Ориентировочная основа деятельности студентов для проведения лабораторной работы

Работа 1.«Определение общего белка сыворотки крови рефрактометрическим методом»

Принцип метода. В основе рефрактометрии лежит неодинаковая способность различных сред преломлять проходящие через них лучи света. Отношение синуса угла падения к синусу угла преломления называется показателем (коэффициентом) преломления:

Степень рефракции раствора обусловлена количеством, размерами и физическим состоянием растворённых в нём частиц, а также температурой окружающей среды. В сыворотке крови величина рефракции зависит в первую очередь от количества и качества белков; солям и другим составным частям принадлежит меньшая роль. Для определения показателя преломления служат особые приборы – рефрактометры.

Рис. 1. Схема устройства рефрактометра:

1 – зеркало; 2 и 4 – призмы; 3 – сыворотка; 5 – окуляр; 6 – белое и тёмное поле в окуляре; 7 – шкала для отсчёта поворота угла призм, показатель преломления (рефракция)

Расчёт. Определив показатель преломления по таблице, вычисляют процент содержания белка в испытуемой пробе (г/100 мл). Коэффициент пересчета в единицы СИ (г/л) равен 10.

Клинико-диагностическое значение: повышение содержания белка в крови (гиперпротеинемия) наблюдается при венозном стазе, гипогидратации, гипериммуноглобулинемии. Снижение уровня белка в крови (гипопротеинемия) ниже 60 г/л может быть связано с потерей белка (при гастроэнтеропатиях, ожогах, нефротическом синдроме) и снижением синтеза белка (при тяжелой белковой недостаточности, хронических заболеваниях печени). Норма (сыворотка) - 65 - 85 г/л.

Работа 2. «Разделение белков методом электрофореза»

Принцип метода. Метод основан на том, что при определённом значении рН и ионной силы раствора белки двигаются в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, двигаются к аноду (+), а положительно заряженные белки - к катоду (-).

Электрофорез проводят на различных носителях: бумаге, крахмальном геле, полиакриламидном геле (ПААГ) и др. В отличие от электрофореза на бумаге, где скорость движения белков пропорциональна только их суммарному заряду, в полиакриламидном геле скорость движения белков пропорциональна их молекулярным массам. Разрешающая способность электрофореза в полиакриламидном геле выше, чем на бумаге. Так, при электрофорезе белков сыворотки крови человека на бумаге обнаруживают только 5 главных фракций: альбумины, α₁ глобулины, α₂-глобулины, β-глобулины и γ-глобулины. Электрофорез тех же белков в ПААГ позволяет получить до 18 различных фракций. Для обнаружения белковых фракций полоски бумаги или столбики геля обрабатывают красителем (чаще всего бромфеноловым синим или амидовым чёрным). Окрашенный комплекс белков с красителем выявляет расположение различных фракций на носителе.

Клинико-диагностическое значение: При многих заболеваниях очень часто изменяется процентное соотношение отдельных белковых фракций, хотя общее содержание белка в сыворотке крови остается в пределах нормы. Такое состояние носит название диспротеинемия. Низкий уровень альбумина (гипоальбуминемия) может возникать из-за нефритического синдрома, болезни печени, ожогов, голодания и др. Повышение уровня γ-глобулинов говорит о наличии в организме инфекции и воспаления, снижение может свидетельствовать об иммунодефиците. Повышение уровня α –глобулинов наблюдается при острых воспалительных процессах.