Изучение факторов патогенности микробов на примере St.aureus.

а). Гемолизин. Произведен посев культуры стафилококка на кровяной МПА. Гемолизин определяют по образованию зон разрушения эритроцитов вок­руг колоний.

б). Плазмокоагулаза. Чистая культура стафилококка внесена в 1 мл стерильной плазмы крови. Реакция учитывается после инкубации при 37⁰ С в течение 2 часов. При наличии у штамма стафилококка плазмокоагулазы наблюдается коагуляция плазмы.

в). Дермонекротоксин. Кролику внутрикожно вводят 0,2 мл 2х-миллиардной взвеси стафилококка. При наличии некротоксина на месте инъекции образуется инфильтрат с последующим некрозом ткани.

3. Освоение биологического метода диагностики. Выполнить биопробу с целью диагностики инфекционного заболевания. Исследуемый материал введен белой мыши внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. Провести вскрытие и бактериологическое исследование трупа белой мыши, павшей от экспериментальной инфекции.

Способы введения исследуемого материала животным могут быть следующими: подкожный, внутрикожный, накожный, внутримышеч­ный, внутрибрюшинный, внутривенный, пероральный (через рот), иптраназальный (через нос), интрацеребральный (в мозг) и др.

Подкожный способ введения. Кроликам материал вводят под кожу спины или другой части тела, морским свинкам - под кожу живота или бока, мышам и крысам - под кожу спины или затылка.

Для подкожного введения кожу в месте введения предварительно освобождают ножницами от волос и смазывают дезинфицирующим раствором, затем захватывают двумя пальцами руки и у основания образовавшейся складки вкалывают иглу шприца, медленно вводят ее до половины, чуть отклоняя в сторону, чтобы не вылился вводи­мый материал. Затем складку кожи отпускают накладывают на иглу вату, смоченную спиртом или йодной настойкой, и быстро вынима­ют иглу.

Впутржожный способ введения. Инъекцию делают тонкой иглой (№18-20). Удобно использовать туберкулиновый шприц. Кожу, осво­божденную от шерсти, растягивают большим и указательным паль­цами; иглу вводят под острым углом срезом вверх. Правильно введен­ная игла просвечивает сквозь эпидермис. Исследуемый материал вво­дят медленно (обычно в объеме 0,1 мл); на месте введения образуется пузырек с поверхностью, напоминающей лимонную корочку.

Внутримышечное введение. Кроликам и морским свинкам материал вводят чаще всего в мышцу задней лапы, птицам - в мышцы груди.

Виутрибрюшинное введение. Животное удерживают в вертикаль­ном положении головой вниз, чтобы внутренние органы перемести­лись к диафрагме. Иглу вводят в нижнюю часть живота. Для инъек­ций применяют короткие иглы. Момент проникновения иглы в брюшную полость воспринимается как "провал". Предельные дозы введения: мышам - 1; свинкам - 5; кроликам - 10 мл.

Внутривенное введение. Кроликам материал вводят в краевую вену уха, мышам - в вену хвоста, морским свинкам - в сердце, птицам (ку­рам, голубям) - в вену, расположенную на внутренней поверхности крыла, которая хорошо видна после выщипывания перьев. Участок кожи, вокруг расположения вены для лучшего ее наполнения следу­ет предварительно протереть ватой, смоченной ксилолом или теп­лой водой. Нельзя допускать попадания пузырьков воздуха в шприц, т.к. это может стать причиной газовой эмболии.

Введение через рот. Исследуемый материал примешивают к кор му либо вводят через гибкий резиновый катетер или зонд. Есть и другие способы, когда материал вводят в пищевод с помощью шприца с иглой, имеющей на конце оливу, или закапыванием в рот, причем каждую следующую каплю вводят только после того, как животное проглотило предыдущую.

Введение через нос. Животному дают легкий наркоз, при этом ин­фекционный материал глубоко проникает в легкие. При глубоком нар­козе дыхание поверхностное, материал плохо втягивается. Предельные дозы: для мышей - 0,03-0,05; крыс - 0,05-0,1; свинок и кроликов - до 2 мл.

Введение в мозг. Мелким животным (крысам и мышам) материал вводят туберкулиновым шприцем с тонкой иглой, ограниченной ме­таллической муфтой, на глубину 1,5 - 2 мм в количестве 0,01 - 0,02 мл. Мышь удерживают рукой так, чтобы большим и указательным паль­цами можно было оттягивать кожу головы к затылку, а мизинцем и безымянным пальцами фиксировать хвост. Место инъекции смазыва­ют йодом, укол делают на уровне средней трети линии, соединяющей внутренний угол глаза с основанием уха. Материал вводят медленно, чтобы не вызвать резкого повышения внутричерепного давления. Предельная доза для морских свинок - 0,1 мл; кроликов - 0,3 мл; более крупных животных - 0,5-0,8 мл.

