Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


„увствительность микроорганизмов к антибиотикам - Ќ. ј. Ѕельска€




(—огласно ѕриказу ћинистерства здравоохранени€ ———– є 250 от 13.03.75 г. "ќб унификации методов определени€ чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам".)

¬ клинической практике чувствительными к антибиотикам считают те микроорганизмы, на которые антибиотики оказывают бактериостатическое или бактерицидное действие.

ѕри любом лабораторном исследовании критерием чувствительности микроорганизмов к антибиотикам €вл€етс€ минимальна€ концентраци€ антибиотика, ингибирующа€ (задерживающа€) рост возбудител€ заболевани€ при стандартных услови€х постановки опыта.

ƒл€ определени€ лекарственной чувствительности оптимальным €вл€етс€ использование чистой культуры возбудител€. ¬ыдел€ть культуры микробов из организма дл€ исследовани€ на чувствительность следует до начала лечени€ антибиотиками, так как под их воздействием рост возбудител€ заболевани€ может быть полностью угнетен. „увствительность микроорганизмов к антибиотикам определ€ют методом диффузии в агар с применением стандартных дисков или методом серийных разведений в жидких и плотных питательных средах.

ћетоды определени€

ћетод дисков. ¬звесь изучаемой культуры засевают "газоном" (см. главу 7). ¬ качестве посевного материала можно использовать суточную бульонную культуру или 1 миллиардную микробную взвесь, приготовленную по оптическому стандарту мутности є 10 (см. ниже). «асе€нные чашки подсушивают 30-40 мин при комнатной температуре. «атем на поверхность засе€нного агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков.  аждый диск слегка прижимают браншами пинцета, чтобы он плотно прилегал к поверхности агара. ƒиски накладывают на равном рассто€нии друг от друга и на рассто€нии 2 см от кра€ чашки. ќдну чашку можно использовать дл€ изучени€ чувствительности одного штамма к 4-5 антибиотикам.

«асе€нные чашки с нанесенными на них дисками помещают в термостат при 37∞ — на 18-24 ч. „ашки став€т вверх дном, чтобы избежать попадани€ конденсационной воды на поверхность посевов.

”чет результатов. ƒействие антибиотиков оценивают по феномену задержки роста вокруг диска (рис. 25). ƒиаметр зон задержки роста микробов вокруг дисков определ€ют с помощью линейки, включа€ диаметр самого диска. ћежду степенью чувствительности микроба к антибиотикам и величиной зоны отсутстви€ роста имеютс€ следующие соотношени€ (табл. 10).


–ис. 25. ќпределение чувствительности бактерий к антибиотикам (метод дисков)


“аблица 10. ќпределение степени чувствительности микроорганизмов к антибиотикам по величине зоны отсутстви€ роста

¬ ответе указывают, какой чувствительностью обладает исследуемый штамм, а не размер зоны задержки роста.

¬ р€де случаев определ€ют чувствительность микроорганизмов к антибиотикам в нативном материале (гной, раневое отдел€емое и др.). ѕри этом материал нанос€т на поверхность питательного агара и равномерно растирают по поверхности стерильным стекл€нным шпателем*, а потом накладывают диски. ћетод дисков дл€ определени€ чувствительности микроорганизмов вследствие простоты и доступности широко примен€ют в практических лаборатори€х и расценивают как качественный метод.

* (ƒл€ тех видов микроорганизмов, которые не растут на м€сопептонном агаре, как, например, стрептококки, пневмококки и другие, примен€ют агар с кровью или сывороткой.)

ћетод серийных разведений в жидкой питательной среде. Ётот метод €вл€етс€ точным количественным методом, его примен€ют в научной работе и в особо важных случа€х в лаборатори€х больниц и профилактических учреждений.

ƒл€ постановки опыта необходимо иметь чистую культуру испытуемого микроорганизма, основной раствор антибиотика, м€сопептонный бульон на переваре ’оттингера, содержащий 1,2-1,4 г/л аминного азота.

јктивность антибиотиков выражают в ≈ƒ/мл или мкг/мл. ƒл€ приготовлени€ основного раствора антибиотика используют антибиотики, имеющиес€ в продаже с указанием количества их во флаконе.

