Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


√лава 5. ¬ли€ние факторов окружающей среды на микроорганизмы - Ќ. ј. Ѕельска€




∆изнь микроорганизмов находитс€ в тесной зависимости от условий окружающей среды. ¬се факторы окружающей среды, оказывающие вли€ние на микроорганизмы, можно разделить на три группы: физические, химические и биологические, благопри€тное или губительное действие которых зависит как от природы самого фактора, так и от свойств микроорганизма.

‘изические факторы

»з физических факторов наибольшее вли€ние на развитие микроорганизмов оказывают температура, высушивание, лучиста€ энерги€, ультразвук.

“емпература. ∆изнеде€тельность каждого микроорганизма ограничена определенными температурными границами. Ёту температурную зависимость обычно выражают трем€ основными точками: минимум - температура, ниже которой размножение микробных клеток прекращаетс€; оптимум - наилучша€ температура дл€ роста и развити€ микроорганизмов; максимум - температура, выше которой жизнеде€тельность клеток ослабл€етс€ или прекращаетс€. ќптимальна€ температура обычно соответствует температурным услови€м естественной среды обитани€.

¬се микроорганизмы по отношению к температуре подраздел€ютс€ на психрофилы, мезофилы и термофилы.

ѕсихрофилы (от греч. psychros - холодный, phileo - люблю), или холодолюбивые микроорганизмы, растут при относительно низких температурах: минимальна€ температура - 0∞ —, оптимальна€ - 10-20∞ —, максимальна€ - 30∞ —. Ёта группа включает микроорганизмы, обитающие в северных мор€х и океанах, почве, сточных водах. —юда же относ€тс€ свет€щиес€ и железобактерии, а также микробы, вызывающие порчу продуктов на холоду (ниже 0∞ —).

ћезофилы (от греч. mesos - средний) - наиболее обширна€ группа, включающа€ большинство сапрофитов и все патогенные микроорганизмы. ќптимальна€ температура дл€ них 28-37∞ —, минимальна€ - 10∞ —, максимальна€ - 45∞ —.

“ермофилы (от греч. termos - тепло, жар), или теплолюбивые микроорганизмы, развиваютс€ при температуре выше 55∞ —, температурный минимум дл€ них 30∞ —, оптимум - 50-60∞ —, а максимум - 70-75∞ —. ќни встречаютс€ в гор€чих минеральных источниках, поверхностном слое почвы, самонагревающихс€ субстратах (навозе, сене, зерне), кишечнике человека и животных. —реди термофилов много споровых форм.

¬ысокие и низкие температуры оказывают различное вли€ние на микроорганизмы. ќдни более чувствительны к высоким температурам. ѕричем, чем выше температура за пределами максимума, тем быстрее наступает гибель микробных клеток, что обусловлено денатурацией (свертыванием) белков клетки.

¬егетативные формы бактерий мезофилов погибают при температуре 60∞ — в течение 30-60 мин, а при 80-100∞ — - через 1-2 мин. —поры бактерий гораздо устойчивее к высоким температурам. Ќапример, споры бацилл сибирской €звы выдерживают кип€чение в течение 10-20 мин, а споры клостридий ботулизма - 6 ч. ¬се микроорганизмы, включа€ споры, погибают при температуре 165-170∞ — в течение часа (в сухожаровом шкафу) или при действии пара под давлением 1 атм (в автоклаве) в течение 30 мин.

ƒействие высоких температур на микроорганизмы положено в основу стерилизации - полного освобождени€ разнообразных объектов от микроорганизмов и их спор (см. ниже).

  действию низких температур многие микроорганизмы чрезвычайно устойчивы. —альмонеллы тифа и холерный вибрион длительно выживают во льду. Ќекоторые микроорганизмы остаютс€ жизнеспособными при температуре жидкого воздуха (-190∞ —), а споры бактерий выдерживают температуру до -250∞ —.

“олько отдельные виды патогенных бактерий чувствительны к низким температурам (например, бордетеллы коклюша и паракоклюша, нейссерии менингококка и др.). Ёти свойства микроорганизмов учитывают в лабораторной диагностике и при транспортировке исследуемого материала - его доставл€ют в лабораторию защищенным от охлаждени€.

ƒействие низких температур приостанавливает гнилостные и бродильные процессы, „то широко примен€етс€ дл€ сохранени€ пищевых продуктов в холодильных установках, погребах, ледниках. ѕри температуре ниже 0∞ — микробы впадают в состо€ние анабиоза - наступает замедление процессов обмена веществ и прекращаетс€ размножение. ќднако при наличии соответствующих температурных условий и питательной среды жизненные функции микробных клеток восстанавливаютс€. Ёто свойство микроорганизмов используетс€ в лабораторной практике дл€ сохранени€ культур микробов при низких температурах. √убительное действие на микроорганизмы оказывает также быстра€ смена высоких и низких температур (замораживание и оттаивание) - это приводит к разрыву клеточных оболочек.

