учебно-производственной практики

Отчет

отделения «Лабораторная диагностика»

Студента:
2 курса, группы «2А»
Низамутдиновой Ю.Б.

Ответственный руководитель (гл. м/с): Рутковская Н.И.
Непосредственный руководитель (ст. м/с): Лысенко Е.Л.
Методический руководитель (преподаватель колледжа): Башкирова О.Б.

Москва 2015

5 мая 2015г.

Общие сведения о больнице.

ФГБУ «Клиническая больница» Управления делами Президента РФ – многопрофильное медицинское учреждение, сформированное в советский перод.

Состоит больница из нескольких корпусов:

· Основной;

· Административный;

· Детский (дети от 3 до 18 лет);

· и отгороженная от остальной территории хозяйственная зона, в которую входят автобусный парк, патологическая анатомия, бактериологическая лаборатория, и др.

6 мая 2015г.

Структура главного корпуса.

Основной корпус также подразделяется на отделения:

· Анестезиология

· Урология (общая и андрология)

· Хирургия (и онкология)

· Гинекология

· Кардиология (два отделения)

· Кардиохирургия

· Колопроктология

· Гастроэнтерология

· Эндокринология

· Пульманология

· Неврология

· Травматология

· Окулисты

· VIP-терапия

· Лаборатория

· Экспресс лаборатория

7 мая 2015г.

Структура лаборатории.

Лаборатория (основная) состоит из участков:

· Общих клинических исследований

· Биохимии

· Серологии

· Группы крови

· Цитологии

· Моечной

8 мая 2015г.

Структура экспресс-лаборатории.

Экспресс-лаборатория состоит из приёмной, аппаратной и кабинета (там находятся холодильники с реактивами и недавними пробами; центрифуга, аппарат для тест-полоски мочи (Clinitec 100); компьютер с доступом к базе данных;хранится документация; также есть отгороженная подсобка – комната отдыха).

В аппаратной находятся анализаторы:

· KoneLab 20 (биохимический экспресс-аппарат)

· Gem Premier (аппарат для определения КЩ-баланса)

· EasyLite (Na/K) (определяет уровень электролитов в моче и сыворотке крови)

· Cormay Multi (фотоколориметр; в лаборатории используется как запасной б/х аппарат)

· Pentra 60

· Biosen C_line

Также там есть ещё две центрифуги и микроскоп.

12 мая 2015г.

Определение группы крови.

В этой лаборатории есть два метода для определения группы крови: стандартный (на планшетах), и в гелевых кассетах.

Стандартный: берётся планшет, в подписанные ячейки капаются, соответственно: анти-А, анти-В и анти-D (на резус) цоликлоны, а также перекрёст – кровь второй и третьей группы, для подтверждения А и В результатов (по капле), и цельную кровь из пробы. Результат определяется агглютинацией: если она есть – значит, тест положителен; нет – отрицателен.

Тест в гелевых кассетах: берётся гелевая кассета для определения группы крови, в первые четыре ячейки капается палзма (либо сыворотка), в оставшиеся две, соответственно надписям под ними, - перекрёст, А и В, и цельную кровь из пробы, предварительно смешанную с физраствором (1 мл ф/р на 25 мкл крови, по 50 мкл на ячейку). Затем кассета центрифугируется в специальной центрифуге, Grifols SPIN (центрифугирует в течение 9-ти минут), вытаскивается и смотрится результат. Он определяется по схожему принципу: агглютинация есть – значит, красный слой наверху; если её нет – то он опускается вниз. Сомнительные показатели в большинстве случаев следует понимать как положительные.

13 мая 2015г.

Тест крови на антитела.

Этот тест также проводится в гелевых кассетах: берётся гелевая кассета для определения положительности антител (принцип – непрямая проба Кумбса); в одну(!) ячейку закапывается цельная кровь из пробы, предварительно смешанная с физраствором (1 мл ф/р на 25 мкл крови, по 50 мкл на ячейку). Затем кассета нагревается в термостате (37^оС), ставится в центрифугу, вытаскивается и смотрится на предмет агглютинации (принцип тот же, что и с кассетами на ГК).

14 мая 2015г.

Тест на определение фенотипа крови.

Этот тест также проводится в гелевых кассетах: берётся гелевая кассета для определения фенотипа, в каждую ячейку закапывается цельная кровь из пробы, предварительно смешанная с физраствором (1 мл ф/р на 25 мкл крови, по 50 мкл на ячейку), и сразу ставится в центрифугу.

Принцип определения фенотипа тот же, что и в ГК, и в антителах.

15 мая 2015г.

Окраска цитологических мазков.

Используется окраска мазков по Романоскому: мазок фиксируется в эозин 5 минут, затем промывается под проточной водой и красится 30 минут метиленовым синим, смешанным с буфером в пропорциях 1:10 (стекло опускается полностью), либо 8 минут в чистом красителе (накапывается на предметное стекло). После окраски, стекло с мазком снова промывается проточной водой, и затем высушивается.

