Лабораторная диагностика сальмонеллезных гастроэнтеритов.

Основные возбудители: S. typhimurium, S. heidelberg, S. enterica, S. derby и др

Основным возбудителем сальмонеллёзов в последние годы стала S. enterica. Вид S.enterica имеет 7 подвидов: S.choleraesuis, S.salamae, S.arizonae, S.diarizonae, S.houtenae, S.bougori, S.indica.

1.Забор материала.

а. Испражнения исследуют с первых дней заболевания и до выписки больного из cтационара: в первый раз — до начала антибактериальной терапии, в последующем — после окончания (не ранее 48 ч). Вероятность выделения сальмонелл из испражнений наибольшая на 1 нед заболевания, на 2 и 3 нед она снижается в 2-6,7 раза соответственно. При гастроинтестинальной форме возбудителя чаще выделяют из испражнений преимущественно на 1 нед. При патологических примесях в испражнениях (слизь, кровь, гнои и т.п.) их включают в отбираемую пробу.

б. Рвотные массы и промывные воды желудка забирают в объёме до 100мл. Для исследования используют первые порции промывных вод, полученные без применения дезинфицирующих средств. При кислых значениях рН рвотных масс перед посевом их нейтрализуют 10% раствором бикарбоната натрия, промывные воды центрифугируют 15 мин при 3 000 об/мин и в дальнейшем используют осадок. В случае невозможности центрифугирования допускают посев нативного материала.

в. Жёлчь (дуоденальное содержимое) отбирают в стерильные пробирки. При этом отдельно собирают дуоденальное содержимое, пузырную жёлчь и жёлчь из жёлчных протоков (порции А, В и С). Кислая среда, белесоватый оттенок, хлопья делают материал непригодным для бактериологического исследования.

г. Моча. Забирают после тщательного туалета наружных половых органов; первую порцию отбрасывают, остальную в количестве 20-30 мл собирают в стерильную посуду. Мочу центрифугируют 15 мин при 3 000 об/мин, для исследования используют осадок. Однако допускают высев и нативного материала. С наибольшей частотой сальмонеллы в моче обнаруживают на 2-3 нед заболевания.

д.Спинномозговая жидкость.

Исследуют при менингеальном или менингоэнцефалитическом синдроме. Пробу (3-5 мл) помещают в стерильную пробирку и доставляют в, лабораторию, предохраняя материал от замораживания (можно использовать термос). К. Дополнительные материалы для исследования — биоптаты костного мозга (0,5-0,75 мл засевают на среду обогащения), мокрота (гнойные комочки засевают на среду Плоскирева и КА), розеолы (скарифицируют, наносят 1-2 капли жёлчного бульона, отсасывают и засевают на жёлчный бульон), молоко кормящих матерей. При необходимости (при оперативных вмешательствах или летальном исходе) для исследования отбирают операционный и секционный материал. Масса пробы должна быть не менее 20 г.

Забор смывов с оборудования и других объектов окружающей среды проводят стерильными ватными или ватно-марлевыми тампонами. Непосредственно перед взятием смыва тампон увлажняют средой обогащения (забуференная пептонная вода с рН 7,0), наклоняя пробирку; излишек влаги отжимают о стенку пробирки. Смывы берут с площади не менее 100 см2, если нет специальных указаний для данного объекта. При взятии смывов с яичной скорлупы один тампон используют для исследования 10 яиц.

2. Посев на питательные среды

а. Среды. В качестве сред обогащения используют селенитовый бульон с аминопептидом селенитовую и магниевую среду, тетратионатовый бульон Мюллера, среду Кауффмана 20% жёлчный бульон. Среди дифференциально-диагностических сред для первичных посевов материала и высевов со сред обогащения выделяют высокоселективные (например, висмут-сульфитный агар или агар с бриллиантовым зелёным), среднеселективные (среда Плоскирева, слабощелочной питательный агар) и низкоселективные (агар Эндо и Левина}. На средах для первичной идентификации (агар Клиглера, комбинированная среда по Олькеницкому, среда Ресселя) определяют ферментацию лактозы (на среде Олькеницкого — и сахарозы), глюкозы, способность образовывать сероводород и газ, гидролиз мочевины. Для биохимической идентификации используют среду с мочевиной по Кристенсену, среду с мочевиной по Преусу, среду Кларка, среды с углеводами, среды для определения индолообразования, среды с аминокислотами (лизином, орнитином, аргинином), глицериново-фуксиновый бульон Штерна и полужидкий агар для определения подвижности.

б. Подозрительные колонии (не менее трёх) пересевают в пробирки со скошенной или одной из комбинированных сред (Олькеницкого, Клиглера, Ресселя). В случае эпидемической вспышки из подозрительных колоний (параллельно с пересевом на комбинированную среду) проводят высев на МПА для последующей постановки реакции агглютинации. Результаты этой реакции требуют подтверждения на этапе завершения биохимической идентификации. Одновременно изучают морфологию и тинкториальные свойства бактерий, готовя мазки и окрашивая их по Граму. При отсутствии подозрительных колоний чашки с висмут-сульфитным агаром оставляют в термостате еще на 24 ч, после чего просматривают и при обнаружении подозрительных колоний продолжают исследования. В противном случае работу с посевами прекращают. Возбудитель паратифа В может давать сплошной слизистый рост или феномен валообразования (образование слизистого валика по периметру колоний).

в. Для дальнейшей работы отбирают колонии, уреазаотрицательных бактерий, ферментирующих глюкозу, неферментирующих сахарозу и образующих H₂S. Культуры, пересеянные со среды Олькеницкого в среду Гисса с маннитом, 1 % пептонную воду для определения образования индола и в полужидкий агар для определения подвижности. При выделении культур, имеющих ферментативные свойства, характерные для сальмонелл, изучают антигенную структуру в реакции агглютинации на стекле с О - и Н-агглютинирующими диагностическими антисыворотками, а также определяют биовары. По результатам реакции агглютинации ставят окончательный бактериологический диагноз, а исследование прекращают.

г. В последнее время широко распространились дифференциально-селективные ксилозо-лизин-деоксихолатные (XLD-агар) среды для сальмонелл и шигелл (SS-агар); выросшие на них колонии сальмонелл красные с чёрным центром (за счёт образования H₂S). Однако эти среды не более селективны, чем висмут-сульфитный агар или агар с бриллиантовым зелёным.

3. Серологические исследования проводят для диагностики, а также выявления и дифференциации различных форм носительства.