Механизмы взаимодействия антигенов и антител. Специфичность. Фазы. Проявления. Афинность. Авидность

 

Антитела обладают способностью отличать один антиген от другого. Они взаимодействуют только с теми антигенами (за редким исключением), против которых они выработаны и подходят к ним по пространственной структуре. Эта способность антитела получила название комплиментарность. Специфичность антитела обусловлена химической структурой, пространственным рисунком антидетерминант. Она связана с первичной структурой (чередованием аминокислот) белковой молекулы антитела.

Тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов обусловливают специфичность активного центра. В формировании комплекса антиген-антитело участвуют возникающие между ионными группами кулоновские силы и силы притяжения Ван-Дер-Ваальса, полярные силы и силы Лондона, межатомные ковалентные связи.

Известно, что взаимодействуют они как целые молекулы. Поэтому на одну молекулу антигена приходится значительное количество молекул антител. Они создают слой толщиной до 30 А⁰. Комплекс антиген-антитело разъединим с сохранением первоначальных свойств молекул.

Первая фаза соединения антитела с антигеном неспецифическая, невидимая, характеризуется абсорбцией антитела на поверхности антигена или гаптена. Протекает при температуре 37°С за несколько минут.

Вторая фаза специфическая, видимая, завершается феноменом агглютинации, преципитации или лизиса. В этой фазе необходимо присутствие электролитов, а в некоторых случаях и комплемента. Несмотря на обратимость процесса, комплексообразование между антигеном и антителом играет положительную роль в защите организма, которая сводится к опсонизации, нейтрализации, иммобилизации и ускоренной элиминации антигенов.

• Аффинность антител - сила связывания отдельной детерминаты (эпитопа)антигена с определенным активным центром- комбинаторным участком молекулы иммуноглобулина (паратопом).
• Авидность антител - кумулятивная сила связывания комбинаторных участков антител (паратопов) с антигенными детерминантами (эпитопами) сложного антигена.

 

18.

Серологический метод исследования. Задачи, этапы, оценка. Титр сыворотки, диагностический титр. Диагностикумы, диагностические сыворотки, применение. Характеристика серологического метода исследования

Серологическим называют метод исследования, в основе которого лежит реакция специфического взаимодействия антигенов и антител. На основе ее специфичности возможно определение неизвестных антител при взаимодействии с известным антигеном или неизвестного антигена по связыванию с известным антителом.

 

Метод решает следующие задачи:

1. Серологическая диагностика инфекционных и иммунных заболеваний, основанная на обнаружении в сыворотке крови больных антител. Обоснованием для постановки диагноза является:

• обнаружение антител к возбудителю болезни в диагностическом титре, т.е. в таком разведении сыворотки, в котором реакция может быть положительна только у больных и отрицательна у здоровых;
• нарастание титра антител при повторном исследовании в динамике болезни, что позволяет отличить заболевание от поствакцинального или постинфекционного иммунитета.

1. Серологическая диагностика инфекционных заболеваний, основанная на обнаружении в биологических жидкостях или тканях антигенов патогенных микробов.
2. Серологическая идентификация неизвестных микробов, выделенных при бактериологическом методе диагностики инфекционных болезней. Обоснованием для отнесения микроба к определенной серофуппе, сероварианту или виду является:

• взаимодействие микроба с адсорбированной моноспецифической сывороткой, содержащей антитела только к-специфическим для микроба антигенам (из таких сывороток в процессе их производства сорбируются антитела к групповым антигенам);
• взаимодействие микроба с моноклональными антителами, полученными методом гибридомной техники, т.е. метода культивирования гибрида из плазматической клетки, синтезирующей антитела одной специфичности, с опухолевой клеткой, способной к длительному размножению в культуре;
• взаимодействие микроба с диагностической сывороткой в разведении, составляющем не менее половины титра этой сыворотки.

1. Определение активности поствакцинального или постинфекционного индивидуального или коллективного иммунитета.
2. Получение и определение титров иммунных диагностических, лечебных и профилактических сывороток, поли- и гамма-глобулинов.

 

Терминология.

Диагностическая сыворотка - иммунная сыворотка, содержащая антитела известной специфичностити в известном титре, и предназначенная для серологической идентификации микроба или для обнаружения антигенов в организме больного,

Диагностикум - взвесь известных микробов или антигенов, предназначенных для серологической диагностики заболеваний по обнаружению антител в сыворотке больного.

 

Серологический метод исследования включает ряд реакций:

• агглютинации
• преципитации
• связывания комплемента
• иммунофлюоресценции
• иммуиоферментного и радиоиммунологического анализа.

 

ОЦЕНКА МЕТОДА

Достоинства:

• высокая специфичность,
• относительная простота,
• доступность,
• безопасность,
• быстрота (от 10 мин. до 4 часов) получения результатов.

Недостатки:

• при острых инфекционных заболеваниях обнаружение антител часто бывает ретроспективным диагнозом, т.к. они появляются в достаточных титрах к 7-8 дню от начала болезни, и к этому сроку болезнь может закончиться.

 

19.

Реакция агглютинации. Цели и методы постановки, учёт, оценка. Применение

 

Реакция агглютинации (от лат. agglutinatio - склеивание) - склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов - натрия хлорида.

Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например,бактерий), "склеенных" антителами.

 

РА используют для:

• Определения возбудителя,
• Определения антител в сыворотке крови больного

Методы постановки:

• Реакция агглютинации на стекле. К капле агглютинирующей сыворотки (разведение 1: 20) добавляют взвесь бактерии, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.
• Развернутая реакция агглютинации с сывороткой крови. К разведениям сыворотки добавляют диагностикум.

 

20.

Реакция пассивной гемагглютинации, ингредиенты Методика постановки, учёт, оценка. Применение. Реакция обратной пассивной гемагглютииации. Реакция латексагглютинации