18 мая 2015г.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ)

АЛТ- это фермент, который катализирует обратное превращение α-кетакислотв аминокислоты, путем переноса аминогрупп. Т.к. специфическая активность АЛТ в печени почти в 10 раз выше, чем миокарде и скелетной мускулатуре, повышенная ее активность в сыворотке рассматривается как индикатор поражения паренхимы печени. АЛТ такж является наиболее чувствительным индикатором при заболевании гепатобилиарной системы, (значение, превышающее в 50 раз норму, рассматривается как индикатор вирусного гепатита, острого нарушения печеночной перфузии и острым некрозом печени, вызывающего в первую очередь экзотоксинами.

Повышенный уровень АЛТ позволяет выявить гепатит и другие заболевания печени, до появления явных клинических признаков. Увеличенная АЛТ также наблюдается при циррозе и внепеченочном холестазе. Незначительное увеличение отмечается также при принятии алкоголя или некоторых лекарственных препаратов (пенициллин, салициллаты, опиаты).

19 мая 2015г.

АЛТ (ход исследования)

В лабораторию поступает биоматериал с направлением; в компьютер (программа ЛИС) вводится подтверждение направления; для пробирки печатается штрих-код.

При поступлении крови, пробирка с ней центрифугируется (в анализе используется сыворотка либо плазма) и на нее наклеивается соответствующий штрих-код.

При поступлении мочи - на пробирку наклеивается штрих-код. В нее наливается моча. Пробирка с биоматериалом ставится в кюветку и отправляется в аппарат OLYMPUS. На выведенном от него компьютере нажимается кнопка СТАРТ.

Аппарат начинает работу; в течение его работы, при возникновении проблем - их устранять, и анализировать полученные результаты (отмечать повышенные и пониженные результаты).

Метод исследования: АЛТ переносит аминогруппу с аланина на 2-оксоглюторат с образованием пирувата и глютамата. Добавление к реакционной смеси пиридоксаль-фосфата обеспечивает максимальную каталитическую активность АЛТ. Пируват вступает в реакцию с NADH, катализированную ЛДГ, продуцируя лактат и NAD+. Уменьшение значения абсорбции в следствии потребления NADH измеряется при 340 нм и прямо пропорционально активности АЛТ в пробе.

Материал: сыворотка или плазма.

Реагенты:

Буфер ТРИС, рН 7,15 (37⁰С)	100 ммоль/л
L-аланин	500 ммоль/л
2-оксоглутарат	12 ммоль/л
ЛДГ	≥1,8 кЕ/л
NADH	0,20 ммоль/л
Пиридоксальфосфат	0,1 ммоль/л
Консервант	100 ммоль/л

20 мая 2015г.

Альбумин (Albumin)

Альбумин представляет собой самую большую фракцию белков плазмы человека (53-66%). Его основной биологической функцией является транспортировка и хранение большого количества лигандов, поддержание онкотического давления, помимо этого, альбумин является источником эндогенных аминокислот. Он связывает и способствует переходу в раствор неполярных соединений, таких как билирубин плазмы и длинноцепочечные жирные кислоты, а также многочисленные лекарственные средства. Гиперальбуминемия – редкое явление, которое выявляется при сильном обезвоживании организма и выраженном венозном застое. Гипоальбуминемия может быть обусловлена:

Снижением синтеза альбумина в крови, например, при заболеваниях печени или при безбелковых диетах.

Увеличением катаболизма в результате повреждения или воспаления тканей. Снижением поступления экзогенных аминокислот, вследствие мальабсорбции или голодания. Потерей белка при нефротическом синдроме, энтеропатиях или ожогах. Нарушением его распределения, например, при асците. Выраженная гипоальбуминемия приводит к серьезному нарушению внутрисосудистого онкотического давления, вызывая развитие отеков. Анализ концентрации альбумина в крови очень важен для понимания и интерпретации уровней содержания кальция и магния, т.к. эти ионы связаны с данным белком. Поэтому, снижение концентрации альбумина в крови непосредственно снижает и уровень этих ионов.

21 мая 2015г.

Альбумин (ход исследования)

Описание: колориметрический фотометрический тест для количественного определения альбумины в сыворотке или плазме человека на анализаторе OLYMPUS.

Принцип определения: при реакции бромкрезолового зелёного с альбумином образуется окрашенный комплекс. Его абсорбция измеряется в биохроматической реакции при 600-800 нм и прямо пропорциональна концентрации альбумины в пробе.

Материал для анализа: сыворотка крови.

Реагенты:

Сукцинтарный буфер (рН 4.2)	100 ммоль/л
Бромкрезоловый зеленый	0,2 ммоль/л
Консерванты

Ход исследования:

Пробирка с биоматериалом ставится в кюветку и отправляется в аппарат OLYMPUS. На выведенном от него компьютере нажимается кнопка СТАРТ.

Аппарат начинает работу; в течение его работы при возникновении проблем - их устранять, и анализировать полученные результаты (отмечать повышенные и пониженные результаты).

Референсные значения:

Сыворотка
Взрослые	35-52 г/л
Новорожденные (0-4 дня)	28-44 г/л

22 мая 2015г.

