В 100 мл воды водоемов

Примечание: * - вероятность ниже допустимого уровня.

3. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий в воде методом мембранных фильтров (Составить схему. Оформить протокол)

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие палочки, анаэробы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре, с образованием черных колоний, при температуре 44°С в течение 16–18 часов.

1 день

Пробы воды по 20 мл, предварительно прогретые на водяной бане при температуре 75°С в течение 15 минут (для удаления вегетативной флоры), фильтруют.

Железосульфитный агар, перед нанесением фильтров, расплавляют на водяной бане и поддерживают его нагретым в пределах 70–80°С.

1. Фильтры помещают в пробирки с горячим железосульфитным агаром – сворачивают пинцетом в трубочку, таким образом, чтобы сторона фильтра с осевшими бактериями была обращена внутрь, а затем разворачивают по стенке пробирки. Пробирки быстро охлаждают холодной водой и культивируют при 44°С в течение 16-18 часов.

2. Фильтры помещают на чашки Петри с железосульфитным агаром, залитым тонким слоем, поверхностью с осевшими микроорганизмами. Заливают расплавленный железосульфитный агар до верхнего края чашки и инкубируют при 44°С в течение 16–18 часов.

2 день

Подсчитывают количество черных колоний на фильтрах и в толще среды и выражают результат в КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл.

4. Определение колифагов в воде. Составить схему. Оформить протокол

Колифаги – бактериофаги способные образовывать зоны лизиса газонной культуры E.coli (тест-культуры К 12 Str^R) на питательном агаре через 18–20 часов инкубирования при 37°С.

Титрационный метод

1 день

В исследуемые пробы воды, объемом по 100 мл, добавляют по 10 мл питательного бульона с 1% раствором пептона (10-кратного концентрированного) и 1 мл смыва тест-культуры кишечной палочки или 2 мл 4-х часовой бульонной культуры. Инкубируют в течение 18–20 часов при 37°С.

2 день

Забирают 10 мл из полученного материала и добавляют к ним 1 мл хлороформа (для освобождения от бактерий), энергично встряхивают и оставляют до полного осаждения хлороформа при комнатной температуре. В чашку Петри пипеткой вносят 1 мл воды, обработанной хлороформом (не касаясь осадка хлороформа), и заливают предварительно приготовленной смесью (100 мл агара на 1 мл смыва микроорганизма) питательного агара (сначала расплавленного, потом остуженного до 45°С) и E.coli объемом 12–15 мл. Инкубируют 18–20 часов при 37°С.

3 день

Результат определяют по наличию полного лизиса, появления нескольких или одной бляшки на чашке и при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке. Результат выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ). Коли-фаги не должны обнаруживаться в 100 мл воды.