Основные способы заражения лабораторных жи­вотных.

Перед заражением животного шерсть в области инъекции патогенного материала выстригают ножницами и дезинфицируют кожу спиртом.

Подкожное заражение. Двумя пальцами левой руки поднимают кожу в области спины и в образовавшуюся складку правой рукой вкалывают иглу шприца, отклоняют ее в сторону и медленно вводят материал в объеме 0,5 мл. Складку кожи от­пускают, на место инъекции накладывают ватный тампон, смочен­ный дезинфицирующим раствором, быстро вынимают иглу шприца.

Внутримышечное заражение. Иглу шприца вводят в толщу мышц задней лапки, направляют под тупым углом к поверхности мышцы. Вводят 0,2 мл исследуемого материала,

Внутрибрюшинное заражение. Мышей держат головой вниз так, чтобы кишечник сместился книзу от места инъекции. Производится прокол брюшной стенки в подвздошной области, при этом ощущают провал иглы в брюш­ную полость. Медленно вводят 0,5 мл заразного материала.

Внутривенное заражение (в краевую ушную вену кролика). Выщипывают шерсть вдоль края уха, протирают место инъекции спиртом, захватывают левой рукой ухо, располагая большой па­лец около места укола. Иглу вкалывают в вену по направлению тока крови параллельно поверхности уха. Надавливают на пор­шень шприца. Если поршень идет свободно и кожа вокруг вены не набухает, материал поступает в вену. После введения 0,5 мл исследуемого материала вену прижимают дистальнее места инъек­ции, извлекают иглу и прижимают к месту укола кусочек стерильной ваты во избежание кровотечения.

Заражение через рот. Исследуемый материал смешивают с кормом или вводят через специальный резиновый или металлический зонд.

Кроме того, животных можно заражать путем внутрикожного втирания материала, введением исследуемого интраназально, на конъюнктиву глаза или в мозг.

2. Изучение некоторых факторов патогенности бактерий.

Гемолизин. Произведен посев культуры стафилококка на кровяной МПА. Гемолизин определяют по образованию зон разру­шения эритроцитов вокруг колоний в виде просветления питательной среды.

Плазмокоагулаза. Чистая культура стафилококка внесена в I мл стерильной цитратной плазмы крови кролика, разведенной 1:5. Реакция учитывается после инку­бации при 37⁰ С в течение 1,2, 4, 18 часов. При наличии у штамма ста­филококка плазмокоагулазы наблюдается коагуляция плазмы с образованием студнеобразного сгустка.

Гиалуронидаза гидролизует гиалуроновую кис­лоту, которая перестает образовывать сгусток при добавлении уксусной кислоты. Для определения этого фермента в пробир­ку с гиалуроновой кислотой вносят суточную культуру бактерий или фильтрат бульонной культуры и инку­бируют в течение 15 мин при 37⁰ С. Затем добавляют 2—3 капли концентрированной уксусной кислоты. В пробах, где содержится гиалуронидаза, образования сгустка не происходит.

Лецитиназа выявляется при посеве золотистого стафилококка на желточно-солевой агар, содержащий лецитин. Вокруг колоний, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском в виде радужного венчика.

Дермонекротоксин. Кролику внутрикожно вводят 0,2 мл двухмиллиардной взвеси стафилококка. При наличии у культуры дермонекротоксина на месте инъекции образуется инфильтрат с по­следующим некрозом ткани.

Постановка биопробы с целью диагностики ботулизма. Ис­следуемый материал (фильтрат, полученный из консервов домашнего приготовления – грибы), послуживший причиной отрав­ления больного вводят белой мыши внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. Мышь погибает с явлениями параличей.

3. Вскрытие и бактериологическое исследование трупа белой мыши, павшей в результате биопробы. Мышь заражают per os материалом (кусочки мяса), послужившим причиной пищевой токсикоинфекции. Исследуемые кусочки мяса растирают в ступке со стерильным песком в небольшом количестве физиологического раствора, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 минут для осаждения грубых кусочков материала и песка. Прозрачную надосадочную жидкость набирают шприцом со специальной изогнутой инъекционной иглой, конец которой затуплен с помощью напильника или надфиля, вводят через рот внутрижелудочно.

После осмотра трупа животного прикрепляют к препаровальной доске, располагая его брюшной стенкой вверх; ко­жу обрабатывают дезинфицирующим раствором или спиртом. Во избежание за­грязнения содержимым кишечника сначала вскрывают кожу, тупо отсепаровывая её от подкожной жировой клетчатки. Осматривают место инъекции и регионарные лимфатические узлы. Пинцетом захватывают мечевидный отросток грудины, подтягивая его вверх. Вырезают грудину вместе с прилегающими отрезками ребер и клю­чицы. После вскрытия грудной полости раскаленным скальпелем прижигают верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают миокард. При этом в капилляр пипетки поступает кровь из сердца. Проводят посев крови на МПА. Затем вскрывают брюшную полость, осматривают внутренние органы, производят посевы-отпечатки из органов на сектора чашки Петри с МПА. С этой целью при­жигают поверхность органа раскаленным скальпелем, отрезают кусочек и делают посев-отпечаток на пластинчатый МПА. Параллельно готовят маэки-отпечатки из пече­ни, почек, легких и селезенки, для чего кусочком органа прикасаются поверхностью разреза к предметному стеклу. Мазки фиксируют в пламени спиртовки, окрашивают по Граму, микроскопируют; посевы помещают в термостат.

Во время вскрытия необходимо следить за тем, чтобы зараз­ный материал не попадал на стол. Запрещается класть на стол инструменты, применяющиеся при вскрытии трупа. После вскрытия рабочее место убирают и дезинфицируют. Труп животного помещают в дезинфицирующий раствор. Ход исследова­ния оформляется протоколом по следующему образцу:

Протокол № 3

Бактериологическое исследование трупа белой мыши, павшей в результате биопробы.