Электрофоретические исследования

Исследование содержания белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на фильтровальной бумаге проводится при изучении активности заболеваний.

Поиски более точных критериев определения активности воспалительного процесса вызваны тем, что существующие методы оценки активности процесса недостаточно объективны и чувствительны. Изменение содержания белковых фракций, особенно а_г и а₂-глобулинов, расценивается как показатель активности воспалительного процесса. При острых воспалительных процессах в сыворотке крови возрастает количество а- и особенно аг-гло-булинов. При переходе процесса в хронический содержание a-глобулинов нормализуется, а у-глобулинов увеличивается. Повышение количества иг-глобулинов имеет место при процессах, сопровождающихся экссудацией, распадом, некрозом и при всех воспалительных изменениях.

Глобулины тесно связаны с образованием антител и играют большую роль в иммунологических реакциях организма.

Данные о состоянии белков крови можно использовать, решая вопрос об активности процесса и эффективности лечения при туберкулезе различных локализаций. Нарушение обмена веществ в организме и изменение химизма крови имеют место при различных формах и в разных фазах туберкулезного процесса. Нарушения в органах и тканях соответственно отражаются на биохимических показателях крови. При туберкулезе легких у всех больных в фазе обострения наблюдались закономерные сдвиги в показателях обмена веществ: снижение уровня белка и диспротеинемия, снижение уровня альбуминов и увеличение содержания сц-, aj- и ^-глобулинов [Рози-на Р. П. и др., 1962; Слеповронский Б. В., 1964, и др.]. При затихании процесса наблюдались увеличение количества альбуминов, нормализация содержания аг-глобу-линов, сдвиги в сторону нормализации уровня у-глобули-нов.

Тяжесть процесса отражалась на сроках нормализации протеинограммы. У больных туберкулезным менингитом и туберкулезом почек получены аналогичные данные об изменениях в протеинограмме при активном процессе и при эффективном лечении.

При изучении других показателей в активной стадии легочного туберкулеза легких — содержания глюкопро-теидов с помощью дифениламиновой реакции (ДФА), гиалуроновой кислоты, гиалуронидазы, реакции гемаг-глютинации Мидлбрука —Дюбо — получены следующие данные: ДФА была положительной при активном туберкулезе примерно в половине случаев. Повышение содержания гиалуроновой кислоты было непостоянным. Содержание гиалуронидазы изменялось мало. Таким образом, диагностическая ценность этих исследований имеет относительное значение.

Большой опыт по изучению биохимических сдвигов, наблюдаемых на различных стадиях течения туберкулеза легких, не может быть целиком использован при туберкулезе глаз, поскольку специфический процесс в различных органах и тканях протекает с особенностями, присущими различным тканям.

В офтальмологии возрастает интерес к углубленному изучению иммунобиологического состояния, биохимических сдвигов в организме на разных этапах воспалитель-

ного процесса, а также нарушений обменных процессов. Это вызвано тем обстоятельством, что существующие методы диагностики и определения степени активности процесса недостаточно чувствительны. Исследования проводились с целью разработки более чувствительных и объективных методов, характеризующих воспалительный процесс в различных отделах глаза, в большинстве случаев— для определения биохимических показателен влаги передней камеры и сыворотки крови.

Большой интерес представляли исследования проте-инограммы влаги передней камеры и сыворотки крови для суждения о течении воспалительного процесса в глазу. При активных иритах ревматической этнологии в про-теинограммах влаги передней камеры отмечались снижение количества альбуминовых и у-глобулиновых фракций и увеличение содержания а-глобулинов. При хронических заболеваниях в протеинограммах сыворотки крови и влаге передней камеры наблюдались увеличение содержания альбуминовой и снижение уровня а- и у-глобули-новой фракций.

I. Francois и S. Evan (1958) разработали метод микроэлектрофореза влаги передней камеры. Проведенные ими исследования показали, что содержание белковых компонентов в камерной влаге и сыворотке крови было неодинаковым: во влаге передней камеры процент альбуминов был ниже, а процент у-глобулинов выше, чем в сыворотке, а содержание ^-глобулинов было почти одинаковым. Повышение содержания у-глобулинов при низком проценте альбуминов наблюдалось при хроническом течении ревматического процесса.

