Приготовление питательных сред

С целью облегчения приготовления питательных сред необходимо иметь маточные растворы, составляющие среду. Суть приготовления маточного раствора заключается в том, чтобы, взяв из него определенный объем, приготовить определенный объем питательной среды.

Соли в маточном растворе могут вступать в реакцию, поэтому маточный раствор хранят в нескольких сосудах:

1-NH4NO3, KNO3, KH2PO4, MgSO4*7H2O

2- CaCl2*2H2O

3- Ca(NO3)2*4H2O

4- FeSO4* Na2 ЕДТА

5- MnSO4*4H2O, ZnSO4*7H2O, H3BO3, КУ, Na2MoO4*2H2O, CuSO4*5H2O, CoCl2*6H2O.

Витамины и регуляторы роста хранят в отдельных сосудах.

Концентрации маточных растворов составляют из такого расчета, что для приготовления 1 л среды необходимо взять: макроэлементов – 100 мл, кальция – 100 мл, микроэлементов, хелата железа – 10 мл, витаминов и регуляторов роста – 1 мл маточного раствора. Маточные растворы и питательные среды готовят на бидистиллированной воде. Все вещества,входящие в состав среды, растворяют в воде, за исключением регуляторов роста. Цитокинины растворяют в 0,1 н растворе соляной кислоты, ауксины – в капле спирта. Маточные растворы хранят в холодильнике, их объем должен быть таков, чтобы израсходовать за месяц.

Для приготовления 1 л жидкой среды в колбу объемом 1л пипеткой переносили необходимое количество каждого из исходных растворов.

На электроплитке кипятили дистиллированную воду и добавляли в нее агар при постоянном помешивании. Раствор кипятили до полного растворения агара, затем разбавляли холодной дистиллированной водой и переносили в основную колбу. Объем доводили до 1л и измеряли рН среды.

Готовую среду разливали по баночкам из расчета 1 л среды на 30 баночек. Баночки закупоривали и автоклавировали при 1 атм 18 минут.

Объекты исследования.

Трибьют.

Сорт ремонтантный крупноплодный.

Выведен в США в 1981 году. Урожайность 1,0-1,4 кг/м. кв.

Ягоды массой от 10 до 20 г, красные, со слабым блеском, конические, с небольшой шейкой. Семянки желтые, под кожицей.

Мякоть розовая, средней плотности, кисло-сладкая, с ароматом.

Куст среднерослый, полураскидистый, рыхлый, средне облиственный.

Листья средние, темно-зеленые, матовые, доли удлиненно-овальные, гладкие, слегка вогнутые; зубчики куполовидные, плоские; прилистники небольшие, зеленые, средней ширины.

Цветоносы длинные, средней толщины, опушены прижатыми волосками; соцветия многоцветковые, раскидистые, цветоножки длинные, тонкие; на уровне листьев и ниже.

Цветки средние, обоеполые; лепестки белые, слабоизогнутые; чашелистики узкие, расположены в два ряда.

Сорт средней зимостойкости, устойчив к увяданию и мучнистой росе, в средней степени поражается серой гнилью.

Коэффициент размножения средний.

Маковка.

Сорт получен от скрещивания сортов Фестивальная *Робинзон.

Позднего срока созревания. Куст мощный, компактный. Побегообразовательная способность средняя.

Ягоды крупные, темно-красные, кисло-сладкого вкуса. Мякоть ягоды средней плотности.

Урожайность 200-250 ц/га.

Устойчив к гнилям плодов и гнилям корней.

Королева Елизавета.

Новый ремонтантный сорт.

По своим качествам легко составит конкуренцию лучшим западным ремонтантным сортам.

Ягоды очень крупные, отдельные до 100 г, ярко-красного цвета, с плотной мякотью. Плотная мякоть дает возможность перевозить землянику на большие расстояния, хранить, и, перерабатывая, получать качественные продукты, так как ягоды не развариваются.

Цветение с мая по октябрь. Плодоношение происходит в три волны.

Урожайность 10 кг/м.кв. Плодоношение в год посадки.

Результаты исследования.

Микропобеги помещали на питательную среду для пролиферации по 5-6 шт в стеклянный сосуд объемом 200 мл. В течение 5-6 недель культивирования образовались конгломераты микропобегов. Коэффициент размножения варьировал от 2,7 до 6,2 в зависимости от сорта. Высота побегов колебалась от 3,5 до 3,9 в зависимости от сорта. По окончании пассажа конгломераты извлекли из сосудов и разделили на отдельные микропобеги в условиях ламинар-бокса. На стадии пролиферации учитывались следующие показатели: количество дополнительных побегов на эксплант, высота побега, количество листьев на побег (табл.).