¬ысушивание. ƒл€ нормальной жизнеде€тельности микроорганизмов необходима вода. ¬ысушивание приводит к обезвоживанию цитоплазмы, нарушению целостности цитоплазматической мембраны, вследствие чего нарушаетс€ питание микробных клеток и наступает их гибель.

—роки отмирани€ разных видов микроорганизмов под вли€нием высушивани€ значительно отличаютс€. “ак, например, патогенные нейссерии (менингококки, гонококки), лептоспиры, бледна€ трепонема и другие погибают при высушивании через несколько минут. ’олерный вибрион выдерживает высушивание 2 сут, сальмонеллы тифа - 70 сут, а микобактерии туберкулеза - 90 сут. Ќо высохша€ мокрота больных туберкулезом, в которой возбудители защищены сухим белковым чехлом, остаетс€ заразной 10 мес.

ќсобой устойчивостью к высушиванию, как и к другим воздействи€м окружающей среды, обладают споры. —поры бацилл сибирской €звы сохран€ют способность к прорастанию в течение 10 лет, а споры плесневых грибов - до 20 лет.

Ќеблагопри€тное действие высушивани€ на микроорганизмы издавна используетс€ дл€ консервировани€ овощей, фруктов, м€са, рыбы и лекарственных трав. ¬ то же врем€, попав в услови€ повышенной влажности, такие продукты быстро порт€тс€ из-за восстановлени€ жизнеде€тельности микробов.

ƒл€ хранени€ культур микроорганизмов, вакцин и других биологических препаратов широко примен€ют метод лиофильной сушки. —ущность метода состоит в том, что предварительно микроорганизмы или препараты подвергают замораживанию, а затем их высушивают в услови€х вакуума. ѕри этом микробные клетки переход€т в состо€ние анабиоза и сохран€ют свои биологические свойства в течение нескольких мес€цев или лет.

Ћучиста€ энерги€. ¬ природе микроорганизмы посто€нно подвергаютс€ воздействию солнечной радиации. ѕр€мые солнечные лучи вызывают гибель многих микроорганизмов в течение нескольких часов, за исключением фотосинтезирующих бактерий (зеленых и пурпурных серобактерий). √убительное действие солнечного света обусловлено активностью ультрафиолетовых лучей (”‘-лучи). ќни инактивируют ферменты клетки и повреждают ƒЌ . ѕатогенные бактерии более чувствительны к действию ”‘-лучей, чем сапрофиты. ѕоэтому хранить микробные культуры в лаборатории лучше в темноте. ¬ этом отношении демонстративен опыт Ѕухнера.

¬ чашку ѕетри с тонким слоем агара производ€т обильный посев какой-либо культуры бактерий. Ќа наружную поверхность засе€нной чашки наклеивают вырезанные из черной бумаги буквы, образующие, например, слово "typhus". „ашку, обращенную дном вверх, подвергают облучению пр€мыми солнечными лучами в течение 1 ч. «атем бумажки снимают, и чашку став€т на сутки в термостат при 37∞ —. –ост бактерий наблюдаетс€ лишь в тех местах агара, которые были защищены от действи€ ”‘-лучей наклеенными буквами. ќстальна€ часть агара остаетс€ прозрачной, т. е. рост микроорганизмов отсутствует (рис. 11).


–ис. 11. ƒействие света на бактерии

¬елико значение солнечного света как естественного фактора оздоровлени€ внешней среды. ќн освобождает от патогенных бактерий воздух, воду "естественных водоемов, верхние слои почвы.

Ѕактерицидное (уничтожающее бактерий) действие ”‘-лучей используетс€ дл€ стерилизации воздуха закрытых помещений (операционных, перев€зочных, боксов и т. д.), а также воды и молока. »сточником этих лучей €вл€ютс€ лампы ультрафиолетового излучени€, бактерицидные лампы.

ƒругие виды лучистой энергии - рентгеновские лучи, α-, β-, γ-лучи оказывают губительное действие на микроорганизмы только в больших дозах, пор€дка 440-280 ƒж/кг. √ибель микробов обусловлена разрушением €дерных структур и клеточной ƒЌ . ћалые дозы излучений стимулируют рост микробных клеток. ћикроорганизмы значительно устойчивее к радиоактивным излучени€м, чем высшие организмы. »звестны тионовые бактерии, обитающие в залежах урановых руд. Ѕактерии обнаруживали в воде атомных реакторов при концентрации ионизирующей радиации 20-30 кƒж/кг.

