Макробиология газовой гангрены 6 страница

2. Бактеріологічний.

Для виявлення клостридій правця один флакон або пробірку з матеріалом, що досліджується, прогрівають у водяній бані при 80°С 20 хвилин, внаслідок чого пригнічується ріст сторонньої неспорової мікрофлори. Потім висівають на середовище Кітта-Тароцці, вміщують в термостат при і° 35°С.

Роблять мазок з посіву, при позитивному результаті виявляються клостридії правця,

пересівання на агар Цейслера: відбирають колонії і роблять посів на середовище Кітта-Тароцці.

При вивченні виділеної культури проводиться мікроскопія, визначається біохімічна активність.

Ставиться дослід нейтралізації на мишах з метою виявлення токсину. Даний дослід проводиться з перевитою.культурою і чистою, отриманою на середовищі Кітта-Тароцці. Першій групі тварин вводиться культура, другій групі — культура з антитоксичною сироваткою. При наявності токси-ну перша група мишей гине при характерних явищах, друга група виживає, так як токсин нейтралізується антитоксином, що міститься в сироватці.

Лікування

Для терапії використовуються такі препарати:

1. Гамма-глобулін крові людей, імунізованих проти правця.

2. Антитоксична сироватка, яку вводять внутрішньом'язово в дозах 100 000 — 200 000 АО.

3. Антибіотики — пеніцилін, тетрациклін, цефалоспорини

4. Протисудорожні засоби: 25% розчин сірковокислої магнезії,, аміназин, піпольфен, андаксим, кондельфін, у клізмах — хлоралгідрат.

Імунітет

При правцю в основному антитоксичний, недостатньо напружений, можливе, повторне захворювані

Профілактика

Для активної імунізації – АДП, АКДП, КДП.

Пасивна імунізація полягає у введенні антитоксичної
протиправцевої сироватки у видадку наявного поранення. Частіше при травмах проводиться пасивно-активна профілактика: вводиться протиправцева сироватки (обов'язкове введення за Безрідка), потім анатоксин Якщо виявляється підвищена чутливість до сироватки, то вводиться лише анатоксин.

Планові щеплення проводяться всім дітям від 6—7 місяців до 12 років.

У подальшому кожні 8—10 років проводяться ревакцинації. Імунітет зберігається 2—3 роки.

Загальна профілактика здійснюється шляхом попередження травм на виробництві і в побуті.

збудник Дифтерії

Збудник дифтерії — Corynebacterium diphteriae — паличка Леффлера, належить до сімейства Corynebacteriaceae. Рід коринебактерій включає і патогенних і непатогенних для людини мікробів. В основі хвороби лежить дія мікробної отрути, що впливає на життєво важливі системи: серцево-судинну, нервову, симпатико-адреналову (наднирники).

На слизовій носа і зіву, на кон'юнктиві ока зустрічають
ся також неііатогенні мікроби з роду Corynebacterium. Одні з них називаються псевдодифтерійними, наприклад, палички Гоффмана, інші — дифтероїдами, наприклад, Васt. xerosis. Збудник дифтерії вперше
описаний у 1883 р. Е. Клебсом, Він побачив у зрізах плівки,
знятої з зіву хворого, досить довгі, прямі або трохи зігну
палички. Через рік, І Леффлер виділив цей мікроб у чистій культурі, описав його властивості, запропонув, один із способів забарвлення, середовище для вирощуванії., Мікроб став називатись поличкою Леффлера.

Морфологія

Паличка пряма або трохи зігнута зі стовщенням на одному або обох кінцях, Рпор і капсул не утворюють, Нерухомі.

Характерними морфологічними ознаками цих бактерій є дві; взаємне розташування, наявність включень у проти плазмі. Взаємне їх розташування гарно можна розглянути на тонкому мазку. Палички лежать під кутом одна до одної і нагадують цифри V, X або розчепірені пальці руки.Включення – зерна волютину, тільця Бабеша – Ернста, при забарвленні за Леффлером, палички жовті, зерна – коричневі. Грам+.

Культуральні властивості.

На спец.середовищах, що містять сироватку або кров тварин – краще та швидше, ніж інші.

