Методы диагностики ВИЧ-инфекции и носительства ВИЧ.

Основным методом лабораторной диагностики является обнаружение вирусоспецифических антител в сыворотке крови.

Антитела к ВИЧ появляются, как правило, начиная от 3-х недель и до 3-х ме-сяцев, а иногда их появление может затянуться на целых 6 месяцев после инфи-цирования вирусом. Обычно этот период называется «периодом окна» или «сероконверсионным окном». В этот период тест на антитела к ВИЧ дает отри-цательный результат, хотя человек на самом деле инфицирован вирусом. Это обусловлено тем, что нет достаточного количества антител, которые могли бы определяться лабораторным методом. В таких случаях, когда нельзя исключить заражение за последнее время, следует рекомендовать повторное обследование.

Ни один тест не дает, 100%-ой гарантии выявления ВИЧ!!!

Методы диагностики:

1. Иммуноферментный анализ (ИФА) – (английская аббревиатура - ELLISA)

Используется тест-система «Рекомбинант-ВИЧ» - это десятикомпонентный комплекс, основным реагентом которого является концентрированный очищенный антиген вируса СПИД, сорбированный на поверхности лунок полистироловых пластин. Один набор рассчитан на 180 исследований. Результаты ИФА учитывают спектрофотометрически при длине волны 492 нм, а при его отсутствии – визуально. Исследуемая сыворотка расценивается как положительно реагирующая, если значение оптической плотности при её взаимодействии с вирусным антигеном превосходит не менее чем в три раза, аналогичный показатель в контроле отрицательной сыворотки.

При визуальном учете реакция считается положительной, если имеются отчетливые различия в интенсивности окрашивания при реакции исследуемой сыворотки по сравнению с контрольной отрицательной сывороткой.

При обнаружении положительно реагирующей сыворотки данный образец исследуют повторно. При повторном получении положительного результата с помощью ИФА проверяют новую порцию сыворотки того же человека.

Если и в этом случае результат будет положительный, сыворотку исследуют дополнительно методом иммунного блотинга или иммунофлюоресценции.

Если при повторном исследовании или при исследовании новой порции сыворотки от того же человека получен отрицательный результат, а также при отрицательном результате анализа сыворотки методом иммунного блотинга, сыворотка признается не содержащей антител к вирусу СПИД.

Существенным недостатком ИФА является значительное количество ложноположительных реакций с сыворотками крови больных с аутоиммунными процессами.

Частота ложноположительных реакций существенно возрастает при исследовании длительно хранившихся сывороток, а также сывороток, подвергающихся многократному замораживанию.

2. Иммуноблотинг – тестирование на наличие антител к отдельным вирусным антигенам – является специфическим и применяется для обследования лиц, серопозитивных при обследовании с помощью ИФА.

Иммуноблодинг совмещает разрешающую способность электрофореза и иммуноферментного анализа. Получают разгонку антигенов вируса на геле или бумаге при помощи электрофореза, затем обрабатывают сывороткой больного и меченой ферментом сывороткой против сыворотки человека.Методика идентификации вирусспецифических белков HIV определяет белки сердцевины и поверхностной оболочки вируса СПИД – р15-18, р24-25, р41-45, р53-55, р64.

Положительным результатом анализа исследуемого образца сыворотки следует считать выявление антител к вирусным белкам р41, р110.

Ложноположительные сыворотки в иммуноблотинге выявляются с частотой 1:4.

3. Опасность ложноположительный реакций заставляет использовать разнообразные методы к повышению достоверности полученных результатов. Для этого применяют различные модификации иммуноблотинга, реакции конкурентного иммуноферментного анализа, радиоиммунопреципитации, прямой и непрямой иммунофлюоресценции.

При подозрении на ВИЧ- инфекцию и при отрицательных реакциях на ВИЧ- 1 используется диагностикум ВИЧ-2. За рубежом также применяется лабораторная диагностика на нахождение вирусного генома в полимеразной цепной реакции.

4. Кроме серологического метода диагностики ВИЧ-инфекции, который позволяет определить вирус косвенным методом, количество вируса в биологических средах может определяться с помощью электронной микроскопии, а также с помощью биохимического метода для определния обратной транскриптазы или биологического метода (заражение культуры чувствительных клеток).

Культивирование вируса in vitro проводится в 2 биологических средах -- в культуре клеток, лимфоцитов хелперов с добавлением различных стимуляторов роста -- фитогемагглютинина и других, существует эффект цитопатического действия, который выражается в образовании симпласта, то есть стабильной клетки из Т-лимфоцитов, межклеточные перегородки которых сливаются образуя огромные пласты или сети, представляющие как бы одну клетку имеющую 200-300-500 ядер. В культуре накапливаются миллионы и миллиарды копий вируса. Подобная культура используется для накопления вирусов с целью получения диагностических препаратов.

Второйбиологической моделью для культивирования вируса являются животные - специальные чистолинейные кролики, шимпанзе, гиббоны. Вирус в лабораторных животных размножается, но каждое из них является тупиком: от одного к другому животному и от животного к человеку этот вирус не передается, но вирус можно накапливать, можно моделировать патогенез заболевания.

5. Для косвенного подтверждения диагноза СПИД могут быть использованы общие иммунологические реакции:

- определение общего количества лимфоцитов и числа Т-хелперов (оба показателя снижены);

- соотношение Т-хелперы: Т-супрессоры (у здоровых лиц 1,8-2,2; у больных СПИД – меньше 1,0);

- уменьшение числа естественных киллеров;

- уменьшение выработки эндогенного интерферона.

Следует учитывать повышение уровня сывороточных иммуноглобулинов в сыворотке крови!

При внутрикожном введении различных бактериальных или грибковых антигенов отмечается снижение интенсивности аллергических реакций и нередко отсутствие отрицательных результатов тестов с туберкулином, бластомицином, гистоплазмином, кондидином, трихофитином, кокцидиоидином.

Проблемы лечения и специфической профилактики ВИЧ-

Инфекции.

За прошедшие с момента открытия вируса годы в мире для лечения ВИЧ-инфекции предложено большое количество различных препаратов. Ни один из них не является панацеей.

Попытка восстановления иммунной системы не увенчалась успехом. Применявшиеся α- и γ-интерфероны, интерлейкин-2 показали неубедительные результаты, циклоспорин А не дал лечебного эффекта, при пересадке костного мозга отмечалось временное уменьщение кожной аллергии и увеличение числа лимфоцитов.

Методикой лечения ВИЧ-инфекции занимаются ведущие центры мира, однако до сих пор не найдены средства для радикального излечения инфицированных.

В настоящее время в Беларуси лечение ВИЧ-инфекции проводится азидотимидином (АЗТ, АТ), который выпускается под коммерческим названием «тимизид» (Ассоцисация «АЗТ», Россия) в капсулах по 0,1 и «Retrovir», «Zidowudine» («Wellcome», Великобритания) в капсулах по 0,1 и 0,25 в форме сиропа. Препарат применяется перорально в суточной дозе 0,6 – 0,8 г (детям из расчета 0,01 г/кг) в 3 – 4 приема. АЗТ назначается по непрерывной схеме или курсами продолжительностью не менее 3 месяцев под контролем общего анализа крови.

Противовирусная терапия проводится при уровне СД4 лимфоцитов меньше 200 в 1 мм³ крови по непрерывной схеме, а при СД4 меньше 500, но больше 200 - курсами по 3 месяца с трехмесячными интервалами.