Микроскопический подсчет колоний

С помощью данногометодаподсчитываютмикро­колонии в питательном агаре, нанесенном на пред­метное стекло. На предметное стекло наносят суспензию из агара и исследуемого жидкого субстрата. Смесь на стекле термостатируют, высушивают, окрашивают и методом микроскопии подсчитывают число выросшихмикроколоний. С учетом объема нанесенной на предметное стекло суспензии агар+субстрат и площади распределения на стекле определяют количество выросших колоний в единице объема субстрата.

НАИБОЛЕЕ ВЕРОЯТНЫЕ ЧИСЛА (НВЧ)

Количество микробиальных клеток определяют методом наиболее вероятных чисел (НВЧ), сущность которого в статистической оценке возможности присутствия живых бактерий в серийных разведениях.
  Проводят посев из параллельных разведений в жидкую питательную среду, термостатируют и учитывают пробирки, в которых отмечается рост бактерий. Метод НВЧ статистически неэффективен, поскольку каждая пробирка соответствует только небольшой части поверхности чашки Петри. В связи с этим приходится использовать много пробирок, либо удовлетвориться весьма приблизительным результатом.
   Одним из преимуществ метода НВЧ является возможность его использования в отсутствие способа культивирования бактерий на твердой среде. Второе преимущество заключается в том, что он удобен в случае высокой вариабельности кинетики роста.

Предположим, что некоторые клетки из смешанной культуры растут быстро, образуя на агаре крупные колонии, которые, распространяясь по поверхности, маскируют появляющиеся позже мелкие колонии интересующего нас микроорганизма. Хотя количество таких мелких колоний может быть больше, их невозможно учесть на чашках из-за присутствия колоний более подвижных или быстрее растущих бактерий. Третье преимущество метода НВЧ состоит в том, что в присутствии не представляющих интереса организмов и в отсутствие подходящего метода селекции его можно использовать для выявления легко обнаруживаемых продуктов (например, пигментов или антибиотиков), продуцируемых изучаемыми микроорганизмами. В этом случае, несмотря на более выраженный рост контаминирующих микроорганизмов, количество исследуемых батерий определяют по числу пробирок, где образование характерных продуктов отсутствует.

И наконец, метод НВЧ используют в случае, если агар или другие отвердители содержат некоторые факторы (например, тяжелые металлы), которые изменяют достоверность подсчета или взаимодействуют с изучаемыми бактериями.

ВОССТАНОВЛЕНИЕ КРАСИТЕЛЕЙ

Метод применяют для определения количества живых микроорганизмов. Сущность ее основана на установлении биохимической активности микробов, продуцирующих фермент редуктазу, которая способна обесцвечивать некоторые краски, в частности метиленовую синь и резазурин. В основу метода положено определение времени, необходимого для обесцвечивания метиленовой сини. Преимущество редуктазной пробы в сравнении с прямым бактериологическим методом состоит в быстроте получения результате (примерно через 5,5 ч). Однако не все микроорганизмы обладают редуцирующей активностью. В большей степени это свойство имеют молочнокислые стрептококки, кишечные палочки, маслянокислые и гнилостные бактерии, несколько меньше - сальмонеллы и стафилококки. Редуктазная проба с метиленовой синью дает весьма неточное представление о степени бактериальной обсемененности продукта и его санитарном качестве. Поэтому показатели редуктазной пробы необходимо учитывать в комплексе с другими результатами исследований.

Преимущество резазурина состоит в том, что он обладает более высоким окислительно-восстановительным потенциалом, что ускоряет исследование. На показатели резазуриновой пробы температура продукта не оказывает заметного влияния.