Отечественные офтальмологи изучали протеинограм-му при различных заболеваниях глаз. Г. А. Соколовский (1964) исследовал методом электрофореза протеинограм-мы сыворотки крови у больных различными заболеваниями глаз (воспалительного, аллергического и дистрофического характера). При воспалительных процессах различной этиологии отмечено снижение количества альбуминов и коэффициента А/Г при закономерном нарастании процентного содержания си- и а₂-глобулиновой фракции; уровень р- и у-глобулинов изменялся незначительно. В фазе затихания процесса увеличивалось содержание альбуминов и уменьшалось количество ctr и аг-гло-булиновой фракции. Диспротеинемии при воспалительных процессах имели и прогностическую ценность: если при благоприятном клиническом течении процесса в про-

теинограмме появлялись сдвиги, то наблюдались рецидивы заболевания. Большой интерес представляют данные автора о различиях в протеинограммах при воспалительных¹ и дистрофических процессах. Такие исследования можно проводить в диагностических целях.

При дистрофических процессах в различных тканях глаза до лечения наблюдалось незначительное снижение коэффициента А/Г, повышение содержания си- и аг-гло-булинов, уровень р-глобулинов был не ниже 10%. Уровень у-глобулинов не изменялся. Такие нарушения про-теинограммы свидетельствовали о повышенной проницаемости сосудистой стенки. Нормальное содержание <хг. аг-и у-глобулинов указывало на отсутствие острых и хронических воспалительных процессов. Изменения протеино-граммы являются важным объективным показателем активности процесса и иммунологического состояния организма.

Выраженные нарушения белкового обмена вызывают интерес к исследованию фракционного состава сывороточных белков как методу, характеризующему неспецифические биохимические сдвиги в организме больного туберкулезом. При гематогенном метастатическом туберкулезе глаз исследованием биохимических данных занимались R. Witraer (1953) и С. Recupero (1956), получившие протеинограмму сыворотки крови у больных туберкулезом глаз. Однако исследования были проведены на небольшом материале и определенной закономерности установить не удалось. А. А. Суконщикова и др. (1958) биуретовым методом определяли содержание белковых фракций и коэффициент А/Г.

И. И. Меркулов и соавт. (1953), С. Я. Сергиенко (1957), Л. П. Бахолдипа (1972) и др. установили соотношение белковых фракций при изучении иммунобиологического состояния больных фликтенулезными керато-конъюнктивитами. У детей и взрослых обнаружены ги-поальбуминсмия и гиперглобулинемия, которые возникали в сенсибилизированном организме в результате повышенной проницаемости сосудистой стенки. При фликтенулезных заболеваниях отмечена низкая чувствительность СОЭ и гемограммы. Наиболее объективным показателем, не уступающим реакциям Пирке и Манту, был коэффициент А/Г. Как правило, он был снижен. С учетом степени увеличения этого коэффициента можно было оценивать терапевтический эффект. Изучение роли показателя А/Г при фликтенулезных заболеваниях имеет определен-

ное значение. Однако по одному показателю нельзя судить о стойкости терапевтического эффекта, так как ни один из имеющихся критериев не может в достаточной степени отражать те сложные процессы, которые происходят в организме при выздоровлении.

Е. М. Сластенова и А. Я. Шурыгин (1964) методом амперометрического титрования изучали сульфгидриль-ные группы сыворотки крови у больных туберкулезом глаз. Обнаружено снижение сульфгидрильной активности сыворотки крови, что свидетельствует об ослаблении окислительно-восстановительных процессов в организме.

Полученные результаты явились основанием для применения с лечебной целью серосодержащего препарата — 30% раствора тиосульфата натрия. Отмечено благоприятное действие препарата при комплексном лечении больных туберкулезом глаз.

Для изучения неспецифической резистентности организма определяли содержание лизоцима и комплемента в сыворотке крови. У половины больных наблюдалось заметное падение содержания лизоцима в сыворотке крови. Эти данные показывают, что у больных туберкулезом⁷глаз нередко наступает ослабление защитных сил организма [Сластенова Е. М., 1964].

Большой интерес представляет проведенное автором исследование функций коры надпочечников. Повышенное или, реже, пониженное содержание 17-кетостероидов в моче, нередко наблюдаемое у больных туберкулезом глаз, и отрицательная проба Торна отмечены почти в ²/з случаев. Эти данные свидетельствовали о том, что в различных отделах глаза туберкулезный процесс нередко протекает на фоне нарушения функции коры надпочечников. Наблюдения Е. М. Сластеновой показывают, что при тяжелом рецидивирующем течении туберкулеза глаз целесообразно исследовать функции коры надпочечников.