Середовище Ру – зсіла сироватка крові коня

Середовище Леффлера ¾ сироватки ¼ МПБ, що містить 1% глюкози. Колонії блідо-жовті, випуклі, з блискучою гладенькою поверхнею. Консистенція колоній дуже густа. Завдяки густій консистенції колонії не зливаються одна з іншою, навіть, якщо вони лежать дуже тісно і весь наліт здається зернистим, бугристим. Ці середовища незамінні, так як при рості на них зберігаються всі морфологічні особливості дифтерійних бактерій — розташування, зернистість.

Друга група спеціальних середовищ: телуритові середовища.

Додання до середовища телуриту калію робить її диференіцально-діагностичною, тобто колонії дифтерійних бактерій на таких середовищах набувають чорного або темно-сірого кольору.

Середовище Тинсдаля-Садикової (МПА ± нормальна коняча сироватка + цистин + телурит калію + гіпосульфіт натрію). До посіву середовище світле, жовтувато-сіре. Колонії дифтерійних паличок чорні з коричневим ореолом, відбираються вони легко. Недолік цього середовища: при рості на ній мікроби втрачають характерну морфологію і слід їх пересівати на середовище Ру, щоб робити з неї мазки для виявлення зернистості та розташування дифтерійних паличок.

Кров'яний телуритовий агар (агар+дефібринована кров (замість сироватки)+телурит калію). На цьому середовищі дифтерійні бактерії утворюють неоднорідні колонії в залежності від типу бактерій.

Розрізняють три типи бактерій дифтерії; 1. Тип gravis — виділяється при тяжкій формі хвороби.

2. Тип mitis виділяється при легкій формі.

3. Тип intermedius — проміжний.

Тип gravis утворює великі колонії R-форми сірого кольору (форма квітки маргаритки), без гемолізу.

Тип mitis — S-форма колонії; дрібні, гладенькі, чорні, оточені зоною гемолізу.

Тип intermedius займає проміжне положення; дрібні (R, S-форми), чорного кольору. На інших густих середовищах (Ру, Леффлера, Тинсдаля-Садикової) колонії дифтерійних
паличок різних типів не відрізняються. До рідких середовищ
належать: мартенівський бульйон. Типи gravis і mitis ростуть
по-різному тип gravis утворює плівку і зернистий осад, тип
mitis - рівномірне помутніння. Типи дифтерійної палички
відрізняються не лише культуральними властивостями, а й
деякими біохімічними.

Біохімічні властивості

Вивчення цих якостей має значення не лише для диференціації типів дифтерійного мікроба, але й для того, щоб відрізнити їх від інших коринебактерій, псевдодифтерійиих бактерій і дифтероїдів.

Враховується відношення до трьох цукрів: сахарози, глюкози, мальтози, крохмалю, сечовини і цистину.

Токсиноутворення

Токсин має дві властивості: токсичність і антигенність.

На місці проникнення екзотоксин викликає коагуляційний некроз епітелію, розширення судин, підвищення проникливості їх стінок. Течія" крові в судинах уповільнюється, спостерігається, вихід з, судин, плазми крові, багатої фібриногеном. У результаті цього виникає набрякання оточуючих тканин, а фібриноген при контакті з некротизованою тканиною перетворюється на фібрин, утворюючи фібринозну плівку. На ділянках, покритих.багатошаровим епітелієм (зів, горло), виникає дифтерійне запалення, при якому фібринозна плівка густо спання з нижньою тканиною. На слизових оболонках, покритих одношаровим циліндричним епітелієм (гортань, трахея, бронхи), розвивається крупозне запалення.

Якщо токсин вже пов'язався з клітинами, дія його неповоротна. Захист повинен полягати в тому, щоб у крові людини знаходились антитіла, здатні нейтралізувати токсин.

За антитоксичну (АО) беруть ту кількість сироватки, яка в досліді на морських свинках може нейтралізувати 100 dlm токсину. Вчені визначили, що людина буде захищена від дії дифтерійного токсину., якщо у неї в крові міститься не менше 1/30 АО на мл. Якщо антитіл менше, то імунітету немає.

Чи можна визначити, сприйнятлива людина до дифтерії, або чи є в неї імунітет? Для вивчння наявності імунітету може бути використана реакція Шіка. Це внутрішньошкірна проба, яка становить собою реакцію нейтралізації токсину антитоксином.

