Микробиологическая диагностика

Лекция 20 (4.09.12)

Коринебактерии дифтерии. Микобактерии туберкулеза.

Туберкулез

Эпидемический порог по заболеваемости 1,5 %

по красноярскому краю на сегодняшний день 3,2-3,4 % - эпидемия туберкулеза

Первичная лекарственная устойчивость микробактерий туберкулеза - 49%

Вторичная лекарственная устойчивость микробактерий туберкулеза - 74-78%

Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза

1. Первичная лекарственная устойчивость

2. Приобретенная (вторичная)

3.

Смертность от инфекционных заболеваний по Сибирскому региону - 80 %

Туберкулез - хроническое инфекционное заболевание, проявляющееся поражением органов дыхания, костей, суставов, кожи, мочеполовых органов и т.д.

Характеризуется образованием специфических гранулем. В пораженных органах и тканях - формированием клеточно-опосредованной гиперчувствительности.

Отдел: Firmicutes

Порядок: Actinomycetalis

Семейство: Mycobacteriaceae

Род: Mycobacterium

Вид: M. Tuberculosis (95% случаев туберкулеза у человека)

M. Bovis (5% крупный рогатый скот, верблюды, собаки и кошки)

Эпидемиологически значимы - возбудителя выделяют с мочой, калом, слюной и мокротой. Все это является фактором передачи и молоко, мясо.

-M. Africanum (основной возбудитель туберкулеза в Африке)

Морфо-тинкториальные свойства

· Тонкие прямые или слегка изогнутые палочки

· Полиморфные палочки

· Размер 1-10мкм длина, ширина 0.2-0.6 мкм

· Способны образовывать L формы сохраняющими инфицированность, т к в клеточной стенке много липидов и восков

· Грам «+», но окрашиваются плохо

· Не подвижны

· Капсула и спора -

· Кислотоустойчивые

· Агрессивное окрашивание прогревание и обесцвечивание

Культуральные свойства

Микобактерии аэробы

· Опитмальная температура 37-38

· pH 6,8-7,2

· Требовательны к питательным средам (яйцо, глицерин белки витамины и другие факторы роста) Cреда левеншьейна Йенсена, финна-2

· Растут очень медленно (время генерации 16-18 часов)

· На твердых питательных средах появляются через 14-40 дней

· Цвет топленого молока, слоновой кости

· Шероховатые бугорчатые колонии сухие

· На жидких питательных средах вырастает сухая крошковатая пленка (т.к. липиды и воски) на 7-10 сутки

Эпидемиология

Источник инфекции больной человек активный бациловыделитель, реже животные

Основной путь заражения: воздушно капельный, контактный, возможен алиментарный, редко трансплацентарный.

Резистентность

В окружающей среде очень высокая т.к. много липидов и восков в клеточной стенке.

· Рассеянный солнечный свет 8-10 суток могут выдерживать

· При воздействии прямого солнечного света погибают через 45-55 минут

· В различных объектах сохраняется от месяца до года

К обычным дезинфектантам в обычном количестве и экспозиции не чувствительны,

быстрая резистентность

Факторы патогенности

1. Туберкулопротеины (56% остатка клетки - белки)

- Основные АГ

- Высокотоксмчны

- Вызывают гуморальный и т клеточный иммунный ответ

- Вызывают Развитие ГЗТ (4 тип аллергии)

2. Липиды (10-40% сухого остатка клетки). Состоят из нейтральных жиров, восков, стеринов, фосфатидов, сульфатидов, жирных кислот.

Жирные кислоты (фтоидная, миколовая и др) токсическое действие на ткани

Фосфатидная фракция (содержит фтиоидную кислоту) - специфическая тканевая реакция с образованием эпителиоидных клеток

Восковая фракция (содержит николувую кислоту) - образование гигантских многоядерных клеток

3. Токсический гликолипид (Корд - фактор) - главный фактор патогенности. Располагается в клеточной стенке.

По химической природе - полимер, состоящий из трегалозы, николовой и миколовой жирных кислот.

Корд фактор эффекты

· Оказывает токсическое действие на ткани

· Препятствует фагосомо-лизосомальному слиянию в фагоците - защищает от фагоцитоза

· Блокирует окислительное фосфорилирование в митохондриях макрофагов - защищает палочки от завершенного фагоцитоза

· Подавляет миграцию лейкоцитов в очаг воспаления

Патогенез

Первичное попадание в легкие → Микобактерии достигшие альвеол поглощаются макрофагами (не завершенный фагоцитоз) → В регионарный лимфо-узел → Размножаются микобактерии в макрофаге → Белковые факторы сенсибилизируют организм в течении 2-8 недель, в период внутриклеточного размножения развивается специфическая клеточно-опосредованная реакция (гиперчувствительность замедленного типа) в этот период ее можно выявить пробой манту (у детей это туберкулезная интоксикация) → лимфоциты продуцируют + моноциты в этот очаг, под воздействием липидов они превращаются в эпителиоидные клетки ограничивая очаг от близ лежащих тканей → Образуется гранулема → Скопление микобактерий в центре обволакиваются клетки микобактерий (снижение количества О2 - наличие некроза в гранулеме)

→ Уход в состояние анабиоза и могут храниться в гранулеме десятилетиями. В очаге все гибнет из за отсутствия О₂.

Фибробласты синтезируют коллаген → происходит кальцификация, но микроорганизмы не погибают.