Табл.2. Основные показатели развития микрорастений земляники садовой изучаемых сортов на этапе пролиферации.

Сорт	Питательная среда	БАП, мг/л	Средняя длина побега, см	Среднее количество побегов на эксплант, шт	Среднее число листьев на побег, шт
Королева Елизавета	Мурасиге-Скуга	0,4	3,5	2,7	3,7
Трибьют	Мурасиге-Скуга	0,4	3,9	6,2	4,8
Маковка	Мурасиге-Скуга	0,4	3,6	5,8	4,4

В результате проведенных исследований было выяснено, что из трех изучаемых сортов земляники садовой Трибьют отличается самым высоким коэффициентом размножения (6,2), а также является лучшим по другим двум показателям (длине побега и количеству листьев на эксплант).

Что касается укореняемости данных сортов, то существенных различий по сортам не замечено. Способ укоренения оказал существенное влияние на укореняемость данных сортов. Укореняемость в условиях exvitroоказалась в среднем на 25% ниже, чем в условияхinvitro. Однако стоит отметить, что растения, полученные приexvitroукоренении, являются уже адаптированными к нестерильным условиям и в данном случае процент укореняемости является также процентом приживаемости.

Предварительная обработка ИМК exvitroукореняемых растений, стимулировала образование и развитие корневой системы, обеспечивая процент укоренения 77-82% в зависимости от сорта, тогда как укореняемость контрольных растений составила 60-65%.

Концентрация ауксина на результаты значительно не повлияла.(табл. 3).

Табл.3.Укореняемость микрорастений при двух способах укоренения.

Способ укоренения	Сорт	Концентрация ИМК, мг/л	Укореняемость, %
exvitro	Королева Елизавета, Трибьют, Маковка	контр контр контр
invitro	Королева Елизавета, Трибьют, Маковка

В ходе эксперимента было установлено, что обработка микропобегов сорта Королева Елизавета перед посадкой на укоренение exvitroраствором ИМК, существенно повлияла на количество листьев, количество корней и длину

корней. Микропобеги, обработанные раствором ИМК дали лучшие результаты по перечисленным показателям по сравнению с контролем, на котором обработка не проводилась: количество корней оказалось в 1,5 раза больше, чем в контроле, а средняя длина корней в 1,6 раз больше. По показателям количество листьев, длина и количество корней отличие от контроля было достоверно.

Длина черешка не зависела от концентрации ИМК, но была чуть ниже контроля.

Разная концентрация ИМК (2 и 5 мг/л) на приведенные показатели значительно не повлияла. (табл.).

Табл.4. Влияние предварительной обработки ИМК на параметры развития растений земляники сорта Королева Елизавета во время адаптации.

Метод укоренения	Вариант обработки	Средние значения показателей
Количество листьев, шт	Длина черешка, см	Количество корней, шт	Длина корней, см
exvitro	ИМК 2 мг/л ИМК 5 мг/л Контроль (без обработки)	5,6* 5,4* 4,6*	3,6 3,7 3,9	4,6* 4,8* 3,2	23,4* 23,9* 14,7
НСР 0,05	-	0,661	0,506	0,858	8,429

*Различия существенны.

Что касается сорта Маковка, то обработка раствором ИМК также оказала положительное влияние на количество листьев, количество корней и длину корней по сравнению с контролем. Различия по данным показателям существенны.

Обработка ИМК в концентрации 2 мг/л дала немного лучшие результаты по количеству листьев и длине корней по сравнению с ИМК 5 мг/л, но количество корней при обработке ИМК 2 мг/л было несколько меньше, чем при обработке ИМК 5 мг/л. По показателю средней длины корней, корни обработанные ИМК в концентрации 2 мг/л в 2 раза превосходят контрольный вариант.

Средняя длина черешка при обработке ИМК 2 мг/л оказалась такой же, как в контроле, а при обработке ИМК 5 мг/л несколько меньше контроля.(табл.).

Табл.5. Влияние предварительной обработки ИМК на параметры развития растений земляники сорта Маковка во время адаптации.

Метод укоренения	Вариант обработки	Средние значения показателей
Количество листьев, шт	Длина черешка, см	Количество корней, шт	Длина корней, см
exvitro	ИМК 2 мг/л ИМК 5 мг/л Контроль (без обработки)	4,75* 4,3* 3,5	4,1 3,6 4,1	4,5* 4,9* 3,6	15,6* 13,54* 7,9
НСР 0,05	-	0,770	0,730	0,910	5,123

*Различия существенны.

