1. Микрофлора почвы (демонстрация).
а) Определение общего микробного числа почвы. Навеску почвы (30 г), вносят в колбу с водой объемом 270 мл, готовят разведения 10-3, 10-4, 10-5, смешивают по 0,1 мл указанных разведений суспензии почвы с 40 мл расплавленного и остуженного до 400С MПA, затем выливают вторым слоем в чашки Петри с 2% МПА. Посевы инкубируют при 370 С в течение 18-24 часов, после чего определяют количество выросших на чашке колоний;
б) Определение перфрингенс-титра почвы при посеве ее различных разведений на молоко или среду Вильсона-Блера (агар с глюкозой, хлоридом железа и сульфитом натрия). Учет результатов проводят по свертыванию молока или образованию черных колоний Cl. perfringens через 48 часов на среде Вильсона-Блера. Нормативы санитарного состояния почвы представлены в таблице 7. Демонстрацию описать, зарисовать.
2. Микрофлора воды (демонстрация).
а). Определение микробного числа водопроводной и дистиллированной воды. Произведен посев 1 мл воды на чашку с МПА. Подсчитать количество выросших колоний -микробное число воды. Микробное число дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарственных средств (кроме лекарств для инъекций и глазных капель) не должно превышать 10-15.
Таблица 7. Санитарное состояние почвы по данным микробиологического исследования
| Характеристика почвы | Коли-титр | Перфрингенс-титр | Число термофильных бактерий в 1 г. почвы |
| Чистая Загрязненнная Сильно загрязненная | 1,0 и выше | 0,01 и выше | 102 - 103 |
| 0,9 – 0,01 | 0,009-0,0001 | От 103 – 105 | |
| 0,09 и ниже | 0,00009 и ниже | 105 – 4х106 |
б) определение, коли-титра и коли-индекса водопроводной воды бродильным мeтодом (демонстрация). Методика: водопроводная вода в количестве 333 мл (3 объема по 100,0 мл; 3 объема по 10,0 мл; 3 объема по 1,0 мл) засевается на глюкозо-пептонную среду. Посевы инкубируют в термостате при 370 С 24 часа. Из всех проб, где произошел рост с помутнением, кислото- и газообразованием производят высев на чашки Петри со средой Эндо. Чашки инкубируют в термостате при 370 С 16-18 часов. Учет результатов производят по наличию типичных колоний (окрашенных в ярко-розовый цвет лактозопозитивных), морфологии микроорганизмов из этих колоний (грамотрицательные палочки) и определению оксидазы путем посева колоний на фильтровальную бумагу, смоченную диметил-парафенилдиамином. При отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не изменяется, при положительной она окрашивается в синий цвет в течение 1 мин. Кишечная палочка оксидазной активностью не обладает. Грам-отрицательные палочки, не образующие оксидазу, пересевают в полужидкий глюкозный питательный агар, инкубируют при 370 С в течение 18-24 часов. Расчет коли-титра и коли-индекса осуществляется по специальным таблицам (пример табл. 8).
| Количество положительных результатов | Коли-индекс | Пределы индекса | Коли-титр | |||
| Из 3 объемов по 100 мл | Из 3 объемов по 10 мл | Из 3 объемов по 1 мл | Нижний | верхний | ||
| Менее 3 | - | - | Более 3300 | |||
| 0,5 | ||||||
| 0.5 | ||||||
| 0.5 | ||||||
| … | … | … | ||||
| … | … | … | … | … | … | … |
| 0,9 | ||||||
| Более 1100 | - | - | Менее 0,9 |
Таблица 8. Определение коли-индекса и коли-титра при исследовании воды
б) определение коли-титра и коли-индекса методом мембранных фильтров (демонстрация). Методика: мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуумному насосу. Мембранные фильтры предварительно стерилизуют кипячением в дистиллированной воде. Исследуемую воду фильтруют в объеме 500,0 мл. Затем фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашку Петри и после инкубации при 370 С в течении суток подсчитывают количество колоний красного цвета на фильтре. Колонии красного цвета переносят на фильтровальный диск, смоченный диметил-парафенилдиамином для определения оксидазной активности. При наличии оксидазы колонии окрашиваются в синий цвет. 2-3 колонии, не изменившие первоначальную окраску, пересевают в полужидкий глюкозный питательный агар, инкубируют при 370 С в течение 18-24 часов. При наличии газообразования подсчитывают число красных колоний на фильтре и определяют коли-индекс.
| Нормативы для питьевой воды - число микробов в 1 мл – не более 50 клеток, коли-индекс (количество кишечных палочек в 1 литре воды) - не более 2. Коли-титр - количество воды, в котором находится 1 кишечная палочка) – 500. |
3. Микрофлора воздуха. Санитарно-бактериологический анализ воздуха лаборатории (аптеки). Определяют микробное число аспирационным методом с помощью аппарата Кротова и количество санитарно-показательных микробов. Для определения общего числа микробов скорость просасывания должна быть 25 л/мин. с экспозицией 4-5 мин.; для обнаружения стафилококков - используется желточно-солевой или кровяной агар, длительность экспозиции составляет 10-15 минут. Количество выросших колоний пересчитывают на 1 м3 воздуха.
4. Анализ микробной загрязненности рабочих столов и аптечной посуды (выявление наличия кишечной палочки на руках сотрудников аптек). Исследование смывов с рук. Методика: стерильный тампон смачивают в среде Кесслера (пептонная вода с лактозой, желчью и генциан-виолетом). Этим тампоном делают смывы с обеих рук, протирая ладони, межпальцевые промежутки и подногтевые пространства. Тампоны, которыми производились смывы, помещают в среду Кесслера. Инкубация в термостате при 370 С 24 часа. Производится оценка характера роста Е. coli на средах Булира, Кесслера, Эндо и золотистого стафилококка на желточно-солевом и кровяном МПА.