Ѕактерицидное действие ионизирующего излучени€ используетс€ дл€ консервировани€ некоторых пищевых продуктов, стерилизации биологических препаратов (сывороток, вакцин и др.), при этом свойства стерилизуемого материала не измен€ютс€.

¬ последние годы радиационным методом стерилизуют издели€ дл€ одноразового использовани€ - полистироловые пипетки, чашки ѕетри, лунки дл€ серологических реакций, шприцы, а также шовный материал - кетгут и др.

”льтразвук вызывает значительное поражение микробной клетки. ѕод действием ультразвука газы, наход€щиес€ в жидкой среде цитоплазмы, активируютс€, и внутри клетки возникает высокое давление (до 10000. атм). Ёто приводит к разрыву клеточной оболочки и гибели клетки. ”льтразвук используют дл€ стерилизации пищевых продуктов (молока, фруктовых соков), питьевой воды.

¬ысокое давление.   механическому давлению бактерии и особенно их споры устойчивы. ¬ природе встречаютс€ бактерии, живущие в мор€х и океанах на глубине 1000-10000 м под давлением от 100 до 900 атм. Ќекоторые виды бактерий выдерживают давление до 3000-5000 атм, а бактериальные споры - даже 20000 атм.

’имические факторы

¬ли€ние химических веществ на микроорганизмы различно в зависимости от природы химического соединени€, его концентрации, продолжительности воздействи€ на микробные клетки. ¬ зависимости от концентрации химическое вещество может быть источником питани€ или оказывать угнетающее действие на жизнеде€тельность микроорганизмов. Ќапример, 0,5-2% раствор глюкозы стимулирует рост микробов, а 20-40% растворы глюкозы задерживают размножение микробных клеток.

ћногие химические соединени€, оказывающие губительное действие на микроорганизмы, используютс€ в медицинской практике в качестве дезинфицирующих веществ и антисептиков.

’имические вещества, используемые дл€ дезинфекции, называют дезинфицирующими. ѕод дезинфекцией понимают меропри€ти€, направленные на уничтожение патогенных микроорганизмов в различных объектах окружающей среды.   дезинфицирующим веществам относ€т галлоидные соединени€, фенолы и их производные, соли т€желых металлов, некоторые кислоты, щелочи, спирты и др. ќни вызывают гибель микробных клеток, действу€ в оптимальных концентраци€х, в течение определенного времени. ћногие дезинфицирующие вещества оказывают вредное воздействие на ткани макроорганизма.

јнтисептиками называют химические вещества, которые могут вызывать гибель микроорганизмов или задерживать их рост и размножение. »х используют с лечебной целью (химиотерапи€), а также дл€ обеззараживани€ ран, кожи, слизистых оболочек человека. јнтисептическими свойствами обладают перекись водорода, спиртовые растворы йода, бриллиантового зеленого, растворы перманганата кали€ и др. Ќекоторые антисептические вещества (уксусна€, серниста€, бензойна€ кислоты и др.) в дозах, безвредных дл€ человека, примен€ют дл€ консервировани€ пищевых продуктов.

ѕо механизму действи€ химические вещества, обладающие противомикробной активностью, можно подразделить на несколько групп.

1. ѕоверхностно-активные вещества (жирные кислоты, мыла и прочие детергенты) вызывают снижение поверхностного нат€жени€, что приводит к нарушению функционировани€ клеточной стенки и цитоплазматической мембраны микроорганизмов.

2. ‘енол, крезол и их производные вызывают коагул€цию микробных белков. ќни используютс€ дл€ дезинфекции заразного материала в микробиологической практике и инфекционных больницах.

3. ќкислители, взаимодейству€ с микробными белками, нарушают де€тельность ферментов, вызывают денатурацию белков. јктивными окислител€ми €вл€ютс€ хлор, озон, которые используют дл€ обеззараживани€ питьевой воды. ’лорпроизводные вещества (хлорна€ известь, хлорамин) широко употребл€ют в цел€х дезинфекции. ќкисл€ющими свойствами обладают перекись водорода, перманганат кали€, йод и др.

4. ‘ормальдегид примен€ют в виде 40% раствора (формалин) дл€ дезинфекции. ќн убивает вегетативные и споровые формы микроорганизмов. ‘ормалин блокирует аминогруппы белков микробной клетки и вызывает их денатурацию.

