты, мертворождения и рождения детей с низкой массой тела) и инфекцию у новорожденных; 2) уретрит у мужчин (негонококковый уретрит); 3) уреаплазменный простатиты.

M.genitalium— вызывет ИПП: уретрит, цервицит, эндометрит, воспалительные заболевания органов малого таза. M. genitalium открыт позднее, чем остальные генитальные микоплазмы, — в 1981 году, изучен хуже, чем другие генитальные микоплазмы из-за трудности выращивания на питательных средах. Данные об этиологической роли этого микроорганизма в развитии воспалительных заболеваний урогенитального тракта как женщин, так и мужчин стали накапливаться в связи использованием ПЦР.

 

Микробиологическая диагностика. Классический метод выявления генитальных микоплазм— культуральный метод. Этот метод дает возможность оценить количество микоплазм, которые содержатся в исследуемом материале. Многие исследователи используют количественные критерии в диагностике, полагая, что концентрация уреаплазм более 10⁴ КОЕ/мл имеет диагностическое значение, в то время как более низкие концентрации не должны учитываться, поскольку в таких количествах микоплазмы/уреаплазмы могут находиться у здоровых людей

ПЦР и ПЦР в реальном времени позволяют выявлять ДНК микоплазм, использование ПЦР в реальном времени предпочтительнее, так как позволяет определять концентрацию микоплазм или уреаплазм в материале.