Створити антитоксичний імунітет можна штучно за допомогою анатоксину і антитоксичної сироватки. Утворення мікробами токсину є важливою ознакою патогеїщості: дифтерійні палички мають токсигенпість, псевдодифтерійні і дифтероїди — не мають. Це перевіряється на досліді РП в агарі, Для досліду використовується цистиновий агар, протидифтерійна антитоксична сироватка, досліджуваний матеріал. Проявлення реакції: утворення ліній преципітації в агарі між антитоксичною сироваткою і посівом токсичного мікроба.

Патогенез

Дифтерія належить до групи повітряно-краплишшх інфекцій. Хвора людина або носій при розмові, кашлі розбризкує дрібні крапельки слини або носового' слизу, які містять іікроби. Якщо такі краплини потрапляють на поверхню предметів (іграшки, посуд), вони можуть зберігатися на них від кількох годин до декількох днів.

Вхідними воротами інфекції найчастіше служать сли-юва зіву і носа, але можуть бути і слизові статевих органів, кон'юнктива ока, поверхня рани. Відповідно до цього розрізняють дифтерію зіву, носа, дифтерію ока, дифтерію статвих органів і дифтерію шкіри. Мікроби, що потрапили в організм, розмножуються і розносяться кров'ю в різні органи. Екзотоксин уражає сердцево-судинпу, нервову і симпатико-адреналову системи. На цій особливості механізму розвитку інфекції і основана лабораторна діагностика.

Лабораторна діагностика

Основний метод — виділення культури збудника.

Перший посів роблять на диференціально-діагностичних іНіііх середовищах, бо па них виявляються за кольором колонії:-чорні, темно-сірі.

Для вивчення морфології підозрілих культур робиться пересів на сер. Ру з якого, готують мазки для забарвлення за Грамом, синькою, за Нейссером. Останній спосіб дозволяє найбільш чітко виявити включення — темпі, майже чорні, на світло-жовтому фоні тіла паличок. Для вивчення біохімічної активності з середовища Ру роблять посів на строкатий ряд і на рідке середовище для постановки проби на уреазу (2% водний розчин сечовини змішують з ршиим об'ємом рідкої культури — звичайно по 0,3 мл і додають декілька краплин фенолфталеїну). Справжній збудник дифтерії середовище не змінює, так як уреазу не утворює. Межовий строк спостереження 2 години. Визначення токсиногенності можна проводити на морських свинках — токсин викликає некроз при внутрішньо-шкірному введенні культури. Але простіше й дешевше визначити цю властивість за допомогою РП на цистиновому агарі.

Прискорені методи

1. Бактеріоскопія з тампона робиться лише за вимогою лікаря. Для цього беруть матеріал двома тампонами, одним для посіву, іншим — для мазка.

2. Вирощування дифтерійних паличок прямо на сироватковому тампоні. Через 4 години цим тампоном роблять мазок. Вірогідність виявлення підвищується до 95 %, але морфологія часто не характерна: ще немає зернистості.

2. Люмінесцентна мікроскопія первинних мазків.

Специфічна терапія

1892 р. Берінг у Німеччині і Еміль Ру. у Франції запропонували лікувальну антитоксичну сироватку.

Специфічна профілактика АД – анатоксин, АДП – анатоксин, АКДП – анатоксин.

Патогенные анаэробы

В отличие от аэробов и факультативных анаэробов, строгие (облигатные) анаэробы живут только в условиях либо полного отсутствия кислорода, либо при незначительном его содержании. Однако:-н> столь же широко распространены в природе, как и первые. Естественной средой их обитания являются почва, особенно ее глубокие слои, ил различных водоемов, сточные воды, кишечный тракт млекопитающих животных, птиц, рыб и человека. Анаэробы встречаются всюду, где есть органические клм неорганические вещества и нет кислорода. Им принадлежит важная роль в процессах круговорота веществ в природе, в особенности азота и углерода, так как они обусловливают процессы соответственно гниения и брожения. Вместе с тем, строгие анаэробы составляют основную массу нормальной микрофлоры кишечника человека и млекопитающих животных, играют важную роль в обеспечении их видового иммунитета и поддержании нормальной жизнедеятельности.

Строгие анаэробы можно разбить на 2 основные группы: спорообразующие и не образующие cnof Спорообразующие анаэробы относят к роду Clostridium семейства Васillaсеае, а не образующие грамотрицательные бактерии — к родам Bacteroides и Fusobacterium; грамположительные — к Bifidobacterium и к семейству Lactobacillaceae. Существуют строгие анаэробы и среди грампожи тельных (семейства Micrococcaceae и Streptococcaceae) и грамотрицательных (семейство Veillonellaceae} кокков.