≈сли на этикетке вместо количества единиц во флаконе дозировка указана в единицах массы, то следует иметь в виду, что 1 г активности дл€ большей части антибиотиков соответствует 1 млн. ≈ƒ. »з этого раствора и должны быть приготовлены требуемые разведени€ антибиотиков. ”казани€ дл€ приготовлени€ основного раствора антибиотиков на примере пенициллина приведены в табл. 11.


“аблица 11. ѕолучение основного раствора пенициллина

√отов€т взвесь культуры микроорганизмов, выросшей на плотной питательной среде. ѕолученную взвесь сравнивают с оптическим стандартом мутности є 10 (см. ниже), а затем развод€т стерильным изотоническим раствором натри€ хлорида до 106 микробных тел в 1 мл. ƒл€ получени€ соответствующего разведени€ микробной взвеси готов€т р€д последовательных дес€тикратных разведений (см. ниже).

ѕостановка опыта. ¬ 12 стерильных пробирок разливают по 1 мл жидкой питательной среды. ¬ 1-ю пробирку внос€т 1 мл основного раствора антибиотика, содержащего, например, 32 ≈ƒ в 1 мл. —одержимое 1-й пробирки перемешивают и 1 мл перенос€т во 2-ю пробирку, из 2-й - в 3-ю, из 3-й - в 4-ю и так до 10-й, из которой 1 мл удал€ют. “аким образом, 1-€ пробирка будет содержать 16 ≈ƒ, 2-€ - 8 ≈ƒ, 3-€ - 4 ≈ƒ и т. д. ƒл€ приготовлени€ каждого разведени€ используют отдельную пипетку. —одержимое 11-й пробирки служит контролем роста бактерий, а 12-й - контролем стерильности питательной среды. ¬о все пробирки, кроме 12-й, внос€т 0,1 мл испытуемой культуры определенной густоты. ѕосев инкубируют в термостате в течение 18-24 ч и регистрируют результаты опыта.

”чет результатов провод€т при наличии роста в контроле культуры и отсутствии роста в контроле среды. «атем отмечают последнюю пробирку с полной видимой задержкой роста микробов.  оличество антибиотика в этой пробирке €вл€етс€ минимальной ингибирующей концентрацией дл€ испытуемого штамма и определ€ет степень его чувствительности к данному антибиотику. ¬ ответе, выдаваемом лабораторией, указывают минимальную ингибирующую концентрацию.

ћетод серийных разведений на плотной питательной среде. √отов€т двукратные разведени€ антибиотика, как и при методе серийных разведений в жидкой питательной среде. «атем берут 1 часть каждого разведени€ антибиотика и 9 частей питательного агара, расплавленного и охлажденного до 42∞ — (из расчета 1 мл антибиотика + 9 мл ћѕј), хорошо перемешивают и наливают в чашки ѕетри.

√устоту (концентрацию) культуры определ€ют по оптическому стандарту мутности є 10 и развод€т стерильным изотоническим раствором до 107 микробных тел в 1 мл. Ѕактериальной петлей нанос€т испытуемые культуры на поверхность питательного агара с антибиотиком. Ќа одну чашку делают посев 20-25 штаммов. «асе€нные чашки став€т в термостат при 37∞ — на 16-20 ч дл€ большинства видов микроорганизмов. „ашка с питательным агаром без антибиотика, на которую нанос€т испытуемые культуры, €вл€етс€ контрольной.

”чет результатов провод€т при наличии роста в контрольной чашке, а минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика определ€ют по последней чашке ѕетри, где отмечают полную задержку роста бактерий.

ћетод дорожки по ‘лемингу. ћетод примен€ют дл€ определени€ спектра действи€ антибиотика. ¬ чашке ѕетри с ћѕј стерильным скальпелем вырезают дорожку шириной 1 см и удал€ют ее. «атем в пробирку с растопленным и охлажденным до 42-45∞ — м€сопептонным агаром внос€т определенную концентрацию раствора антибиотика. —одержимое пробирки перемешивают и выливают в дорожку так, чтобы жидкость не выходила за ее пределы. ѕосле застывани€ агара перпендикул€рно к дорожке засевают петлей культуры нескольких исследуемых микроорганизмов. ѕосевы помещают в термостат на 18-24 ч.

”чет результатов. „увствительные к препарату культуры начинают расти лишь на некотором рассто€нии от дорожки, нечувствительные растут до самого кра€.





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-22; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 6052 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

¬аше врем€ ограничено, не тратьте его, жив€ чужой жизнью © —тив ƒжобс
==> читать все изречени€...

499 - | 519 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.011 с.