Аспартатаминотрансфераза (АСТ)

АСТ содержится во многих тканях, включая печень, миокард, скелетную мускулатуру, мозг, почки, лёгкие, поджелудочную железу,эритроциты и лейкоциты, причём, наибольшая её активность наблюдаетсяв печени и скелетной мускулатуре. Измерение АСТ показано при постановке диагноза, дифференциальной диагностике и мониторинге заболеваний гепатобилиарной системы, инфаркте миокарда и повреждениях скелетной мускулатуры. Также, уровень АСТ учитывается при подозрении на некроз печени (в 20-50 раз выше нормы), и любых повреждениях печени.

25 мая 2015г.

АСТ (ход исследования)

Назначение: Уф кинетическое определение аспартатаминотрансферазы в сыворотек и плазме человека на анализаторе OLYMPYS.

Принцип определения: АСТ катализирует трансаминирование аспарата и 2-оскоклютарат, при этом образуется L-глютамат и оксалоацетат. Добавление к реакционной смеси пиридоксаль-фосфата обеспечивает максимальную каталитическую активность АСТ. Оксалоацетат восстанавливается до L-малата в присутствии малатдегидрогеназы (МДГ), в то же время NADH превращается в NAD⁺. Пируват вступает в реакию с NADH, катализированную лактатдегидрогеназой (ЛДГ) с образованием лактата и NAD⁺. Снижение значений абсорбции, вследствие потребления NADH, измеряется до 340 нм и прямо пропорционально активности АСТ в пробе. Эндогенный пируват удаляется во время инкубационного периода.

Материал: сыворотка или плазма(ЭДТА, гепарин). В сыворотке и плазме АСТ стабильна в течение 7-ми дней при температуре хранения 2-8 ⁰С и в течение 3-х дней при 15-25 ⁰С. Пробы с гемолизом не следует использовать в исследованиях, т.к. активность АСТ в эритроцитах приблизительно в 15 раз выше, чем в плазме здорового человека.

Реагенты:

Буфер ТРИС, рН: 7,65 (37 ⁰С)	80 ммоль/л
L-аспарат	240 ммоль/л
2-оксоглутарат	12 ммоль/л
ЛДГ	≥0,9 кЕ/л
МДГ	≥0,6 кЕ/л
NADH	0,20 ммоль/л
Пиридоксальфосфат (Р-5-Р)	0,1 ммоль/л
Консервант

Ход исследования:

Референсные значения:

Мужчины	<50 Е/л
Женщины	<35 Е/л
Новорождённые	25-75 Е/л
Дети	15-60 Е/л

26 мая 2015г.

Белок общий

Общий белок сыворотки - представляет собой сумму всех циркулирующих белков и является основой составной части крови. Определение общего белка используется в диагностике и лечении различных заболеваний, включая заболевания печени, почек, костного мозга, а также нарушение метаболизма и питания.

Материал: сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин). В течение 30 дней при 2-8 ⁰С и 6 дней при 15-25 ⁰С.

27 мая 2015 г.

Белок общий (ход исследования)

Реагенты:

Гидроксид Na Тартрат К Сульфат Mg Йодид К

200 ммоль/л 32 ммоль/л 18.8 ммоль/л 30 ммоль/л

Ход исследования:

Метод:

Ионы меди в щелочной среде реагируют с белками, имеющими как минимум 2 пептидные связи, с образованием фиолетового комплекса. Абсорбция данного комплекса, измеренная при 540-680 нм, прямо пропорциональна концентрации белка в пробе.

Референсные значения:

Сыворотка
Взрослые	66-83 г/л
Новорожденные	41-63 г/л
Дети	57-80 г/л

28 мая 2015г.

Билирубин общий

80-85% образующегося за день билирубина производится из гемоглобина, высвобождавшегося из физиологически стареющих эритроцитов. Оставшиеся 15-20% являются результатом расщепления гем-содержащих белков, таких как миоглобин, цитохромы, каталазы и из костного мозга в результате неэффективного эритропоэза. Ряд заболеваний оказывает влияние на один и более этапов, вовлечённых в продукцию, потребление, хранение, метаболизм, и экскрецию билирубина. В зависимости от заболевания, в основном он приводит к гипербилирубинемии. Она же, в свою очередь, приводит к желтухе (включая гепатиты, гемолитические анемии, цирроз печени, холестаз). Встречается также хроническая гипербилирубинемия.

29 мая 2015г.

Билирубин общий (ход исследования)

Назначение: колориметрический фотометрический тест для количественного определения общего билирубина в сыворотке или плазме человека на анализаторе OLYMPUS.

Принцип определения: стабилизированная диазоновая соль, 3,5-дихлорфенилдиазон тетраборат (DPD), реагирует напрямую с билирубином, как в свободном состоянии, так и в связанном, в присутствии акцелератора, с образованием азобилирубина. Поглощение на 540 нм пропорционально концентрации общего билирубина в образце. Бланк пробы измеряется для снижения эндогенного влияния сыворотки.