К строгим анаэробам относятся также метанообразующие (Methanobacteriaceae) и некоторые Mfff- гие бактерии. В патологии человека и животных основную роль играют анаэробные спорообразующре бактерии, относящиеся к роду Clostridium, а также неспорообразующие бактерии, принадлежащие ж родам Bacteroides, Fusobacterium и Campylobacter.

Клостридии

Бактерии рода Clostridium образуют овальные или круглые споры, располагающиеся субтермина,№-но, центрально или терминально. Как правило, споры имеют диаметр больше диаметра вегета клетки, поэтому палочка со спорой приобретает сходство с веретеном, отсюда и произошло рода Clostridium (веретеноподобные). Клостридий чрезвычайно широко распространены в природе Естественной средой их обитания служит кишечник травоядных животных и человека, а также почвг куда они поступают с испражнениями. В кишечнике человека и животных клостридий появляются вскоре после рождения. Удобренная навозом земля полей, пастбищ, огородов и садов всегда содержи" споры клостридий, которые при благоприятных условиях могут прорастать, а клостридий — размножаться (в летнее время и при наличии в почве необходимых питательных веществ). Для некоторых видов клостридий именно почва, содержащая органические вещества, является естественной средо:-. обитания. Проникнув вместе с кормом и пищей, загрязненными почвой, в кишечник животных ■ человека, клостридий обычно не вызывают заболевания. Патогенные клостридий вызывают заболевание в тех случаях, когда они проникают в раны, т. е. являются возбудителями раневых инфекций — газовой гангрены и столбняка; или когда они попадают в пищевые продукты, размножаются в них выделяют экзотоксины и вызывают пищевые токсикоинфекции (например, ботулизм). В иных случаях клостридиальная инфекция может иметь эндогенную природу, например, псевдомембранозный колит возникает как следствие нерациональной антибиотикотерапии, в результате которой в кишечнике начинает интенсивно размножаться Clostridium difficile, вызывая эту тяжелую болезнь.

Ключевые признаки рода Clostridium: крупные палочки с закругленными концами, обыч-подвижные, с перитрихиальными жгутиками, иногда неподвижные. Они образуют овоидные или круглые споры, которые расширяют клетку; грамположительны, по крайней мере, в течение ранней стадии роста; хемоорганотрофы, не восстанавливают сульфаты. Некоторые виды обладают сахаролити-ческими, другие — протеолитическими свойствами; некоторые виды — обоими, некоторые — ни теми, ни другими. Ферментируют глюкозу и другие углеводы с образованием кислоты и газа, некоторые штаммы не ферментируют глюкозу. Большинство штаммов является строгими анаэробами, хотя некоторые могут расти в присутствии воздуха. Некоторые виды фиксируют азот; каталазы обычно не образуют, а когда она есть, то в небольшом количестве. Содержание Г+Ц в ДНК варьирует б пределах 23-43 мол%.

Род Clostridium включает большое количество видов. Для удобства идентификации род поделен на 4 группы по локализации спор и способности разжижать желатин.

По крайней мере еще 36 видов клостридий были выделены из клинического материала от людей и 24 вида — от больных животных. Однако лишь для немногих доказана патогенность для человека и животных. К их числу относятся следующие виды: C.tetani — споры располагаются терминально, гидролизуют желатин — rpynnalV; C.botulinum, C.perfringens, C.novyi, C.septicum, C.sordellii, C.histolyticum, C.difficile, C.sporogenes (расположение спор субтерминальное, желатин гидролизуют, относятся к группе II). Основные различия между этими видами представлены в табл. 42.

Макробиология газовой гангрены

Газовая гангрена — тяжелая раневая инфекция, для которой характерны глубокая общая интоксикация и прогрессирующее омертвение тканей, сопровождающееся их отеком и газообразованием. Классическое описание симптомов газовой гангрены дал в 1864г. Н. И. Пирогов. Газовая гангрена является полимикробной инфекцией. К ее возбудителям относят: C.perfringens, C.novyi, C.septicum, C.histolyticum, C.sordellii, C.difficile и C.sporogenes. Первое место в этиологии газовой гангрены принадлежит C.perfringens, второе — C.novyi, однако нередко анаэробы — возбудители газовой гангрены — обнаруживаются в ранах в стойких ассоциациях не только друг с другом, но и с аэробными гноеродными кокками и гнилостными анаэробными бактериями. Различные сочетания возбудителей газовой гангрены с аэробными и анаэробными гноеродными и гнилостными бактериями могут значительно усугубить тяжесть течения анаэробной инфекции.