Вскрытие лабораторных животных и взятие материала для бактериологического исследования

Павшие или заболевшие животные должны быть вскрыты. Боль­ных свинок и мышей усыпляют с помощью эфирного наркоза. Кро­ликов умерщвляют путем введения 5 см³ воздуха в ушную вену. Вскры­тие делают на специальном столе, соблюдая правила асептики. Пе­ред работой надевают халат и резиновые перчатки. На столе долж­ны быть: доска мягкого дерева, два скальпеля, два пинцета (хирур­гический и анатомический), ножницы прямые и купферовские, бак­териологическая петля, банка с ватой, стекла предметные, горелка, стакан со спиртом и ватой па дне для инструментов, 2% и 5% ра­створ лизола, а также стерильные пробирки, чашки Петри, ватные тампоны, пипетки пастеровские, физиологический раствор и набор готовых питательных сред в чашках и пробирках.

Перед вскрытием шерсть животного обмывают ватным тампо­ном, смоченным 2% раствором лизола, труп укладывают на доску, покрытую стерильной бумагой, животом вверх. Лапки широко раз­двигают и прикалывают к доске иглами или привязывают к крюч кам по углам доски. После фиксации животного осматривают на­ружные покровы и разрезают кожу от лобка до нижней челюсти. По направлению передних и задних лапок кожу рассекают боковыми надрезами. Скальпелем отсепаровывают кожу от подкожной клет­чатки, осматривают паховые и подмышечные лимфатические узлы. Из измененных лимфатических узлов готовят четыре мазка-отпечатка и производят посев на питательные среды. После этого приступают к вскрытию грудной и брюшной полостей, остерегаясь попадания дезинфицирующего раствора внутрь.

Грудную полость вскрывают, подняв мечевидный отросток пин­цетом, ножницами перерезают ребра в области хрящей. Осматрива­ют грудную полость и при наличии изменений в органах из части их делают мазки-отпечатки и посевы на питательные среды. Из легких готовят три мазка-отпечатка. Обязательно исследуют кровь из серд­ца, для чего верхушку его прижигают раскаленным скальпелем и в этом месте, проколов мышцу стерильной пастеровской пипеткой, набирают кровь, готовят мазок и высевают на питательные среды.

Брюшную полость вскрывают, придерживая пинцетом переднюю брюшную стенку, и ножницами рассекают ткани от лобка до диаф­рагмы, а боковыми надрезами к паху и у диафрагмы широко откры­вают брюшную полость, сохраняя неповрежденным кишечник.

При осмотре органов брюшной полости особое внимание обращают на слизистую и печень. Из этих органов готовят мазки-отпечатки (из селезенки - 2, а из печени -1) и делают посевы в соответствующие среды.

Черепную коробку после удаления кожного покрова головы, вскрывают. Череп смазывают йодом и мелкой пилкой распиливают на уровне верхнего края глазницы, боковых затылочных костей и по наружному краю лобных костей.

Крышку черепной коробки удаляют и производят посев из моз­га. Головной мозг извлекают после пересечения спинного мозга на уровне большого затылочного отверстия.

После вскрытия труп животного сжигают или автоклавируют, а при невозможности это сделать заливают на сутки 5% лизолом или 5% карболовой кислотой. Инструменты тщательно очищают от кро­ви и стерилизуют кипячением в течение 40 мин, а доску для вскрытия заливают дезинфицирующим раствором.

Мазки-отпечатки на предметных стеклах фиксируют в смеси Ни­кифорова 10-15 мин, окрашивают и изучают. Посевы помещают в термостат.

С этой целью после осмотра трупа животное прикрепляют к препаровальной доске, располагая его при этом брюшной стенкой вверх; кожу обрабатывают дезинфицирующим раствором. Н рабочем столе должны находиться доска или кювета, залитая парафином, спиртовка, сосуд со спиртом, инструментами (ножницы, скальпель, пинцеты и др.) и ватой на дне, стерильные ватные тампоны, бактериологическая петля, стерильные пастеровские пипетки, предметные стекла, необходимые питательные среды.

Во избежание загрязнения содержимым кишечника сначала вскрывают кожу, тупо отсепаровывая ее от подкожной жировой клетчатки. Рассматривают место инъекции и регионарные лимфатические узлы. Пинцетом захватывают мечевидный отросток грудины, подтягивая его вверх. Вырезают грудину вместе с прилегающими отрезками ребер и ключицы. После вскрытия грудной полости раскаленным скальпелем прижигают верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают миокард. При этом в капилляр пипетки поступает кровь из сердца. Проводят посев крови на МПБ. Затем вскрывают брюшную полость, рассматривают внутренние органы, производят посевы-отпечатки из органов на сектора чашки Петри с МПА: прижигают поверхность органа раскаленным скальпелем, отрезают кусочек и делают посев-отпечаток на пластинчатый МПА из печени, почек, легких и селезенки. Параллельно готовят мазки-отпечатки, для чего кусочком органа прикасаются поверхностью разреза к предметному стеклу. Мазки фиксируют в пламени спиртовки, окрашивают по Граму, микроскопируют; посевы отправляют в термостат.

Во время вскрытия необходимо следить за тем, чтобы заразный материал не попадал на стол. Категорически запрещается класть на стол инструменты, применяющиеся для вскрытия трупа. После вскрытия рабочее место убирают и дезинфицируют. Труп животного помещают в дезинфицирующий раствор, сжигают или автоклавируют. Доску или кювету протирают спиртом и прожигают или заливают на сутки дезинфицирующим раствором. Инструменты стерилизуют кипячением или автоклавированием. Ход исследования оформляется протоколом.