Исследуемый материал: сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин). Билирубин стабилен в течение 7-ми дней при температуре 2-8 °С и в течение 1 дня при 15-25 °С. Не использовать пробы с гемолизом.

Ход исследования:

Реагенты (концентрация в реакционной смеси):

Кофеин	2,1 ммоль/л
3,5-дихлорфенилдиазон тетраборат	0,35 ммоль/л
ПАВ (поверхностно активное вещество)
Консерванты

Референсные значения:

Сыворотка
Взрослые	5-21 мкмоль/л
дети
0-1 день	24-149 мкмоль/л
1-2 дня	58-197 мкмоль/л
2-5 дней	26-205 мкмоль/л

1 июня 2015г.

Билирубин прямой

Существует прямой и непрямой билирубин: непрямой высчитывается из разности общего и прямого.

2 июня 2015г.

Билирубин прямой (ход исследования)

Принцип определения: стабилизированная диазоновая соль, 3,5-дихлорфенилдиазон тетраборат (DPD), реагирует с прямым билирубином в кислой среде, с образованием азобилирубина. Значения абсорбции при 570 нм прямо пропорционально концентрации прямого билирубина в пробе.

Исследуемый материал: сыворотка или плазма (гепарин). Прямой билирубин стабилен в защищённом от света месте, в течение 3-х дней при температуре при 15-25 °С. Не использовать липемичные пробы.

Ход исследования:

Реагенты (концентрация в реакционной смеси):

3,5-дихлорфенилдиазон тетрафлуороборат

0,07 ммоль/л 2,0 ммоль/л

Референсные значения: взрослые и дети - менее 3.4 мкмоль/л.

3 июня 2015г.

Глюкоза (Gluc)

Натощак уровень сахара в крови регулируется печенью, что обеспечивает его уровень в определенных границах. Снижение глюкозы до критического уровня (примерно 2,5 ммоль/л) ведет к дисфункции центральной нервной системы. Дальнейшее снижение уровня глюкозы ведет к гипогликемической коме. Значения глюкозы в крови непостоянны, завися т от мышечной активности и интервалов между приемами пищи. Эти колебания еще больше увеличиваются при нарушении регуляции сахара в крови, что характерно для некоторых патологических состояний когда уровень может быть пониженный или повышенный. Глюкоза в спинно-мозговой жидкости может быть низкой или вообще не определяться при определенных заболеваниях.

4 июня 2015г.

Глюкоза (ход исследования)

Описание исследования: ферментативный УФ тест для количественного определения глюкозы в сыворотке, плазме, моче и спинно-мозговой жидкости.

Реагенты (концентрация в реакционной смеси):

PIPES буфер(pH 7.6) ATA NAD+ Mg 2+ Гексогиназа (ГК) Г6Ф-ДГ Консерванты

24,0 ммоль/л ≥ 2,0 ммоль/л ≥1,32 ммоль/л 2,37 ммоль/л ≥0,59 kE/л ≥1.58 kE/л

Ход исследования:

При поступлении мочи – на пробирку наклеивается штрих-код. В нее наливается моча. Пробирка с биоматериалом ставится в кюветку и отправляется в аппарат OLYMPUS. На выведенном от него компьютере нажимается кнопка СТАРТ.

Аппарат начинает работу; в течение его работы при возникновении проблем – их устранять, и анализировать полученные результаты (отмечать повышенные и пониженные результаты).

Кровь хранится 7 дней (при температуре 2-8 градуса) или 2 дня при – 12-25 градусов.

Мочу хранить 2 часа при температуре от 2 до 25 градусов.

Спинно-мозговая жидкость не хранится.

Метод: глюкоза фосфорилируется гексокиназой в присутствии аденозин3фосфатом и ионов магния с образованием глюкоза-6-фосфатом и аденозиндифосфатом. Глюкоза-6-фосфатдигидрогиназа специфически окисляет глюкоза-6-фосфат до глюкаанат-6-фосфат, реакция сопряжена с восстановлением NAD до NADH. Повышение адсорбции при 340 нм прямо пропорционально концентрации глюкозы в крови.

Референсные значения:

Кровь (натощак)
Взрослые дети	4.1-5.9 ммоль/л 3.3-5.6 ммоль/л
Моча	0.1-0.8 ммоль/л
гемолизат	3.3-5.5 ммоль/л
СМЖ
взрослые	2.2-3.9 ммоль/л

5 июня 2015г.

Железо (Iron)

Железо принимает участие в различных жизненно важных процессах в организме, от клеточных окислительных механизмов до транспорта и поставки кислорода соматическим клеткам. Железо входит в состав переносящих кислород хромопротеинов, таких как гемоглобин и миоглобин, а также различных ферментов (цитохромоксидаза, пероксидаза). Остальное железо в организме входит в состав флавопротеинов, комплексов железо-ферритин и железо-трансферрин. Определяемая концентрация железа в сыворотке, это преимущественно Fe (III), связанное с трансферрином сыворотки, за исключением железа, присутствующего в крови в составе гемоглобина.