Изменения протеинограмм были более выражены при тяжелых туберкулезных процессах со склонностью к распространению на соседние ткани. Таким образом, определение сывороточных белков крови методом электрофореза является объективным показателем при комплексном изучении иммунобиологического состояния организма, а также характера, тяжести и прогноза туберкулезных заболеваний глаз. Изучение диспротеинемии, а также специфической и неспецифической реактивности организма при заболеваниях глаз проводилось в основном для характеристики острой фазы воспалительного процесса

(влага передней камеры, сыворотка крови, слезная жидкость). При хронических и неактивных процессах и в период выздоровления исследования не проводились. Но-именно на основе этих процессов, клинически трудно выявляемых, но активных, в дальнейшем развиваются рецидивирующие и прогрессирующие формы заболевания.

Активный воспалительный процесс имеет четко выраженную симптоматику, которую можно выявить различными методами исследования. При хроническом, вяло текущем процессе эта симптоматика гораздо беднее и обнаруживается только при использовании более совершенных методов. Но наибольшие трудности представляют те случаи, когда признаки активности воспалительного процесса отсутствуют, однако процесс сохраняет определенную активность.

Такие процессы, которые имеют бедную симптоматику, требуют наиболее детального изучения, так как именно они являются источником неблагоприятно текущих форм туберкулеза глаз. В этих случаях только применение комплекса информативных современных методов исследования реактивности и иммунологического состояния организма, а также характера воспалительного процесса в тканях глаза позволяет правильно оценить степень излечения процесса.

При туберкулезе глаз нередко такое видимое отсутствие активности воспалительного процесса заставляет сделать ошибочный вывод о клиническом излечении заболевания и прекратить лечение в тех случаях, когда чувствительные методы позволяют определить явно не законченный воспалительный процесс. Трудно ожидать стойкого лечения, если терапия была закончена при наличии активного процесса в глазу или в отсутствие стабилизации туберкулезного процесса в организме.

Из арсенала методик, способных отражать течение минимальных воспалительных изменений, наиболее чувствительны электрофоретические исследования белковых фракций сыворотки крови в динамике. Мы изучали про-теинограмму у больных туберкулезом глаз при активных и малоактивных процессах, в период обострения и клинического выздоровления. Общий белок крови определяли общепринятым методом рефрактометрически. Только у 4% больных туберкулезом глаз в различные периоды заболевания выявлено незначительное повышение количества общего белка крови. После подкожного введения туберкулина процентное содержание общего белка крови

Ю Заказ J* 1384

незначительно изменялось, оставаясь на уровне нормаль-иых цифр. Полученные результаты показывают, что при туберкулезе глаз общий белок крови, как правило, остается в пределах нормы и не отражает активности и динамики процесса. Белковые фракции сыворотки крови методом электрофореза исследовали у больных метастатическим туберкулезом глаз и в контрольной группе. У большинства больных исследования проводили многократно.

В зависимости от стадии процесса больные туберкулезом глаз были разделены на группы: 1) с активным процессом; 2) с малоактивным процессом; 3) с неактивным процессом.

У всех больных с активным процессом и обострением заболевания электрофореграмма была изменена в различной степени по сравнению со средними показателями здоровых лиц.

В большинстве наблюдений изменения электрофоре-траммы находились в соответствии с клинической фазой процесса. При активном воспалительном процессе наблюдались понижение количества альбуминов и увеличение содержания а₂- и -у-глобулиновой фракций. Уровень глобулиновых фракций изменялся незначительно. Содержание а,-глобулиновой фракции понижалось. Коэффициент А/Г отклонялся от нормы как в сторону понижения, так и в сторону повышения. При малоактивных и неактивных процессах содержание альбуминов увеличивалось, а]-, а₂- и р-глобулиновых фракций изменялось не закономерно, а -у-плобулиновых фракций оставалось повышенным.

В фазе затихания процесса при клиническом излечении с формированием незначительных остаточных изменений после курса лечения сдвиги в протеинограмме стойко нормализовались. Однако, отражая активность воспалительного процесса в организме больного туберкулезом, данные электрофореграммы белкового состава сыворотки крови не позволили установить, какой же из очагов (в легких, глазах, лимфатических узлах, почках или других органах) активен.