Лабораторная работа № 7. Техника проведения посевов

Цель занятия. Изучить методы посева бактерий на плотные и жидкие питательные среды, а также способы выделе­ния чистых культур.

Задание.

1 Записать этапы и зарисовать схему посева культур микроорганизмов из пробирки в пробирку с помощью бактериологической петли, а также пересева культур микроорганизмов, выращенных на жидких питательных средах, в стерильные питательные среды. Выписать выделенные термины, ответить на вопросы, сделать вывод.

Теоретическая часть

В лабораторных условиях микроорганизмы выращивают на твердых и жидких средах в пробирках, колбах или в чашках Петри. Перед выделением чистой культуры из различных объектов окружающей среды (пищевого продукта, с поверхности плодов и овощей, из почвы, воды и др.), в которых находится множество микроорганизмов, вначале получают накопительные культуры, проводя культивирование в элективных условиях - условиях, способствующих развитию одной культуры и ограничивающих развитие сопутствующих микроорганизмов.

Для выделения чистых и накопительных культур из различных объектов в лабораториях используют методы посева и пересева.

Посевом в микробиологии называют внесение клеток микроорганизмов (посевного материала – инокулята) в стериль­ные среды.

Пересев – это перенос выращенной культуры микроор­ганизмов на питательной среде на другую свежую питательную среду. Посев (и пересев) микроорганизмов проводят при со­блюдении определенных правил стерильности, которые необхо­димо выполнять, чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними организмами и не загрязнять окру­жающую среду исследуемыми культурами микроорганизмов.

Накопительные культуры состоят преимущественно из клеток микроорганизмов одного вида. Для получения накопительных культур используют жидкие накопительные питательные среды, различные методы обработки материала, содержащего смесь микробов, а также учитывают другие особенности выделяемых из объекта микроорганизмов.

Получают накопительные культуры микроорганизмов, используя различные методы. К таким методам относятся методы обогащения, метод нагревания исследуемого материала для выделения спорообразующих бактерий, метод выделения подвижных форм бактерий (метод Шукевича) и др.

Чистой культурой называют культуру, состоящую из мик­роорганизмов одного вида. Чистая культура микроорганизмов, которая является потомством одной единственной клетки, назы­вается клоном. Существует несколько методов получения чистых культур. Все они основаны на выделении из популяции одной клетки.

Методы культивирования микроорганизмов.

Методы обогащения.

Их часто применяют для выделения чистых культур микроорганизмов (например, бактерий группы кишечной палочки (БГКП), сальмонелл и др.) из материалов, в которых мало выделяемых микроорганизмов, но содержится большое количество сопутствующей микрофлоры. Для увеличения численности выделяемого вида микроорганизмов вначале делают посев исследуемого материала в накопительные питательные среды, которые содержат вещества, стимулирующие его рост и угнетающие или задерживающие размножение сопутствующей микрофлоры. Например, для выделения сальмонелл проводят посев в среды обогащения Кауфмана, Мюллера и др., для выделения БГКП – на среду Кесслера. При выделении культур молочнокислых бактерий из почвы, сырого молока или растений посевы делают на стерильное обезжиренное молоко, содержащее 5 % этилового спирта для подавления роста гнилостных бактерий.

Метод нагревания.

Применяют для выделения чистых культур споровых форм бактерий (бацилл, клостридий). В этом случае перед посевом исследуемый материал прогревают на водяной бане при температуре 75…85 ⁰С в течение 20…30 мин. Вегетативные формы погибают во время прогревания, а споры микробов остаются живыми и при последующих высевах на плотную среду прорастают, формируя колонии.

Метод выделения подвижных форм бактерий (метод Шукевича)

Заключается в посеве исследуемого материала в конденсационную воду скошенного мясопептонного агара. При размножении подвижные формы микроорганизмов из конденсационной воды распространяются на агаре, как бы вползая на его поверхность.