Низкий уровень железа наблюдается у большинства пациентов с железодефицитной анемией; в случаях острых или хронических воспалительных заболеваниях, таких как острая инфекция, иммунизация или инфаркт миокарда; острых кровотечениях; злокачественных образованиях; гидрокахексии; поздней беременности; менструальном кровотечении и нефрозе. Концентрация железа в сыворотке заметно снижается у пациентов в ответ на специфическую терапию анемии, обусловленную другими причинами, например, лечение пернициозной анемии витамином B12.

Концентрации железа в сыворотке, превышающие нормальные значения, наблюдаются при заболеваниях с перегрузкой организма этим ионом, как при гематохроматозе и при остром отравлении железом после перрорального или парентерального его приёма внутрь. Уровень железа может также быть увеличен и в случаях острого гепатита, отравления свинцом, острой лейкемии, талассемии или оральной контрацепции.

8 июня 2015г.

Железо (ход исследования)

Назначение: колориметрический фотометрический тест для количественного определения железа в сыворотке или плазме человека на анализаторе OLYMPUS.

Принцип определения: в кислой среде железо, связанное с трансферрином, диссоциирует на апо-трансферрин и свободные ионы железа. Соляная кислота и аскорбат натрия восстанавливает железо от трех- до двух-валентного. Ионы железа реагируют с 2,4,6-три-(2-пиридил)-5-триазин (ТПТ3) с образованием голубого комплекса, абсорбция которого измеряется бихроматически при 590 нм.

Материал: сыворотка или плазма (гепарин). Не использовать в качестве антикоагулянта ЭДТА, цитрат или оксаллат. В сыворотке или плазме аналит стабилен в течение 3-х недель при температуре хранения 2-8 °С и в течение 7-ми дней при 15-25 °С.

Ход исследования:

Кровь хранится 7 дней (при температуре 2-8 градуса) или 2 дня при - 12-25 градусов.

Реагенты (концентрация в реакционной смеси):

Глицериновый буфер(pH 1.7) L-аскорбиновая кислота 2,4,6-Три(2пиридил)-5-триазин Консерванты

215 ммоль/л 4,7 ммоль/л 0,5 ммоль/л

Референсные значения:

Мужчины	12.5-32.2 мкмоль/л
Женщины	10.7-32.2 мкмоль/л
Новорожденные	17.9-44.8 мкмоль/л
Дети до года	7.2-17.9 мкмоль/л
Дети	9.0-21.5 мкмоль/л

9 июня 2015г.

Кальций (АРСЕНАЗО III)

Общий кальций сыворотки состоит из трех фракций: свободный (ионизированный) кальций (50%), кальций, связанный белками (альбумин, глобулин)-45%, и кальций, входящий в состав комплексов, например, фосфатных, цитратных и бикарбонатных (5%). Физиологически наиболее значимой является ионизированный кальций, однако его трудно исследовать непосредственно. Его концентрацию можно определить по содержанию общего кальция и рН крови, от которого в большей степени зависит количество ионизированного кальция. Ионы кальция играют важную роль в передаче нервных импульсов, Значительное снижение концентрации ионов кальция приводит к титании мышц. Повышенная концентрация ионов кальция снижает нейромышечную возбудимость и приводит к мышечной слабости с другими более сложными симптомами.

10 июня 2015г.

Кальций (ход исследования)

Описание исследования: колориметрический фотометрический тест для количественного определения общего кальция в крови, моче.

Измерение кальция используется для диагностики и лечения заболеваний щитовидной железы, различных костных заболеваний, хронических заболеваний почек, мочекаменной болезни и титании (преходящих мышечных сокращений и спазмов).

Метод: основан на реакции ионов Ка с Арсеназо III с образованием комплекса, окрашенного в фиолетовый цвет.

Изменение абсорбции реакционной смеси измеряется биохроматически при 660/700нм. Увеличение абсорбции прямо пропорциональна концентрации кальция в пробе. Магний не оказывает значительного влияния на определение кальция с использование Арсеназо III.

Исследуемый материал: сыворотка или гепаринизированная плазма.

Сыворотка и плазма стабильны в течение 3 недель при 2-8 ⁰С и в течение 7 дней при 15-25 ⁰С.

Реагенты:

Имидазол Арсеназо III Фенол Тритон Х-100 Консерванты

01,-0,2%

Ход исследования:

Референсные значения:

Сыворотка, плазма
Взрослые	2,20-2,65 ммоль/л
Дети 0-10 дней	1,9-2,60 ммоль/л
Дети 2-12 лет	2,20-2,70 ммоль/л

11 июня 2015г.

Креатинин (энзиматический)

Креатинин – является продуктом метаболизма креатина и фосфокреатина, которые присутствуют только в мышцах. Поэтому образование креатинина пропорционально мышечной массе и величина ее практически постоянная. Измерение креатинина используется в диагностике и лечении заболеваний почек, а также оно информативно при оценке клубочковой функции почек и мониторинге почечного диализа. Однако он не чувствителен к ранним проявлениям почечной паталогии. При диагностике (подозрении) на опухоль проводится анализ не только на креатинин, но и на мочевину, т.к. соотношение в некоторых ситуациях имеет решающее значение. Уровень сыворточного креатинина зависит от возраста, веса тела, пола пациента (кахесия, ампутация конечностей, малая мышечная масса, большой возраст). Нормальное значение сыворточного креатинина не исключает ухудшение работы почек.

