Реакция агглютинации на стекле.

На обезжиренное предметное стекло наносят каплю взвеси стафилококков, каплю любой другой культуры и каплю физраствора. Капли на стекло наносят гак, чтобы между ними было расстояние. Восковым карандашом на стекле помечают, где какая капля. Во все капли добавляют по одной капле сыворотки, физраствор является контролем. Реакция протекает при комнатной температуре в течение 1-3 минут. Контроль останется прозрачным, в первой капле должны появиться хлопья агглютината, следовательно, здесь есть антитела, а во второй капле появится муть, в этом случае результат реакций считают положительным. При отрицательном результате реакции в первой капле будет видна равномерная муть.

Развернутая реакция агглютинации.

Берут 8 одинаковых пробирок, 2 из которых контрольные (КС - контроль сыворотки, КА - контроль антигена). Сыворотку больного обычно разводят от 1:50 до 1600, иммунную сыворотку разводят до титра или до половины титра (титром агглютинирующей сыворотки называют ее максимальное разведение, в котором она агглютинирует гомологичные клетки). На каждой пробирке указывают степень разведения сыворотки. На первой пробирке пишут номер опыта или название антигена.

В проб. №1 делается рабочее разведение путем добавления; 4,9 мл изотонического раствора хлорида натрия, к 0,1 мл сыворотки, разведения равно 1:50.

В проб. №2 1:100

В проб. №3 1:200

В проб. №4 1:400

В проб. №5 1:800

В проб. №6 1:1600

В каждую пробирку, кроме контроля сыворотки, начиная со второй, добавляют 1-2 капли антигена (диагностикума или свежеприготовленной взвеси бактерий). Пробирки помещают в термостат при 37°С. Предварительный учет результатов реакции производится через 2 часа, окончательный через 18-20 часов, В пробирках должны появиться зерна или хлопья агглютината, надосадочная жидкость может быть мутной, контроль сыворотки должен остаться прозрачным.

Учет результатов начинают с контролей. Контроль сыворотки должен оставаться прозрачным, контроль антигена - равномерно мутным. Результаты учитываются как + и - в зависимости от величины бляшки осадка. Интенсивность реакции: следующим образом:

++++ все клетки осели, жидкость в пробирке совершенно прозрачна. Результат реакции резко положительный.

+++ осадок меньше, нег полного просветления жидкости. Результат

реакции положительный.

++осадок еще меньше, жидкость мутная. Результат реакций слабо

положительный.

+ незначительный осадок, жидкость мутная. Сомнительный

результат реакции.

- осадка нег, жидкость равномерно мутная. Отрицательный результат реакции.

 

Контрольные вопросы.

1. Какие компоненты участвуют в серологических реакциях? Почему реакции называют серологическими, из скольких фаз они состоят?

2. Что такое реакция агглютинации? Ее использование и методы проведения. Что такое диагностикум?

3. Каким антигеном пользуются при исследовании сыворотки больного? Какой сывороткой определяют вид неизвестного микроба?

 

 

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА № 11