Метод выделения чистой культуры с помощью твердых сред (метод Коха и метод Дригальского).

Наиболее распространенный в микробиологической прак­тике метод основан на том, что при нанесении микроорганизмов из посевного материала на твердую среду отдельные клетки будут закрепляться (иммобилизоваться) в определенной точке твердой среды и, размножаясь, давать потомство (клон), представляющее чистую культуру микроорганизма.

Для получения изолированных колоний на твердой среде на поверхность твердой питательной среды исследуемый матери­ал высевают, каплю его наносят петлей или пипеткой.

Рассев проводят либо методом истощающего мазка, либо методом истощающего штриха.

В первом случае шпателем равномерно распределяют на­несенную каплю по поверхности твердой среды. Тем же шпателем делают посев на поверхности второй пластинки и затем третьей, т. е. переносят последовательно на твердую среду клетки микро­организмов, которые остались на шпателе.

Таким образом, количество микроорганизмов, вносимых последовательно на пластинки, будет уменьшаться: на вторую пластинку - меньше, чем на первую; на третью - еще меньше, чем на вторую, и т. д.

При использовании метода истощающего штриха иссле­дуемый материал наносят петлей в верхнюю часть твердой среды в чашке Петри и аккуратно, зигзагообразно петлей по поверхно­сти чашки. Затем посев проводят аналогично на второй и третьей чашках.

После посева чашки необходимо перевернуть вверх дном и поставить в термостат при температуре, благоприятной для данного микроорганизма. Инкубируют посевы обычно в термоста­те в течение 2-3 дней. В результате на поверхности среды вы­растают колонии микроорганизмов. Выросшие колонии сначала рассматривают невооруженным глазом, а затем при помощи лупы или при малом увеличении микроскопа.

а        б

Рисунок 19 – а – метод посева зигзагообразной петлей; б – метод посева истощающего штриха

Может наноситься серия штрихов (рисунок 20). При этом, проводя на поверхности среды штрихи, после каждой серии чашку немного поворачивают, так чтобы в каждой новой серии распределялись бактерии из предыдущей серии штрихов, истощая, таким образом, штрихи до отдельных бактерий.

С помощью этого метода можно выделять бактерии из естественных мест обитания, например из почвы, молока, воды. Образцы твердых субстанций, таких как почва, лучше суспендировать в небольшом количестве воды, либо предварительно проинкубировать в жидкой среде. Безопасным источником для рутинной работы является пастеризованное молоко. Перед тем как проводить эксперименты с бактериями или грибами, следует ознакомиться с инструкциями и правилами безопасности, чтобы снизить до минимума риск культивирования вредных организмов.

Из отобранных колоний готовят препараты, микроскопируют их (рассматривают под микроскопом) для проверки морфологи­ческой однородности клеток. Рассматривают препараты с объективом ×90 при максимальном освещении. При приготовлении препаратов необ­ходимо соблюдать все правила стерильности (не открывать широко крышку чашки, хорошо стерилизовать петлю).

Рисунок 20 – Каждая линия обозначает один штрих проволочной петлей