12 июня 2015г.

Креатинин (ход исследования)

Метод: в щелочной среде креатинин с пикриновой кислотой желто-оранжевое соединение. Скорость изменения абсорбции при 520-800 нм прямо пропорционально концентрации креатинина в пробе.

Исследуемый материал: сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин).

Креатини стабилен в течение 7 дней при 2-8 ⁰С. Моча: собирать мочу без использования консервантов, хранить при 2-8 ⁰С.

Ход исследования:

Реагенты:

Гидроксид натрия	120 ммоль/л
Пикриновая кислота	2,9 ммоль/л
Консерванты

Референсные значения:

Сыворотка/плазма
Мужчины до 50 лет	74 ммоль/л
Мужчины от 50 лет	72 ммоль/л
Женщины	58 ммоль/л
Новорожденные 1-4 день	45 ммоль/л
Дети до года	36 ммоль/л
дети	45 ммоль/л

15 июня 2015г.

Мочевая кислота (Uric acid)

Мочевая кислота является основным продуктом катаболизма пурина у человека и образуется из ксантина под влиянием ксантиноксидазы. Большая часть мочевой кислоты образуется в печени и выводится почками, при этом в организме имеется депо мочевой кислоты, определяемое балансом между синтезом и выведением. Гиперуриемия подразделяется на первичную и вторичную, при которых имеет место повышенная продукция или снижение выведения мочевой кислоты. Первичная гиперурикемия также известна как идиопатическая или врожденная форма. Около 1% больных первичной гиперурикемией имеют ферментный дефект метаболизма пурина, который приводит к перепроизводству мочевой кислоты. Первичная гиперурикемия связана с подагрой, синдромом Леша-Нигана, синдромом Келли- Сигмиллера и увеличением синтеза фосфорибозилпирофосфата. Вторичная гиперурикемия может быть вызвана увеличением поступления пурина с пищей, что сопровождается увеличением экскреции мочевой кислоты с мочой. Вторичная гиперурикемия связана с различными состояниями: почечная недостаточность, миелопролиферативные заболевания, гемолитические заболевания, псориаз, истинная полицитемия, избыточное потребление алкоголя, отравление свинцом, диета с повышенным содержанием пурина, голодание, истощение и химиотерапия.
Гипоурикемия (снижение концентрации мочевой кислоты в крови) может возникать в результате снижения продукции мочевой кислоты как в случаях наследственной ксантинурии, наследственного дефицита пурин-нуклеозидфосфорилазы и лечения аллопуринолом. Гипоурикемия также может возникнуть из-за уменьшения экскреции почками мочевой кислоты, что может иметь место при злокачественных опухолях, СПИДе, синдроме Фанкони, сахарном диабете, тяжелых ожогах и синдроме гиперэозинофилии. Кроме того, гипоурикемия может возникнуть в результате лечения препаратами, понижающими содержание мочевой кислоты, а также при применении рентгеноконтрасных средств.

При проведении анализа крови на мочевую кислоту и выявлении повышения концентрации мочевой кислоты в крови необходимо провести анализ на мочевую кислоту в суточной моче для определения ее концентрации. Результаты этих исследований могут помочь при выборе соответствующего лечения при гиперурикемии: препараты, понижающими содержание мочевой кислоты путем увеличения экскреции почками, или аллопуринол для снижения синтеза пурина.

16 июня 2015г.

Мочевая кислота (ход исследования)

Описание: колориметрический фотометрический тест для количественного определения мочевой кислоты в сыворотке, плазме и моче человека.

Принцип определения: мочевая кислота под действием уриказы разлагается на аллантоин и перекись водорода. Последняя реагирует с 3,5-дихлоро-2-гидроксибененсульфоновой кислотой (ДХБС) и 4-аминофеназоном в присутствии пероксидазы, с образованием краснов-фиолетового хинонимина, накопление которого определяется бихроматически при 660-800 нм. Интенсивность окраски реакционной смеси прямо пропорционально концентрации мочевой кислоты в пробе. При проведении анализа крови на мочевую кислоту и выявлении повышения концентрации мочевой кислоты в крови необходимо провести анализ на мочевую кислоту в суточной моче для определения ее концентрации. Результаты этих исследований могут помочь при выборе соответствующего лечения при гиперурикемии: препараты, понижающими содержание мочевой кислоты путем увеличения экскреции почками, или аллопуринол для снижения синтеза пурина

Исследуемый материал: сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин).

В сыворотке и плазме мочевая кислота стабильна в течение 7 дней при 2-8 ⁰С и 3 дней при 15-25⁰С. В моче мочевая кислота стабильна в течение 4 дней при температуре 15-25⁰С.