5. —оли т€желых металлов (ртуть, свинец, цинк, золото и др.) коагулируют белки микробной клетки, вызыва€ этим их гибель. –€д металлов (серебро, золото, ртуть и др.) оказывают бактерицидное действие на микроорганизмы в ничтожно малых концентраци€х. Ёто свойство получило название олигодинамического действи€ (от лат. oligos - малый, dinamys - сила). ƒоказано, что вода, наход€ща€с€ в сосудах из серебра, не загнивает, благодар€ бактерицидному действию ионов серебра. ƒл€ профилактики бленнореи* новорожденных долгое врем€ примен€ли 1% раствор нитрата серебра.  оллоидные растворы органических соединений серебра (протаргол, колларгол) используют также в виде местных антисептических средств.

* (Ѕленноре€ - воспаление конъюнктивы глаза, вызванное гонококками.)

—ильным антимикробным действием обладают препараты ртути. »здавна дл€ дезинфекции примен€ли бихлорид ртути, или сулему (в разведении 1:1000). ќднако она оказывает токсическое действие на ткани макроорганизма и использование ее ограничено.

6.  расители (бриллиантовый зеленый, риванол и др.) обладают свойством задерживать рост бактерий. –астворы р€да красителей примен€ют в качестве антисептических средств, а также ввод€т в состав некоторых питательных сред дл€ угнетени€ роста сопутствующей микрофлоры.

√убительное действие р€да физических и химических факторов на микроорганизмы составл€ет основу асептического и антисептического методов, широко используемых в медицинской и санитарной практике.

јсептика - система профилактических меропри€тий, преп€тствующих микробному загр€знению объекта (раны, операционного пол€, культур микроорганизмов и т. д.), основанна€ на физических методах.

јнтисептика - комплекс мер, направленных на уничтожение микроорганизмов в ране, целом организме или на объектах внешней среды, с применением различных обеззараживающих химических веществ.

Ѕиологические факторы

¬ естественных услови€х обитани€ микроорганизмы существуют не изолированно, а наход€тс€ в сложных взаимоотношени€х, которые свод€тс€ в основном к симбиозу, метабиозу и антагонизму.

—имбиоз - это сожительство организмов различных видов, принос€щих им взаимную пользу. ѕри этом совместно они развиваютс€ лучше, чем каждый из них в отдельности.

—имбиотические взаимоотношени€ существуют между клубеньковыми бактери€ми и бобовыми растени€ми, между мицелиальными грибами и сине-зелеными водоросл€ми (лишайниками): —имбиоз молочно-кислых бактерий и спиртовых дрожжей используют дл€ приготовлени€ некоторых молочно-кислых продуктов (кефир, кумыс).

ћетабиоз - такой вид взаимоотношений, при котором продукты обмена одного вида микроорганизмов создают необходимые услови€ дл€ развити€ других. Ќапример, гнилостные микроорганизмы, расщепл€ющие белковые вещества, способствуют накоплению в среде аммонийных соединений и создают благопри€тные услови€ дл€ роста и развити€ нитрифицирующих бактерий. ј развитие анаэробов в хорошо аэрируемой почве было бы невозможно без аэробов, поглощающих свободный кислород.

ћетабиотические взаимоотношени€ широко распространены среди почвенных микроорганизмов и лежат в основе круговорота веществ в природе.

јнтагонизм - форма взаимоотношений, при которой один микроорганизм угнетает развитие другого или может вызвать его полную гибель. јнтагонистические взаимоотношени€ выработались у микроорганизмов в борьбе за существование. ѕовсюду, где они обитают, между ними идет непрерывна€ борьба за источники питани€, кислород воздуха, среду обитани€. “ак, большинство патогенных бактерий, попав с выделени€ми больных во внешнюю среду (почву, воду), не выдерживают здесь длительной конкуренции с многочисленными сапрофитами и сравнительно быстро погибают.

јнтагонизм может быть обусловлен пр€мым воздействием микроорганизмов друг на друга или действием продуктов их обмена. Ќапример, простейшие пожирают бактерий, а фаги лизируют их.  ишечник новорожденных засел€ют молочно-кислые бактерии Bifidobacterium bifidum. ¬ыдел€€ молочную кислоту, они подавл€ют рост гнилостных бактерий и этим защищают от кишечных –асстройств еще малоустойчивый организм грудных детей. Ќекоторые микроорганизмы в процессе жизнеде€тельности вырабатывают различные вещества, оказывающие губительное действие на бактерии и другие микробы.   таким веществам относ€т антибиотики (см. "јнтибиотики").

 онтрольные вопросы

1.  акие физические факторы оказывают вли€ние на жизнеде€тельность микроорганизмов?

2.  акие вещества относит к дезинфицирующим и как они различаютс€ по механизму воздействи€ на микроорганизмы?

3. ѕеречислите, какие взаимоотношени€ существуют между микроорганизмами?

—терилизаци€

—терилизаци€ - это обеспложивание, т. е. полное освобождение объектов окружающей среды от микроорганизмов и их спор.

