Лабораторная работа № 8. Этапы выделения чистых культур

Цель работы. Определение этапов выделения чистых культур.

 

Задание.

1 Изучить методы пересева микроорганизмов на твердой среде, на жидкой среде, метод разведения Пастера, метод Коха и Драгильского.

2 Изучить метод пересева в чашку Петри.

Изучить как определяются культуральные свойства выросших в чашках колоний.

4 Изучить капельный метод выделения чистой культуры из одной клетки.

Пересев культуры.

Пересев микроорганизмов, выращенных на твердой среде в пробирках, в другие пробирки со средой выполняется в опреде­ленной последовательности:

На пробирке со свежей питательной средой разборчиво подписывают название микроорганизма, ставят дату посева. Надписи делают чернилами по стеклу или стеклографом.

Зажигают горелку. Посевы проводят над пламенем го­релки, чтобы теплый воздух препятствовал осаждению микроорганизмов из окружающего воздуха и отчасти их уничтожал.

Берут и правую руку бактериологическую петлю, с помощью которой осуществляют посев (петлю держат как карандаш).

Стерилизуют бактериологическую петлю в пламени горелки, прокаливая проволоку докрасна, и одновременно обжигают примыкающую к петле часть держателя, который будет вводиться в пробирку с культурой микроорганизмов. При прокалива­нии петлю держат в пламени почти вертикально, чтобы вся про­волока была раскалена.

Берут в левую руку две пробирки: одну со стерильной средой (дальше от себя), другую – с культурой микроорганизмов (ближе к себе).

Не выпуская бактериологической петли в правой руке, мизинцем и безымянным пальцем правой руки прижимают наруж­ные концы ватных пробок к ладони и вынимают пробки из пробирок. Класть пробки па стол нельзя.

Слегка обжигают в пламени горелки края открытых пробирок.

Вводят в пробирку с культурой микроорганизмов петлю. Чтобы не повредить клетки микроорганизмов, петлю вначале охла­ждают, прикасаясь к внутренней поверхности пробирки или к пита­тельной среде, свободной от клеток микроорганизмов, и только по­сле этого отбирают небольшое количество микробной массы.

Вынимают петлю и вводят ее в пробирку со стерильной питательной средой, избегая прикосновения со стенками пробирки.

Проводят петлей от дна вверх зигзагообразную или прямую черту-штрих, слегка касаясь поверхности агара.

Обжигают ватные пробки и края пробирок одновременно в пламени и закрывают обе пробирки.

Обжигают петлю в пламени.

Пересев культур микроорганизмов, выращенных в жидкой среде, выполняется с учетом особенностей характеристик среды:

Из стерильной бумаги вынимают градуированную сте­рильную пипетку за верхний конец. Берут пипетку средним и большим пальцами правой руки, не касаясь поверхности той час­ти пипетки, которая будет вводиться в сосуд с жидкой средой.

Берут в левую руку пробирку (или колбу) с культурой микроорганизмов, выращенной в жидкой среде, и держат ее в вертикальном положении, чтобы не замочить пробку.

Открывают пробку, соблюдая все правила стерильно­сти, описанные выше, и вводят пипетку в пробирку.

Набирают в пипетку суспензию микроорганизмов, за­крывают пробкой пробирку (или колбу), вносят определенное количество суспензии в свежую стерильную питательную среду, со­блюдая описанные правила предосторожности.

Пипетку помещают в сосуд с дезинфицирующим раство­ром (0,5-3 %-м водным раствором хлорамина или 3-5 %-м водным раствором фенола), не касаясь ею окружающих предметов.

При использовании этих методов иногда получа­ются не чистые, а смешанные культуры. Это является результатом того, что колонии могут образоваться не из одной, а из двух или нескольких клеток, попавших в одну точку. Поэтому метод выделения чистых культур требует двух- или трехкратного повто­рения выделения культур из одной колонии. Для выделения чистых колоний бактерий из смеси бактерий применяют посев на твердую среду штрихом, или посев разведением. Для выделения чистых культур многих бактерий ис­пользуют МПА, для дрожжей – сусло-агар.

Метод разбавления Пастера (метод предельных разведений).

Заключается в том, что из исследуемого материала делают ряд последовательных разведений в жидкой питательной среде. Для этого каплю посевного материала вносят в пробирку со стерильной жидкой средой, из нее каплю переносят в следующую пробирку и так засевают до 8…10 пробирок. С каждым разведением количество микробных клеток, попадающих в среду, будет уменьшаться и можно получить такое разведение, в котором во всей пробирке со средой будет находиться только одна микробная клетка, из которой разовьется чистая культура микроорганизма. Так как в жидких средах микробы растут диффузно, т.е. легко распределяются во всей среде, то изолировать одну микробную клетку от другой трудно. Таким образом, метод Пастера не всегда обеспечивает получение чистой культуры. Поэтому в настоящее время этот метод используется, главным образом, для предварительного уменьшения концентрации микроорганизмов в материале перед посевом его в плотную среду для получения изолированных колоний.