Методы микробиологической диагностики дифтерии

А. Бактериологический

Материал: от больного – слизь и воспалительный налет из зева, носа, миндалин, носоглотки и т.д., на бактерионосительство – слизь из зева и носа.
Среда с теллуритом		Сывороточная среда
Микроскопия окраска по Граму, по Нейссеру и синькой Леффлера,	Свернутая сыворотка	Определение токсигенности преципитацией в агаре
Биохимические свойства – среды с глюкозой, сахарозой, крахмалом, цистином, мочевиной	Фаготипирование	Определение серотипа

Методы микробиологической диагностики коклюша

А. Бактериологический (на ранних стадиях заболевания)

Материал: слизь из носоглотки или частицы слизи, выбрасываемые при кашле
Среда Борде-Жангу		Казеиново-угольный агар
Микроскопия Окраска по Граму		Реакция агглютинации с коклюшной сывороткой 1 фазы (S-формы)
Микроскопия	Среда     МПА  КУА Борде- Жангу	Пестрый ряд
Реакция агглютинации с коклюшной сывороткой 1 фазы	Внутрикожная проба на кролике-альбиносе,  развитие некроза

 

Б. Серологический (на поздних стадиях заболевания) – реакция

агглютинации и РСК.

                   

В. Молекулярно-генетический – ПЦР.

Приложение к ЗАНЯТИЮ 5

А. Дифференциальные признаки возбудителей коклюша и паракоклюша.

Признак	Коклюшная палочка	Паракоклюшная  палочка
Рост на простом агаре	–	+
Образование коричневого пигмента на казеиново-угольгом агаре	–	+
Образование уреазы	–	+
Использование цитратов	–	+
Гемолиз	+	+
Лакмусовое молоко-коагуляция	–	+
Капсула	+	–
Проба Дольда	некроз	некроз
Агглютинация сыворотками: коклюшной палочки	++	+–
паракоклюшной палочки	+–	++

 

 

Б. Для бактерий рода Bordete lla характерен специфический тканевой тропизм к цилиарному эпителию респираторного тракта соответствующего хозяина. Патогенными для человека являются возбудитель коклюша (B. pertussis) и паракоклюша (B. parapertussis). В некоторых случаях B. bron choseptica вызывает коклюшеподобное заболевание у человека. Наиболее важным признаком, имеющим диагностическое значение, является содержание фимбриальных видоспецифических антигенов: коклюшных - 1,2,3; паракоклюшного - 14 и бронхосептического – 12, выявляемых в реакции агглютинации со специфическими сыворотками.

З А Н Я Т И Е6

Дата ______________

 

Тема: Микробиологическая диагностика туберкулеза,

Микобактериозов, лепры

План занятия:

1. Правила взятия и пересылки в лабораторию патологического материала от больного туберкулезом.

2. Морфология туберкулезных бактерий - микроскопия готовых препаратов.

3. Культуральные свойства туберкулезных бактерий. Рост туберкулезной палочки на жидких и твердых питательных средах (демонстрация).

4. Бактериоскопическая диагностика туберкулеза. Микроскопия материала с окраской по Цилю-Нильсену. Методы обогащения.

5. Бактериологическая диагностика туберкулеза. Применение метода микрокультур (метод Прайса) для ускоренной диагностики туберкулеза (разбор и демонстрация).

6. Палочка проказы - микроскопия готовых препаратов.

7. Изучение иммунопрепаратов, применяемых для диагностики и профилактики туберкулеза.

 

Методические указания

1. Материалом для исследования чаще служит мокрота. Реже используются моча, гной, спинномозговая жидкость, испражнения. Материал собирают в стерильную баночку, закрывают пробкой. К присылаемому на анализ материалу прилагается бланк лечебного учреждения, в котором четко указывается название материала, цель исследования и предполагаемый диагноз. Кроме того, указывается фамилия, имя, отчество и возраст больного.

2. Промикроскопировать готовые препараты-мазки туберкулезных бактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену. Препараты зарисовать.

 

Mycobacteriumtuberculosis Окраска по Цилю-Нильсену	Микрокультура Mycobacteriumtuberculosis	Mycobacteriumleprae Окраска по Цилю-Нильсену

 

 

3. Демонстрация роста туберкулезных бактерий на глицериновом бульоне, яичной среде Петраньяни и других средах.

4. Перед исследованием мокроту выливают в чашку Петри, поставленную на темном фоне. Из мокроты необходимо выбрать гнойные комочки, приготовить препарат-мазок, окрасить по Цилю-Нильсену. Промикроскопировать, обратив внимание на наличие прямых или слегка изогнутых тонких палочек, часто зернистых, расположенных одиночно или группами. Палочки окрашены в красный цвет, а лейкоциты, посторонние бактерии и слизь - в синий. Препарат зарисовать.

Если содержание туберкулезных бактерий настолько мало, что их не удается обнаружить в мазках, поэтому ранее широко пользовались одним из методов обогащения - методом осаждения или методом флотации.

Метод осаждения. К мокроте добавляют равное по объему количество однопроцентного едкого натра, плотно закрывают склянку и встряхивают ее в течение 5-15 минут до полного растворения мокроты, центрифугируют, сливают жидкость, осадок нейтрализуют 1-2 каплями десятипроцентного раствора соляной кислоты. Из осадка, в котором сконцентрированы туберкулезные бактерии, приготовляют мазки, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют.

Метод флотации. Мокроту помещают во флакон или колбу с резиновой пробкой емкостью в 250 мл, добавляют равное количество 0,5-1% едкого натра, встряхивают 5-10 минут до полной гомогенизации. Колбу помещают в водяную баню и прогревают при 55°С в течение 30 минут, затем добавляют около 100 мл дистиллированной воды и 1-2 мл ксилола, бензина или газолина. Смесь встряхивают в течение 5-10 минут, еще вливают в колбу около 100 мл дистиллированной воды (до установления уровня жидкости в узкой части горловины) и оставляют при комнатной температуре на 20-30 минут. Образовавшийся сливкообразный слой переносят пипеткой на предметное стекло, которое кладут на крышку водяной бани, нагретой до 60°С. На высохший мазок наносят новые порции материала до тех пор, пока весь флотационный экстракт не будет перенесен на предметное стекло. Сухой препарат промывают эфиром для удаления ксилола или бензина, фиксируют на пламени, красят по Цилю-Нилъсену и микроскопируют.

5. Знакомство с методом микрокультур (метод Прайса) для ускоренной диагностики туберкулеза. Демонстрационный препарат микрокультуры туберкулезной палочки промикроскопировать и зарисовать. Микрокультура возбудителя туберкулеза выглядит в виде тяжей или скоплений, похожих на канат или косу и состоящих из туберкулезных палочек.

6. Промикроскопировать и зарисовать готовые препараты палочки проказы. В отличие от туберкулезной палочки возбудитель проказы располагается параллельными рядами (в виде пачек сигар), преимущественно внутри клеток.

7. Ознакомление с составом и назначением следующих иммунопрепаратов: туберкулин Коха, очищенный туберкулин РРD-L, вакцина БЦЖ.