—терилизацию производ€т различными способами:

1) физическими (воздействие высокой температуры, ”‘-лучей, использование бактериальных фильтров);

2) химическими (использование различных дезинфектантов, антисептиков);

3) биологическим (применение антибиотиков).

¬ лабораторной практике обычно примен€ют физические способы стерилизации.

¬озможность и целесообразность использовани€ того или иного способа стерилизации обусловлена особенност€ми материала, подлежащего стерилизации, его физическими и химическими свойствами.

‘изические способы

ѕрокаливание в пламени горелки или фламбирование - способ стерилизации, при котором происходит полное обеспложивание объекта, так как погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. ќбычно прокаливают бактериологические петли, шпатели, пипетки, предметные и покровные стекла, мелкие инструменты. Ќе следует стерилизовать прокаливанием ножницы, скальпели, так как под действием огн€ режуща€ поверхность становитс€ тупой.

—ухожарова€ стерилизаци€

—терилизацию сухим жаром или гор€чим воздухом осуществл€ют в печах ѕастера (сушильных сухожаровых шкафах). ѕечь ѕастера - шкаф с двойными стенками, изготовленный из термостойких материалов - металла и асбеста. Ќагревают шкаф с помощью газовых горелок или электронагревательных приборов. Ўкафы с электрическим нагревом снабжены регул€торами, обеспечивающими необходимую температуру. ƒл€ контрол€ температуры имеетс€ термометр, вставленный в отверстие верхней стенки шкафа.

—ухим жаром стерилизуют в основном лабораторную ѕосуду. ѕодготовленную дл€ стерилизации посуду неплотно загружают в печь, чтобы обеспечить равномерный и надежный прогрев стерилизуемого материала. ƒверь шкафа плотно закрывают, включают обогревательный прибор, довод€т температуру до 160-165∞ — и при этой температуре стерилизуют 1 ч. ѕо окончании стерилизации выключают обогрев, но дверцу шкафа не открывают до тех пор, пока печь не остынет; в противном случае холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование трещин на гор€чей посуде.

—терилизацию в печи ѕастера можно проводить при различном температурном режиме и экспозиции (врем€ стерилизации) (табл. 1).


“аблица 1. –ежим стерилизации

∆идкости (питательные среды, изотонический раствор хлорида натри€ и др.), предметы из резины и синтетических материалов стерилизовать сухим жаром нельз€, так как жидкости вскипают и выливаютс€, а резина и синтетические материалы плав€тс€.

ƒл€ контрол€ стерилизации в печи ѕастера шелковые нити смачивают в культуре спорообразующих бактерий, подсушивают, помещают в стерильную чашку ѕетри и став€т в печь ѕастера. —терилизацию провод€т при температуре 165∞ — 1 ч (дл€ контрол€ часть нитей оставл€ют при комнатной температуре). «атем простерилизованные и контрольные нити кладут на поверхность агара в чашку ѕетри или помещают в пробирки с бульоном и инкубируют в термостате при температуре 37∞ — в течение 2 сут. ѕри правильной работе печи ѕастера в пробирках или чашках с питательными средами, куда были помещены простерилизованные нити, роста не будет, так как споры бактерий погибнут, в то врем€ как споры бактерий на нит€х, не подвергавшихс€ стерилизации (контрольные), прорастут и на питательных средах будет отмечен рост.

ƒл€ определени€ температуры внутри печи ѕастера можно использовать сахарозу или пищевой сахарный песок, карамелизующиес€ при температуре 165-170∞ —.

ѕодготовка лабораторной посуды к стерилизации в печи ѕастера. Ћабораторную посуду (чашки ѕетри, пипетки градуированные и пастеровские, флаконы, колбы, пробирки) перед стерилизацией необходимо тщательно вымыть, высушить и завернуть в бумагу, иначе после стерилизации она может снова загр€знитьс€ бактери€ми воздуха.

„ашки ѕетри завертывают в бумагу по одной или несколько штук либо укладывают в специальные металлические пеналы.

¬ верхние концы пипеток вставл€ют ватные тампоны, предупреждающие попадание исследуемого материала в рот. √радуированные пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4-5 см. Ќа бумаге отмечают объем завернутой пипетки. ¬ пеналах градуированные пипетки стерилизуют без дополнительного завертывани€ в бумагу.

ѕримечание. ≈сли градуировка на пипетках плохо заметна, ее восстанавливают перед стерилизацией. Ќа пипетку нанос€т масл€ную краску и, не дав краске высохнуть, в нее втирают с помощью тр€почки порошок бари€ сульфата. ѕосле этого тр€пкой снимают избыток краски, котора€ остаетс€ только в насечках градуировки. ќбработанные таким образом пипетки следует сполоснуть.

