Микробиологическая диагностика холеры.

Патогенез холеры.

Источник: больной человек, бактерионоситель т.к. животные не болеют

Пути попадания: через рот

Пути передачи: водный, пищевой, контактно-бытовой

Инфицирующая доза: 10⁹-10¹¹ (содержится в 1 г фекалий) т.е. надо несколько дней для заражения.

Путь инфекции: желудок (кислая среда губительна - может дальше не резвится, если низкая кислотность, с водой или натощак барьер не срабатывает) → тонкий кишечник (щелочная среда – ему хорошо) → адсорбируется на ворсинка тонкого кишечника и начинает размножаться и выделяет все факторы патогенности, особенно холероген. Холероген определяет типические признаки холеры т.к. это специфический экзотоксин. Холероген белок хорошо изучен, состоит из двух фракций (А и В). А – истинный токсин, а В не обладает токсическими свойствами она распознает рецепторы эпителия тонкой кишки, формирует поры в составе мембраны эпителиоцита и отвечает за проникновения А фракции. Затем А фракция имеет мишень аденилатциклазу (фермент отвечающий за переход АТФ в цАМФ) → накопление цАМФ → клетка теряет воду, соли Na, К бикарбонаты в просвет кишечника → нарушение водно-солевого баланса организма. Человек теряет много внутриклеточной жидкости, солей → жидкий стул (рисовый отвар), рвота → дегидратация (за сутки несколько литров, похудеть на 10 кг). Объем порянной жидкости и веса определяет степень дегидротации:

1 степень - 3%

2 степень - 5% (холерный гастроэнтерит)

3 степень – 10%

4 степень – 15% (стадия алгиды)

Основное лечение: срочная нормализация водно-солевого баланса (струйно, капельно вводят растворы).

В стуле нет лейкоцитов (нет воспаления), температура ниже нормы.

Микробиологическая диагностика холеры.

Основной метод диагностики: бактериологический т.к. входит в группу особенно опасных. Исследованию подлежат: фекалии, промывные воды кишечника, рвотные массы, секционный материал тонкого кишечника, желчного пузыря. Вода, пищевые продукты, смывы с овощей и фруктов, смывы с рук персонала, забор материала делается специально-обученным персоналом и специальными методами защиты. Исследования проводится в лабораториях спец. Назначния

1 час: засевания на слективные среды: 1% пептонная вода, щелочной агар, TCBS → термостат 37⁰ – 3-4 часа →пересев на вторую ПВ, ЩА → 2 часа.

Экспресс методы диагностики холеры:

· Исследование материала в реакции иммунофлуоресценции с О₁-холерной сывороткой или О_139-й(первичного или вторичного).

· Постановка реакции аглютинации в препарате висячая капля +

· Иммобилизация холерного вибриона: висячая капля + О₁ сыворотка → прекращение подвижности.

12 часов: учет роста, отвивка подозрительной колонии на косой агар Клиглера, щелочного агара для выделения возбудителя.

12 - 24 часа: рост чистой культуры и идентификация культуры.

Идентификация: окраска по Грамму, изучение подвижности и установления принадлежности к роду по биотестам (оксидаза, ферментация глюкозы, проба на индол, сероводород).

Дифференцировка: возбудителя от холероподобных вибриов по тестам: Реакция агглютинации по 1 и 139 сыворотке, отношение к триаде сахаров Хейберга (арабиноза -, сахароза +, манноза +, у подобных все +), отношение к фагам.

24-36 часов: устанавливается биологический вариант возбудителя (биовар):

 

	Холерный вибрион	Эльтор
Лизабельность	Лизируется с 4 типом Мукерджи	Лизируется фагом Эльтор2
Рост на агаре с полимексином В	Не растет	Растет
Агглютинация эритроцитов курицы	Не аглютинирует	Аглютинирует
Реакция фогес-проскауера	Отрицательная	положительная

Установление серовара с помощью сывороток: inaba, agava.

Серологический метод: определение парных сывороткам больного специфических антител в реакции пассивной гемагглютинации.

Профилактика.

Общаяя: выявление, изоляция, исследование воды, устройство туалетов, сан-просвет работа.

Специфическая: холерная моновакцина – убитая взвесь возбудителей, холерная вакцина+анатоксин – приготовлена из холерогена, холерные бактериофаги (через рот), химиопрофилактика – терациклином, фуразалидолом.