Ход исследования:

Кровь хранится 7 дней (при температуре 2-8 градуса) или 2 дня при - 12-25 градусов.

Мочу хранить 2 часа при температуре от 2 до 25 градусов.

Реагенты (концентрация в реакционной смеси):

Фосфатный буфер(pH 7.5) МАБД 4-аминофеназон Пероксидаза Уриказа ЭДТА Аскорбат оксидаза Консерванты

42 ммоль/л 0,15 ммоль/л 0,30 ммоль/л ≥5,9 kE/л ≥0,25 kE/л 0,72 ммоль/л ≥1,56 kE/л

Референсные значения:

Сыворотка
Мужчины	208.3-428.4 ммоль/л
Женщины	154.7-357.0 ммоль/л
Моча суточная	250-750 мг/день

17 июня 2015г.

Мочевина

Мочевина синтезируется в печени как конечный продукт метаболизма белков и аминокислот. Синтез мочевины зависит от дневного поступления белка и эндогенного метаболизма белка.

Концентрация мочевины в плазме зависит от ренальной перфузии, скорости синтеза мочевины и скорости клубочковой фильтрации, и может повышаться при острой хронической почечной недостаточности и перенальной азотемии. Определение мочевины и креатинина в сыворотке часто выполняются для дифференциальной диагностики функции почек.

18 июня 2015г.

Мочевина (ход исследования)

Метод: мочевина гидролизируется в присутствии воды до аммиака и углекислого газа. Аммиак образуется в первой реакции, реагирует с 2-оксоглуторатом и NADH в присутствии с ГДГ с образованием глутамата и NAD+. Снижение поглощения NADH в единицу времени прямо пропорционально концентрации мочевины в пробе.

Материал: сыворотка плазмы (ЭДТА и Li-гепарин), не использовать NH ₄-гепарин. Мочевина стабильна в течение 7 дней при 2-8⁰С и 2-х дней при 15-25⁰С. Не использовать при анализе гемолизные и иктеричные пробы.

Моча: рекомендуется использовать суточную без применения консервантов.

Ход исследования:

Реагенты:

ТРИС	100 ммоль/л
NADH	≥ 0,26 ммоль/л
Фосфат натрия	10 ммоль/л
ЭДТА	2,65 ммоль/л
2-оксоглуторат	≥9,8 ммоль/л
Уреаза	≥ 17,76 кЕ/л
АДФ	≥2,6 ммоль/л
ГДГ	≥0,16 кЕ/л
Консерванты	ммоль/л

Референсные значения:

Сыворотка/плазма
Взрослые	2.8-7.2 ммоль/л
новорожденные	1.4-4.3 ммоль/л
дети	1.8-6.4 ммоль/л
Моча	250-570 ммоль/день

19 июня 2015г.

Холестерин

Холестерин синтезируется в организме повсеместно и является неоходимым компонентом клеточных мембран и липопротеинов, а также он является предшественником синтеза стероидных гормонов и желчных кислот. Прогностическое значение общего холестерина в выявлении риска ишемической болезни сердца не велико. Холестерин транспортируется 2 классами липопротеинов (низкой и высокой плотности), каждый из которых играет противоположную друг другу роль в патогенезе нарушений липидного обмена. Определение концентрации общего холестерина играет только роль фактора необходимости дальнейшего исследования метаболизма липопротеинов (ЛПВП, ЛПНП, триглицеридов).

22 июня 2015г.

Холестерин (ход исследования)

Описание исследования: колориметрический фотометрический тест для количественного определения холестерина в крови.

При определении холестерина используется ферментативный метод. Эфиры холестерина гидролизуются холестеринэстеразой (ХЭ). Образовавшийся свободный холестерин окисляется холестериноксидазой (ХО) до холестен-3-один с одновременным образованием перекиси водорода, которая оксиляясь, соединяется с 4-аминотрипирином и фенолом в присутствии пероксидазы (ПОД), в результате чего образуется хромофор. Интенсивность окраски реакционной смеси, измеренной при 541/600нм, прямо пропорциональна концентрации общего холестерина в пробе.

Реагенты:

Фосфатный буфер(pH 6.5) 4-аминоатрипин Фенол Холестеринэстераза Хилестериноксидаза Пероксидаза Консерванты

103 ммоль/л 0,31 ммоль/л 5,2 ммоль/л ≥0,2 kE/л ≥0,2 kE/л ≥10.0 kE/л

Ход исследования:

Исследуемый материал:

Сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин). Не проводить измерения в иктеричных пробах. Триглицериды стабильны в течение 5-7 дней при 2-8 ⁰С.

Референсные значения:

Кровь (натощак)
Нормальные	˂5.2 ммоль/л
Пограничные	5,2-6,2 ммоль/л
Высокие	≥ 6,2 ммоль/л

23 июня 2015г.

Холестерин ЛПВП

Приблизительно 25% общего холестерина транспортируется во фракции ЛПВП. Многочисленные клинические и эпидемиологические исследования демонстрируют четкую обратную связь уровня холестерина ЛПВП и случаев ишемической болезни сердца. Предполагается, что поглощение и транспорт холестерина от ткани до печени действует как защитный фактор против развития атеросклеротических бляшек.

