Определение чувствительности микроорганизмов методом минимальной ингибирующей концентрации

Критериями активности того или иного препарата выступают:

1. Минимальная ингибирующая концентрация (MIC) – наименьшая концентрация препарата, тормозящая рост тест-культуры;

2. Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) – наименьшая концентрация препарата, вызывающая бактерицидный эффект.

Метод серийных разведений в жидких средах позволяет установить MIC препарата для выделенного возбудителя, т.е. MIC определяют по минимальной концентрации антибиотика, задерживающего видимый рост микроорганизма в пробирках или на чашке Петри с питательной средой, содержащей убывающие концентрации антибиотика.

Для этого готовят двукратно убывающие концентрации антибиотика в стандартном питательном бульоне. Контролями культуры и антибиотика является бульон без антибиотика и с первым разведением антибиотика (в физрастворе). В опытные и контрольные пробирки вносят суспензию молодой культуры микроорганизма и после суточной инкубации учитывают результат. Учетным признаком является наличие или отсутствие мутности бульона в пробирках. Величина MIC соответствует той минимальной концентрации препарата, при которой мутность в пробирке отсутствует. Этот метод является точным количественным методом. Применяется он в научной работе и в особо важных случаях в лабораториях больниц.

 

 

Задания

1. Приготовить серию двукратных разведений исследуемого антибиотика в жидких средах, последняя пробирка – отрицательный контроль (среда без антибиотика);

2. Засеять культуру микроорганизмов в каждую пробирку (по 50 мкл суспензии культуры);

3. Пробирки поставить в термостат при температуре 28 °С на сутки;

4. Провести учет результатов, заполнить таблицу 16, сделать выводы.

 

Таблица 16. Результаты эксперимента по определению MIC антибиотиков

№ пр-ки	Название микроорганизма 1				Название микроорганизма 2
	Антибиотик 1		Антибиотик 2		Антибиотик 1		Антибиотик 2
	Концентрация	Наличие роста	Концентрация	Наличие роста	Концентрация	Наличие роста	Концентрация	Наличие роста
1
2
3
4
5
6
7
8

 

Контрольные вопросы

1. Какие соединения относят к антибиотикам?

2. Одинаково ли антибиотики действуют на все микроорганизмы?

3. Все ли микроорганизмы вырабатывают антибиотики? Приведите примеры.

4. В чем может заключаться различие у штаммов продуцентов? Приведите примеры.

5. Могут ли разные организмы вырабатывать один антибиотик? Приведите примеры.

6. Какими методами определяют чувствительность микроорганизмов к антибиотикам?

7. В чем состоит различие между минимальной ингибирующей и минимальной бактерицидной концентрациями антибиотика?

8. Каким методом можно определить минимальную ингибирующую концентрацию?

9. Как определить минимальную бактерицидную концентрацию?

 

РАЗДЕЛ 7: ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ

 

Генетический аппарат прокариот представлен у боль­шинства групп прокариот одной кольцевой молекулой ДНК. В определенных условиях в клетке может находиться несколько копий бактериальной хромосомы. ДНК содер­жится также во внехромосомных генетических элементах плазмидах, в большинстве случаев кольцевых, автономно реплицирующихся небольших молекулах.

Совокупность всех генов организма называют генотипом, а совокупность присущих организму признаков — фенотипом. Спецификой генетических исследований микро­организмов является изучение свойств не отдельной особи (клетки), а популяции в целом (микробной культуры).

Наследственную изменчивость у прокариотических микроорганизмов вызывают рекомбинации генетического материала трех основных типов: трансформация, конъю­гация и трансдукция, широко используемые в генетических экспериментах.

Общим свойством всех трех процессов является их однонаправленность, т.е. одна клетка всегда выступает в роли донора ДНК, а другая в роли реципиента. Взаимного (реципрокного) обмена генетической информацией у бактерий не происходит.

В экспериментальной работе наиболее часто используют методы, основанные на процессах трансформации и конъюгации.

 

Лабораторная работа № 18