Основные свойства возбудителей газовой гангрены. Clostridium perfringens открыт в 1892г. М. Уэлчем и Г. Натталом. Нормальный обитатель кишечника человека и животных. Толстую неподвижную грам+ палочку со слегка закругленными концами. Споры овальные, располагаются субтерминально или, чаще, центрально, образуются лучше в щелочной среде. В материале из ран и на среде с сывороткой образуют капсулу. На жидких средах C.perfringens быстро растет, вызывая помутнение и энергичную ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа; ферментирует также лактозу, мальтозу и сахарозу, но не ферментирует маннит; молоко створаживает через 3-5 ч с образованием рыхлого сгустка и с отделением прозрачной сыворотки; разжижает желатин; на кровяном агаре образует колонии диаметром 2-5мм с зоной гемолиза и приподнятым центром. В столбике агара образуются дисковидные колонии.

C.perfringens обладает высокой инвазивностью и сильной токсигенностью. Первая связана со способностью возбудителя вырабатывать гиалуронидазу и другие ферменты, которые оказывают также и разрушающее действие на клетки соединительной ткани и мышцы. Главным фактором патогенности C.perfringens является вырабатываемый им сложного состава экзотоксин. Гемотоксическое, некроток-сическое, нейротоксическое, лейкотоксическое и летальное действия связаны с различными компонентами экзотоксина. Отдельные штаммы C.perfringens синтезируют экзотоксины разного состава и разной антигенной специфичности, в соответствии с которой различают 6 серологических типов этого возбудителя: А, В, С, D, E, F.

Серотип А — один из главных возбудителей газовой гангрены у людей. При заражении животных C.perfringens наблюдается обширное отслоение кожных покровов, распад мышечной ткани, кровянистый экссудат, пузырьки газа в подкожной клетчатке; мышцы дряблые, серого цвета, имеют вид вареного мяса. Некоторые серотипы C.perfringens (А, С, D, F) являются виновниками пищевых токсикоинфекций и тяжелых энтеритов, в патогенезе которых установлена ведущая роль некротоксинов и энтеротоксинов.

Clostridium novyi открыт в 1894г. Ф. Нови. Грам+ полиморфная толстая палочка с закругленными концами, в виде цепочек из 2-5 клеток. Капсулы не образует, подвижный перитрих. Споры овальные или круглые, располагаются субтерминально, редко — центрально. Наиболее строгий анаэроб, на жидких средах растет в виде легкого помутнения, дает большой осадок, наблюдается умеренная ферментация глюкозы с образованием газа. Молоко свертывает медленно, желатин разжижает. На кровяном агаре она образует серые бугристые колонии с приподнятым центром, отходящими отростками и зоной гемолиза; в столбике с агаром дает хлопьевидные колонии; ферментирует глюкозу, мальтозу, не ферментирует лактозу. Патогенность С.novyi обусловлена его способностью продуцировать очень сильный экзотоксин сложного состава, вызывающий при заражении животных характерный бесцветный или розового цвета отек желеобразной консистенции. Токсин обладает также гемолитическим и летальным свойствами.

Clostridium septicum выделен в 1877г. Л. Пастером и Ж. Жубером из трупа коровы. С.septicum — тонкая длинная полиморфная палочка, нередко образует нити, грам+, перитрих, капсулы не образует. Споры овальные, располагаются субтерминально или центрально, образуются быстро, уже через 24 ч. На жидкой среде вызывает помутнение, молоко свертывает медленно, гидролизует желатин, ферментирует глюкозу, лактозу, мальтозу с образованием кислоты и газа, не ферментирует маннит и сахарозу. На кровяном агаре колонии окружены зоной гемолиза и имеют тонкие многочисленные отростки; в столбике агара колонии имеют вид пушинок с уплотненным центром.

C.septicum патогенна для человека и домашних животных. Продуцируемый экзотоксин обладает некротическим, гемолитическим и летальным действием. При заражении животных вызывает кровянисто-серозный отек, мышцы имеют темно-красный цвет, в подкожной клетчатке и в мышцах — пузырьки газа.