ќстрые концы пастеровских пипеток запаивают в пламени горелки и заворачивают в бумагу по 3-5 штук. «аворачивать пастеровские пипетки нужно осторожно, чтобы не обломать запа€нные концы капилл€ров.

‘лаконы, колбы, пробирки закрывают ватно-марлевыми пробками. ѕробка должна входить в горлышко сосуда на 2/3своей длины, не слишком туго, но и не свободно. ѕоверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажный колпачок. ѕробирки св€зывают по 5-50 штук и обертывают поверх бумагой.

ѕримечание. ѕри высоких температурах бумага, в которую завертывают чашки и пипетки, и вата желтеют и даже могут обугливатьс€, поэтому каждый новый сорт бумаги, получаемый лабораторией, следует испытывать при прин€том температурном режиме.

 онтрольные вопросы

1. „то понимают под термином стерилизаци€?

2.  акими способами провод€т стерилизацию?

3. „то стерилизуют прокаливанием на огне?

4. ќпишите устройство и режим работы печи ѕастера.

5. „то стерилизуют в печи ѕастера?

6.  ак подготавливают стекл€нную посуду к стерилизации?

7. ѕочему в печи ѕастера нельз€ стерилизовать питательные среды и предметы из резины?

«адание

ѕодготовьте к стерилизации чашки ѕетри, градуированные пипетки, пастеровские пипетки, пробирки, колбы и флаконы.

—терилизаци€ кип€чением

 ип€чение - способ стерилизации, гарантирующий обеспложивание при условии отсутстви€ в стерилизуемом материале спор. ѕримен€ют дл€ обработки шприцев инструментов, стекл€нной и металлической посуды резиновых трубок и т. п.

—терилизацию кип€чением обычно провод€т в стерилизаторе - металлической коробке пр€моугольной формы с плотно закрывающейс€ крышкой. —терилизуемый материал помещают на имеющуюс€ в стерилизаторе сетку и заливают водой. ƒл€ повышени€ точки кипени€ и устранени€ жесткости воды добавл€ют 1-2% гидрокарбонат натри€ (лучше пользоватьс€ дистиллированной водой). —терилизатор закрывают крышкой и подогревают Ќачалом стерилизации считают момент закипани€ воды, врем€ кип€чени€ 15-30 мин. ѕо окончании стерилизации сетку с инструментами извлекают за боковые ручки специальными крючками, а наход€щиес€ в ней инструменты берут стерильным пинцетом или корнцангом, который кип€т€т вместе с остальными инструментами.

—терилизацию паром производ€т двум€ способами: 1) паром под давлением; 2) текучим паром.

—терилизацию паром под давлением производ€т в автоклаве. Ётот способ стерилизации основан на воздействии на стерилизуемые материалы насыщенного вод€ного пара при давлении выше атмосферного. ¬ результате такой стерилизации при однократной обработке погибают как вегетативные, так и споровые формы микроорганизмов.

јвтоклав (рис. 12) - массивный котел, снаружи покрытый металлическим кожухом, герметически закрыт крышкой, котора€ плотно привинчиваетс€ к котлу откидывающимис€ болтами. ¬ наружный котел вставлен другой, меньшего диаметра, который называют стерилизационной камерой. ¬ эту камеру помещают предметы, подлежащие стерилизации. ћежду обоими котлами имеетс€ свободное пространство, называемое водопаровой камерой. ¬ эту камеру через воронку, укрепленную снаружи, наливают воду до определенного уровн€, отмеченного на специальной водомерной трубке. ѕри кип€чении воды в водопаровой камере образуетс€ пар. —терилизационна€ камера снабжена выпускным краном с предохранительным клапаном дл€ выхода пара при повышении давлени€ сверх необходимого. ƒл€ определени€ давлени€, создающегос€ в стерилизационной камере, служит манометр.


–ис. 12. —хема автоклава. ћ - манометр; ѕ  - предохранительный клапан; ¬ - воронка дл€ воды;  2 - кран дл€ выпуска воды;  3 - кран дл€ выпуска пара

Ќормальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.) принимают за нуль. ћежду показани€ми манометра и температурой имеетс€ определенна€ зависимость (табл. 2).


“аблица 2. –ежим работы автоклава

¬ насто€щее врем€ имеютс€ автоклавы с автоматическим регулированием режима работы.  роме обычного манометра, они снабжены электроконтактным манометром, который преп€тствует увеличению давлени€ выше заданной величины и тем самым обеспечивает посто€нство нужной температуры в автоклаве.

ѕаром под давлением стерилизуют различные питательные среды (кроме содержащих нативные белки), жидкости (изотонический раствор хлорида натри€, воду и т. д.); приборы, особенно имеющие резиновые части.