24 июня 2015г.

Холестерин ЛПВП (ход исследования)

Описание исследования: колориметрический фотометрический тест для количественного определения холестерина липопротеинов высокой плотности в крови.

Реагенты:

Антитела к человеческому бета-липопртеину Холестеринэстераза Хилестериноксидаза Пероксидаза Аскорбат оксидаза Good's буфер(pH 7.0) N-ЭтилN-(2-гидрокси-3-сульфопропил)-3,5-диметокси-4 флюоранилин (F-DAOS) 4-аминоатрипин Консерванты Детергент

варьируют 0,8 МЕ/л 4,4 МЕ/л 1,7 МЕ/л 2,0 МЕ/л 30 ммоль/л 0,20 ммоль/л 0,67 ммоль/л

Ход исследования:

Исследуемый материал: сыворотка гепаринизированная плазма. (Натощак и не натощак). Холестерин ЛПВП стабилен в течение 7 дней при 2-8 ⁰С и 2 дня при 15-25 ⁰С.

25 июня 2015г.

Щелочная фосфатаза (ЩФ)

Щелочная фосфатаза (ЩФ) имеется практически во всех тканях человеческого организма и содержится на клеточной мембране или в клеточной мембране. Особенно высок ее уровень в интерстициальном эпителии, канальцах почек, костях (остеобластах), печени и плаценте. Точная метаболическая функция ЩФ еще не полностью выявлена, однако известно, что этот фермент принимает участие в транспорте липидов в кишечнике и кальцификации костей. ЩФ вырабатывается в относительно равной пропорции печенью и костями. У 25% здоровых людей в сыворотке присутствует кишечная форма ЩФ, составляющая около 10% от общей активности ЩФ в образцах, взятых натощак.

Увеличение общей ЩФ происходит по физиологическим причинам или вызывается заболеваниями печени или костей. Физиологическое увеличение активности ЩФ выявляется у беременных, начиная со второго триместра, за счет плацентарной ЩФ, у растущих детей за счет костной ЩФ. Наиболее частой причиной повышения уровня ЩФ являются заболевания гепатобилиарной системы с патологическим повышением уровня ЩФ у 60% пациентов с заболеваниями печени и желчевыводящих путей. Уровень ЩФ может также повышаться при первичных заболеваниях костей, таких как остеомаляция, недостаточный остеогенез, недостаточность витамина D и первичные опухоли костей.

Уровень ЩФ может быть также увеличен при вторичных заболеваниях костей, таких как метастазы в кости, множественная миелома, акромегалия, почечная недостаточность, гипертиреоидизм, эктопическое окостенение, саркоидоз, туберкулез костей, а также при заживлении переломов. При заболеваниях костей, таких как болезнь Педжета, рахит, вызванный дефицитом витамина D, и метастазы в кости, активность ЩФ является хорошим признаком костной активности при отсутствии хронических заболеваний печени. Уровень общей ЩФ бывает повышенным только иногда при некоторых метаболических заболеваниях костей, таких как гиперпаратиреоидизм и остеопороз. Снижение уровня ЩФ выявляется при наследственной гипофосфатазии, пипопаратиреоидизме, ахондроплазии, при заболеваниях, сопровождающихся адинамией, например при диализе, при хроническом облучении и нарушениях питания.

26 июня 2015г.

ЩФ (ход исследования)

Описание: кинетическое колориметрическое количественное определение щелочной фосфатазы в сыворотке или плазме человека на анализаторе OLYMPUS.

Реагенты (концентрация в реакционной смеси):

2 амино-2 метил-1 пропанол (АМП) (pH 10.4) Р-нитро-фенил-фосфат Н-ЭДТА Сульфат цинка Ацетат магния Консерванты

0,35 моль/л 16 ммоль/л 2 ммоль/л 1 ммоль/л 2 ммоль/л

Принцип определения: активность ЩФ определяется путём измерения скорости преобразования р-нитро-фенил-фосфата (р-НФФ)в р-нитрофенол (р-НФ) в присутствии ионов магния и цинка и 2-амино-2-метил-1-пропанола (АМП) в качестве акцептора фосфата при рН 10,4.

Скорость изменения значений абсорбции в результате образования р-НФ измеряется биохроматически при 410-480 нм и прямо пропорциональна активности ЩФ в пробе.

Ход исследования:

Кровь хранится 7 дней (при температуре 2-8 градуса) или 2 дня при - 12-25 градусов.

Референсные значения:

Взрослые >17 лет	30-120 Е/л
Дети	Мальчики (Е/л)	Девочки (Е/л)
1-30 дней	75-316	48-406
30 дней- 1 год	82-383	124-341
1-з года	104-345	108-317
4-6 лет	93-309	96-297
7-9 лет	86-315	69-325
9-12 лет	42-362	51-332
13-15 лет	74-390	50-162
15-18 лет	52-171	47-119