Тема № 25. Бактерии рода Salmonella

Цель занятия: Усвоить правила отбора и пересылки патологического материала в лабораторию, порядок и методику исследования его для выделения и идентификации возбудителей сальмонеллезов.

Материалы и оборудование: Посевы, сделанные студентами на прошлом занятии; питательные среды МПА, МПБ, агар Эндо, агар Плоскирева, среды Кларка и Симмонса, среда с лактозой, среды индикаторные для определения индола и сероводорода, диагностические агглютинирующие сыворотки для серогрупповой типизации Е coli и сыворотки агглютинирующие для видовой дифференциации сальмонелл. Для демонстрации: таблица — схема проведения исследования на сальмонеллез. Биопрепараты.

Возбудители сальмонеллезов (паратифозов) к роду Salmonella, семейству Enterobacteriacea. Род сальмонелл по новой классификации (Берги, 1984) включает пять подродов и большое количество видов. Здесь приведены лишь те виды, которые входят в первый подрод и имеют наибольшее значение в заболевании животных: Salmonella enteritidis (dublin), S. choleraesuia (suipestifer). S. typhisuis. S. typhimurium. S. Abortusegui, S. abortusovis. S.pullorum (S. gallinarum). Родовая дифференциация сальмонелл основана на определении их культурально-биохимических свойств и антигенной структуры. Биохимические свойства их разнообразны как у отдельных подродов, так и в пределах одного и того же серологического варианта. Различие биохимических признаков сальмонелл положено в основу их подразделения на подроды и виды. Определение же серовариантов сальмонелл проводят на основе изучения их антигенной структуры.

Патологический материал. При септической форме сальмонеллеза посылают для исследования либо целый свежий труп, либо трубчатую кость, долю печени с желчным путём, почку, селезенку, брыжеечные лимфоузлы, сердце.

Микроскопия. Из тканей органов готовят препараты-отпечатки, после выделения культуры возбудителя болезни препараты-мазки окрашивают по Граму. Препараты, приготовленные методом «висячая» или «раздавленная» капля, микроскопируют для выявления подвижности сальмонелл (или их подвижность определяют посевом в полужидкий

МПА). Окрашенные препараты исследуют под микроскопом. Сальмонеллы окрашиваются грамотрицательно. Форма их палочковидная, величина 2—4 мкм. спор и капсул не образуют, располагаются обычно одиночно, иногда попарно. В основном подвижные (перитрихи), заисключением S. pullorum.

Культуральные свойства. После получения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий различают по родовой принадлежности, затем дифференцируют до вида и серовара. Первичные посевы из поступившего в лабораторию материала осуществляют на элективные среды. Наиболее часто используют: агар Эндо, среду Плоскирева, агар Левина, висмут-сульфит-агар. Засевают также в МПБ и на МПЖ. Оптимальньй рН среды 7,2—7,4. На средах Эндо, Плоскирева и Левина сальмонеллы растут в виде бесиветных или серовато-голубых колоний, на висмут-сульфит-агаре — образуют черные колонии. Вжидкой среде (МПБ) рост сальмонелл проявляется помутнением среды на МПА — гладкими бесцветными прозрачными или серо-голубоватыми колониями с ровными краями. Оптимальная температура роста 37—38 °С. При исследовании испражнений на наличие сальмонелл рекомендуется делать посевы на среды обогащения, способствующие подавлению роста кишечной палочки и накоплению сальмонелл (среды Шустовой и др.). При наличии протея (часто присутствует в фекалиях) происходит подавление роста сальмонелл. Выделенную чистую культуру для установления родовой принадлежности засевают в набор дифференциально-диагностических питательных сред для определения биохимической характеристики. Сальмонеллы ферментируют глюкозу, манит, растут на агаре Симмонса (усваивают цитратно-аммонийные соли), не сбраживают лактозу, сахарозу, не расщепляют мочевину, не гидорлизуют не разжижают желатину, не образуют индол. Большинство вилов сальмонелл образуют сероводород, даютположительную реакцию с метиловым красным (среда окрашивается в розово-красный цвет), отрицательную реакцию Фогеса — Проскауэра (желтое окрашивание среды).