“емпература и длительность автоклавировани€ питательных сред определ€етс€ их составом, указанным в рецепте приготовлени€ питательной среды. Ќапример, простые среды (м€сопептонный агар, м€сопептонный бульон) стерилизуют 20 мин при 120∞ — (1 атм). ќднако при этой температуре нельз€ стерилизовать среды, содержащие нативные белки, углеводы и другие легко измен€ющиес€ от нагревани€ вещества. —реды с углеводами стерилизуют дробно при 100∞ — или в автоклаве при 112∞ — (0,5 атм) 10-15 мин. –азличные жидкости, приборы, имеющие резиновые шланги, пробки, бактериальные свечи и фильтры стерилизуют 20 мин при 120∞ — (1 атм).

¬нимание! ¬ автоклавах производ€т также обезвреживание инфицированного материала. „ашки и пробирки, содержащие культуры микроорганизмов, помещают в специальные металлические ведра или баки с отверсти€ми в крышке дл€ проникновени€ пара и стерилизуют в автоклаве при 126∞ — (1,5 атм) в течение 1 ч. “аким же образом стерилизуют инструменты после работы с бактери€ми, образующими споры.

  работе с автоклавом допускаютс€ только специально подготовленные лица, которые должны строго и точно выполн€ть правила, указанные в инструкции, прилагаемой к аппарату.

“ехника автоклавировани€. 1. ѕеред работой провер€ют исправность всех частей и притертость кранов.

2. „ерез воронку, укрепленную снаружи котла, до верхней метки водомерного стекла заливают воду (дистиллированную или кип€ченую, чтобы не образовалась накипь).  ран под воронкой закрывают.

3. ¬ стерилизационную камеру на специальную сетку помещают стерилизуемый материал. ѕредметы следует загружать не слишком плотно, так как пар должен свободно проходить между ними, иначе они не нагреваютс€ до нужной температуры и могут остатьс€ нестерильными.

4. –езиновую прокладку на крышке натирают мелом дл€ лучшей герметизации.

5.  рышку закрывают и болтами привинчивают к корпусу автоклава, причем болты закручивают попарно крест-накрест.

6. ќткрывают до отказа выпускной кран, соедин€ющий стерилизационную камеру с наружным воздухом, и начинают нагревать автоклав. Ќагревание автоклава обычно производ€т с помощью газа или электричества.

ѕри нагревании автоклава вода закипает, образующийс€ пар поднимаетс€ между стенками котлов и сквозь специальные отверсти€, имеющиес€ в стенке внутреннего котла (см. рис. 12), попадает в стерилизационную камеру и выходит через открытый выпускной кран. —начала пар выходит вместе с воздухом, находившимс€ в автоклаве. Ќеобходимо, чтобы весь воздух был вытеснен из автоклава, так как в противном случае показани€ манометра не будут соответствовать температуре в автоклаве.

ѕо€вление непрерывной сильной струи пара указывает на полное удаление воздуха из автоклава; после этого выпускной кран закрывают и давление, внутри автоклава начинает постепенно повышатьс€.

7. Ќачалом стерилизации считают момент, когда показани€ манометра достигают заданной величины. Ќагрев регулируют так, чтобы давление в автоклаве в течение определенного времени не измен€лось.

8. ѕо истечении времени стерилизации нагрев автоклава прекращают, пар выпускают через выпускной кран.  огда стрелка манометра опускаетс€ до нул€, открывают крышку. „тобы избежать ожогов паром, оставшимс€ в автоклаве, крышку следует открывать на себ€.

”ровень температуры в автоклаве, т. е. правильность показаний манометра, можно проверить. ƒл€ этого используют различные вещества, имеющие определенную точку плавлени€: антипирин (113∞ —), резорцин и серу (119∞ —), бензойную кислоту (120∞ —). ќдно из этих веществ смешивают с ничтожно малым количеством красител€ (фуксина или метиленового синего) и насыпают в стекл€нную трубочку, которую запаивают и помещают в вертикальном положении между стерилизуемым материалом. ≈сли температура достаточна, вещество расплавитс€ и окраситс€ в цвет соответствующего красител€.

ƒл€ проверки эффективности стерилизации в автоклав помещают пробирку с заведомо споровой культурой. ѕосле автоклавировани€ пробирку перенос€т в термостат на 24-48 ч, отмечают отсутствие или наличие роста. ќтсутствие роста свидетельствует о правильной работе прибора.

—терилизацию текучим паром производ€т в аппарате  оха. Ётот способ примен€ют в тех случа€х, когда стерилизуемый объект измен€етс€ при температуре выше 100∞ —. “екучим паром стерилизуют питательные среды, содержащие мочевину, углеводы, молоко, картофель, желатин и др.