Clostridium histolyticum открыт в 1916г. М. Вейнбергом и Е. Сегеном. Прямая палочка, подвижна (перитрих), капсул не образует, споры овальные, располагаются субтерминально, углеводы не ферментирует. Молоко быстро пептонизирует. На жидких средах дает общее помутнение. Колонии в столбике агара компактные, мохнатые, неправильной формы. На кровяном агаре колонии мелкие, прозрачные, как капельки росы, с узкой зоной гемолиза. C.histolyticum обладает сильными протеолитическими ферментами — быстро разжижает желатин; при заражении животных происходит протеолиз мягких тканей с обнажением костей и отпаданием конечностей. Продуцируемый экзотоксин при внутривенном введении животным вызывает быструю смерть. C.histolyticum в природе распространен сравнительно мало, встречается в почве, в сточных водах, иногда в кишечнике человека.

Особенности патогенеза газовой гангрены. Газовая гангрена — это своеобразный патологический процесс, который дает различные клинические проявления в зависимости от места локализации. Различают следующие формы этой болезни: анаэробная инфекция мягких тканей конечностей и туловища; анаэробная инфекция мозга; послеродовая или послеабортная анаэробная инфекция; анаэробная инфекция органов брюшной полости и брюшины; анаэробная инфекция органов грудной полости и анаэробный остеомиелит. Все они характеризуются единством патогенеза. Анаэробная инфекция в отличие от гнойных заболеваний, вызываемых аэробными бактериями, протекает без ярко выраженного воспаления. Для нее характерны: прогрессирующий некроз тканей, отек, газообразование в тканях и отравление организма токсинами возбудителя и продуктами распада тканей. Газовая гангрена встречается как в мирное, так и, в особенности, в военное время. Во время Великой Отечественной войны 1941-1945 гг. она наблюдалась у 1-14% раненых. В военное время чаще всего наблюдается газовая гангрена мягких тканей конечностей, особенно нижних. Надо иметь в виду, что патогенные анаэробы очень часто обнаруживаются в ранах, но для развития анаэробной инфекции необходимы определенные условия. Клостридии — некропаразиты, благоприятной средой для их размножения служат мертвые или поврежденные ткани. Поэтому наиболее опасны тяжелые повреждения с обширной раневой поверхностью, нарушением кровообращения, гематомами, размозжением мышц, раздроблением костей, образованием слепых ходов и т. п. Попадая в такие раны, клостридии начинают быстро размножаться в глубине поврежденной ткани (анаэробные условия) и выделять экзотоксины. Обладая высокой инвазивностью, они проникают и в здоровую ткань, вначале повреждая ее, а затем и некротизируя своими токсинами и ферментами. Особенно бурно процесс протекает в мышечной ткани, содержащей гликоген и являющейся хорошей питательной средой для клостридии. В патогенном действии клостридии и их токсинов различают 2 стадии:

1) образование отека. Вследствие действия токсина повышается проницаемость кровеносных сосудов для плазмы и клеток крови. Развитие отека приводит к сдавливанию ткани; кроме того, с отечной жидкостью поступает токсин. Все это приводит к повреждению тканей и делает их доступными для размножения клостридии;

2) развитие газовой гангрены, т. е. некроз мышечной и соединительной тканей. Газообразование является результатом ферментативной активности клостридии, а некроз — следствием некротокси-ческого действия токсинов и ферментов. Токсины не только действуют местно, но и вызывают сильнейшую общую интоксикацию (нейротоксическое действие). К специфической бактериальной интоксикации присоединяется отравление продуктами тканевого разложения. Чем больше зона поражения, тем сильнее и разнообразнее интоксикация организма. Таким образом, клиника газовой гангрены определяется общим и местным действием токсинов и ферментов клостридий, а также отравлением продуктами тканевого распада.

Инкубационный период длится от нескольких часов до 5 дней, иногда дольше. В зависимости от свойств и ассоциации клостридий, вызвавших анаэробную инфекцию, клиника ее может быть разной: эмфизематозная, токсическая (отечная), смешанная и т. п. Анаэробная инфекция продолжается 5-6 дней, и эти дни решают исход заболевания. Летальность во время первой мировой войны достигала 60%.