 

Очаг в легких+ Лимфаденит (лимфоузел в корнях легких) + Лимфангоит (лимфатические сосуды от очага к лимфоузлу) = первичный туберкулезный комплекс.

Исходы контакта с М. tbs.

Встреча с М. tbs. → первичный tbs. Бугорок

1 исход: полное заживление и кальцификация без развития заболевания (90-95%) → развитие заболевания

2 исход: диссеменация возбудителя (гематогенно может разнестись в любые органы) → 1. Полное заживление и кальсификация без развития заболевания (проба Манту → анабиоз микобактерий) → развитие заболевания

→ 2. Милиарный tbs., tbs менингит → развитие заболевания

Иммунитет

· ПТИ развитие нестерильного специфического иммунитета опосредуется Т-лимфоцитами → клеточный иммунитет

· Коррелирует с активность ГЧЗТ (гиперчувствительность замедленного типа)

· АТ не имеют защитного значения → защитного протективного эффекта нет

Микробиологическая диагностика

Микробиологический метод

· Прямая микроскопия и микроскопия с обогащением по Цилю-Нильсену. Для обогащения используют флотацию и центрифугирование.

· Люминесцентная микроскопия (не РИФ) – окраска ауромином и родамином.

2. Бак. метод (1,5-3месяца) -Точная идентификация возбудителя и определенной чувствительности к химиопрепаратам.

3. Биологический метод – Заражение морской свинки (дорого)

4. Серологический метод – Серодиагностика (выявление АТ) – ИФА

5. Аллергический метод – КАП с туберкулином (реакция Манту). Туберкулин-аллерген-белковый экстракт культуры. Вводят внутрикожно, учет через 48-72 часа.

6. ПЦР – обнаружение генов резистентности.

7. Диаскинтест – кожно-аллергическая проба.

Профилактика

Вакцина БЦЖ – живая аттенуированная вакцина M. Bovis, вводится при выписке детей из родительского дома. Ревакцинация в 7, 12, 17, 22 и 27-30 лет, лицам с отрицательной реакцией Манту.

Дифтерия

До вакцинации – 400 на 100 тысяч населения.

После введения вакцинации 0,2-0,03 на 100 тысяч населения (с 1976-1977гг).

Эпидемия к 1990 году из-за низкого уровня охвата противодифтерий прививками детей первого года жизни.

1994 год – 15 республик СССР эпидемии.

1995 год – заболевших 88%

Отдел: Firmicutes

Группа: Coryneform

Семейство: Corynebacteriaceae

Род: Corynebacterium

Вид:

1.C. diphtheria

· Биовары: Mitis

· Gravis

· Intermedius

2. C. ulcerans

Морфо-тинкториальные свойства:

· Полиморфные, прямые или слегка изогнутые палочки

· Длина 1-12 мкм, ширина 0,3-0,8 мкм

· Често утолщены на концах (булова) → скопления полифосфата

· Грам «+»

· Спору и капсулу не образуют

· В мазках в виде растопыренных пальцев, буквы V, иероглифов, полисадников

· Окраска по Нейсеру → на краях зерна валютина

· Образуют L-формы

Культуральные свойства:

· Факультативные анаэробы

· Температура 36-37 С

· рН=7,4-8,0

· Элективная среда – кровяно-теллуритовый агар (КТА)→ колонии черного или серого цвета (содержание металла), восстанавливает теллурит

· На жидких средах помутнение и осадок

· Черные колонии, гладкие, блестящие на твердой питательной среде.Gravis – на маргаритку.

Патогенные факторы:

· «Экзотоксин» (гистотоксин) → блокирует процесс белкового синтеза и тканевого дыхания. Действие на фактор элонгации-2 он его рибозилирует, Связан с АДФ-рибозой, после этого фактор не может встроится в рибосому → Нарушение синтеза белка → Гибель клетки.

· Делиминизация – паралич – миокарда, нервной системы и адреналовой системы.

· Кодируется в геноме бактериофага умеренного → Не все продуцируют токсин – лизогенные штаммы, инфицированные умеренным бактериофагом.

· Адгезины

· Гиалуронидаза

· Нейраминиздаза

· Фосфолипаза и протеаза

· Диструкция и некроз тканей

Атропоноз – носители штаммов

Пути передачи: воздушно-капельный и контактный

Резистентность: сохранена на объектах окраска сохраняется от 1-7 мм. Действуют дезенфектанты.

Патогенез:

Входные ворота: Слизистые ротоглотки, слизистые глаз, влагалище, уретра → Размножение возбудителя в месте входных ворот → Коагуляционный некроз эпителия, расширение и перенаполнение кровью кровеносных сосудов (гиалуронидаза) → отек → выполнение фибриногена → некротические клетки при разрушении высвобождающих тромбокиназу взаимодействия с фибриногеном образуя сетку фибрина (многослойный плоский эпителий, зев, глотка).

Верхние дыхательные пути → эпителий поверхностного слоя, и основа соединительной ткани, нити наверх и сверху пленка, не происходит очищение некротизированных тканей → некротизированный труп.

На однослойном плоском эпителии (дыхательные пути) – некроз эпителиального слоя. Пленка не прочно связана с подлежащими тканями → Легко отделяется → Крупозное воспаление.

Посев одновременно из зева и носа.

Среда КТА, накопление – сывороточный агар.