јппарат (кип€тильник)  оха представл€ет собой металлический цилиндр, обшитый снаружи (дл€ уменьшени€ теплоотдачи) войлоком или асбестом. ÷илиндр закрывают конической крышкой с отверстием дл€ выхода пара. ¬нутри цилиндра находитс€ подставка, до уровн€ которой наливают воду. Ќа подставку став€т ведро с отверстием, в которое помещают стерилизуемый материал. Ќагревают аппарат  оха при помощи газа или электричества. ќтсчет времени стерилизации ведут с момента энергичного выделени€ пара у краев крышки и из отверсти€ дл€ выхода пара. —терилизуют в течение 30-60 мин. ѕо окончании стерилизации нагрев прекращают. ¬ынимают из аппарата ведро с материалом и оставл€ют при комнатной температуре до следующего дн€. ѕрогревание провод€т 3 дн€ подр€д при температуре 100∞ — по 30-60 мин. “акой метод носит название дробной стерилизации. ѕри первом прогревании гибнут вегетативные формы микробов, а споровые сохран€ютс€. «а сутки споры успевают прорасти и превратитьс€ в вегетативные формы, которые погибают на второй день стерилизации. “ак как возможно, что некотора€ часть спор не успела прорасти, материал выдерживают еще 24 ч, а затем провод€т третью стерилизацию. —терилизаци€ текучим паром в аппарате  оха не требует специального контрол€, так как показателем правильной работы прибора служит стерильность приготовленных питательных сред. —терилизовать текучим паром можно также в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране.

 онтрольные вопросы

1.  акие питательные среды стерилизуют паром?

2. „то такое стерилизатор и как он устроен?

3. ѕочему при стерилизации кип€чением следует примен€ть дистиллированную воду?

4. ќпишите устройство и режим работы автоклава.

5. „то стерилизуют в автоклаве?

6. „то служит контролем правильной стерилизации при автоклавировании?

7. „то такое стерилизаци€ текучим паром?

8. ќпишите устройство аппарата  оха.

9. — какой целью провод€т дробную стерилизацию?

«адание

«аполните форму.

ƒробную стерилизацию можно проводить также в свертывателе  оха.

—вертыватель  оха используют дл€ свертывани€ сывороточных и €ичных питательных сред, причем одновременно с уплотнением среды происходит ее стерилизаци€.

—вертыватель  оха представл€ет собой плоский металлический €щик с двойными стенками, покрытый снаружи теплоизол€ционным материалом. ¬ пространство между стенками через специальное отверстие, наход€щеес€ в верхней части наружной стенки, наливают воду. ќтверстие закрывают пробкой, в которую вставлен термометр. «акрывают аппарат двум€ крышками: стекл€нной и металлической. „ерез стекл€нную крышку можно наблюдать за процессом свертывани€. ѕробирки со средами укладывают на дно свертывател€ в наклонном положении.

Ќагревание свертывател€ осуществл€ют с помощью газа или электричества. —реды стерилизуют однократно при температуре 90∞ — в течение 1 ч или дробно - 3 дн€ подр€д при 80∞ — в течение 1 ч.

“индализацию * - дробную стерилизацию при низких температурах - примен€ют дл€ веществ, которые легко разрушаютс€ и денатурируютс€ при температуре 60∞ — (например, белковые жидкости). ѕрогревание стерилизуемого материала производ€т на вод€ной бане или в специальных приборах с терморегул€торами при температуре 56-58∞ — в течение часа 5 дней подр€д.

* (—пособ стерилизации, назван по имени “индал€, предложившего его.)

ѕастеризаци€ - стерилизаци€ при 65-70∞ — в течение 1 ч, предложена ѕастером дл€ уничтожени€ бесспоровых форм микробов. ѕастеризуют молоко, вино, пиво, плодовые соки и другие продукты. ћолоко пастеризуют с целью освобождени€ от молочно-кислых и патогенных бактерий (бруцеллы, микобактерии туберкулеза, шигеллы, сальмонеллы, стафилококки и др.). ѕри пастеризации пива, плодовых соков, вина погибают микроорганизмы, вызывающие различные виды брожени€. ѕастеризованные продукты лучше сохран€ть на холоду.

 онтрольные вопросы

1.  аково назначение и устройство свертывател€  оха?

2.  акие существуют способы стерилизации в свертывателе?

3. „то такое тиндализаци€?

4. „то такое пастеризаци€?





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-22; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 759 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

≈сли президенты не могут делать этого со своими женами, они делают это со своими странами © »осиф Ѕродский
==> читать все изречени€...

742 - | 679 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.063 с.