Постинфекционный и поствакцинальный иммунитет в основном опосредуется антитоксинами. Роль антимикробных антител второстепенна. Продолжительность и напряженность иммунитета после перенесенной инфекции изучены недостаточно.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат кусочки пораженных тканей (некротизированная и пограничные с ней участки) и отечная жидкость. Кроме того, исследованию в случае необходимости подвергают перевязочный и шовный материал (шелк, кетгут), одежду, образцы почвы; при пищевых интоксикациях, вызванных клостридиями, — испражнения и продукты. Микробиологическая диагностика заключается в выделении из исследуемого материала возбудителя и его идентификации, основанной на изучении морфологических, культуральных, биохимических свойств и определении токсигенности. Исследование состоит из нескольких этапов:

1) бактериоскопия отделяемого раны или экссудата;

2) выделение возбудителя и его идентификация;

3) заражение белых мышей исследуемым материалом, фильтратом бульонной культуры или кровью больных для обнаружения токсина;

4) идентификация токсина клостридий с помощью реакций нейтрализации специфическими антитоксическими сыворотками в биологических пробах на белых мышах или культурах клеток {С.difficile).

Для выделения клостридий используют следующие среды: А. Жидкие накопительные (казеиновые или мясные, содержащие 1 % глюкозы и кусочки печени, перед посевом кипятят и заливают вазелиновым маслом для создания анаэробных условий), молоко. Б. Плотные — кровяной агар Цейсслера (15% дефибринированной крови + 2% глюкозы); кровяной агар с бензидином (колонии C.novyi на такой среде чернеют на воздухе); среда Вильсон-Блера в длинных стеклянных трубочках (C.perfringens в такой среде уже через 3-4 ч вызывает почернение в месте своего размножения за счет образования сернистого железа из Na2S и FeCl3 и бурное газообразование за счет ферментации глюкозы); среда Виллиса-Хоббса (содержит, кроме питательного агара, лактозу, индикатор, яичный желток и обезжиренное молоко). На этой среде колонии C.perfringens окрашены в цвет индикатора (ферментируют лактозу), имеют ореол опалесценции (наличие лецитиназы); колонии C.novyi бесцветные (не ферментируют лактозу), окружены зоной опалесценции (лецитиназа); колонии C.septicum окрашены в красный цвет (ферментируют лактозу), но не имеют зоны опалесценции; колонии C.histolyticum — бесцветны, окружены зоной просветления; колонии Материал для исследования делят на две части. Одну часть засевают на плотные дифференциально-диагностические (Виллиса-Хоббса и др.) и жидкие среды без прогревания, а другую — после прогревания при 80 °С 15мин и при 100 °С (5 мин, 10 мин, 20 мин) засевают в жидкие мясные или казеиновые среды и инкубируют при 37 °С от 16 ч до 15 сут (для прогретых проб). Выросшие культуры, содержащие массу грамположительных палочек, пересевают на плотные дифференциально-диагностические среды (Виллиса-Хоббса, Вильсона-Блера и др.) для получения изолированных колоний, а затем чистых культур и их идентификации.

При посеве исходного материала на дифференциально-диагностические среды после инкубации при 37 °С в течение 1-7 сут колонии, вызвавшие соответствующие изменения на одной из этих сред и состоящие из грамположительных палочек, пересевают на мясные или казеиновые среды для дальнейшей идентификации. Для ускоренной диагностики газовой гангрены О. А. Комковой предложен следующий метод: посев производится в столбик полужидкого агара, к которому добавляется антитоксическая сыворотка. В такой среде с гомологичной антитоксической сывороткой клостридий вместо диффузного помутнения образуют изолированные колонии, а в препаратах-мазках из них имеют вид стрептобацилл (располагаются цепочками). Лечение и профилактика. Главный метод предупреждения газовой гангрены — своевременная и правильная хирургическая обработка ран. В случае особо тяжелых ранений, которые могут повлечь развитие газовой гангрены, больному с профилактической целью вводят по 10 000 ME антитоксических сывороток против наиболее частых возбудителей — C.perfringens, C.novyi и C.septicum. С лечебной целью вводят те же сыворотки по 50 000 ME. При отсутствии эффекта сыворотки вводят повторно. Серотерапия должна обязательно сочетаться с эффективной антибиотикотерапией и соответствующим общеукрепляющим лечением.