Влияние предварительной обработки раствором ИМК на развитие сорта Трибьют на стадии ризогенеза exvitroтоже оказалось положительным в отношении количества и длины корней по сравнению с контролем. Превышения по этим показателям существенны по отношению к контролю на обоих концентрациях ИМК. На концентрации ИМК 2 мг/л превышение по длине корней было в 2,5 раза, а на концентрации ИМК 5 мг/л – в 2раза. По количеству корней превышение контроля было в 1,5 раза и в 1,6 раза соответственно. На количество листьев и длину черешка существенного влияния обработка не оказала. Что касается концентрации ИМК, то средняя длина корней была на 2,91 см больше при обработке ИМК в концентрации 2 мг/л, чем в концентрации 5 мг/л, а количество корней при ИМК 2 мг/л было немного меньше.

Табл.6. Влияние предварительной обработки ИМК на параметры развития растений земляники сорта Трибьют во время адаптации.

Метод укоренения	Вариант обработки	Средние значения показателей
Количество листьев, шт	Длина черешка, см	Количество корней, шт	Длина корней, см
exvitro	ИМК 2 мг/л ИМК 5 мг/л Контроль (без обработки)	4,6 4,95 4,7	3,6 3,9 4,1	4,1* 4,6* 2,8	12,94* 10,3* 5,1
НСР 0,05	-	0,812	0,989	0,815	2,83

*Различия существенны.

В результате проведенных исследований и сравнения двух способов укоренения было выявлено, что результаты укоренения exvitroсорта Королева Елизавета по основным показателям (количеству и длине корней) не уступают таковым в укоренениеinvitro, а длина корнейexvitroрастений даже превышает длину корнейinvitroрастений в 1,5 раза. По данному сорту наблюдалось также увеличение количества листьев. Оно в 1,4 раза превосходило количество листьев уinvitroукоренных растений.

Сорта Трибьют и Маковка тоже дали хорошие результаты при укоренении exvitro.

Для сорта Трибьют количество корней, образованных при укоренении exvitroбыло несколько меньше, чем количество корней образованныхinvitro, но длинаexvitroкорней не уступала (при концентрации ИМК 2 мг/л).

Для сорта Маковка количество exvitroкорней было не меньше, чем количество корнейinvitro, а по длине они значительно превосходили корни, образованныеinvitro.

Табл.7. Развитие микрорастений земляники садовой при двух способах укоренения.

Сорт	Метод укоренения	Вариант обработки	Средние значения показателей
Королева Елизавета	Количество листьев, шт	Длина черешка, см	Количество корней, шт	Длина корней, см
exvitro	ИМК 2 мг/л ИМК 5 мг/л	5,6 5,4	3,6 3,7	4,6 4,8	23,4 23,9
invitro	-	4,0	4,1	4,8	15,9
Трибьют	exvitro	ИМК 2 мг/л ИМК 5 мг/л	4,6 4,95	3,6 3,9	4,1 4,6	12,94 10,3
invitro	-	4,3	4,6	5,1	12,6
Маковка	exvitro	ИМК 2 мг/л ИМК 5 мг/л	4,75 4,3	4,1 3,6	4,5 4,9	15,6 13,54
invitro	-	4,8	4,74	4,5	10,7

Необходимо отметить, что при укоренении exvitroмикрорастения всех сортов отличались по морфологическому строению. Отличалось строение корневой системы: корни растений, укоренныхinvitro, были утолщенные, ломкие, они повреждались при смывании с них агара и пересадке в грунт, они не ветвились, тогда как корни у растений, укоренныхexvitro, формировали корни второго и третьего порядка ветвления. В течение последующего роста различия в развитии усилились и наиболее проявились в формировании побегов: более чем в два раза больше побегов сформировалось у растений, укоренныхexvitro, чем у растений, укоренныхinvitro. Формирование усов у растений, укоренныхexvitro, началось намного раньше, чем у растений укоренныхinvitro. Кроме того, ростexvitroрастений, высаженных в горшки, был непрерывен, в то время как укоренныеinvitroрастения начали рост спустя 3-4 недели, после пересадки в горшки.

Рис.1.Длина корней у микрорастений земляники садовой при двух способах укоренения.

Рис.2. Количество корней у микрорастений земляники садовой при двух способах укоренения.