Окраски основным фуксином

Методики выявления микробной флоры в гистологических микропрепаратах

(А.В.Цинзерлинг: Современнные инфекции.Патологическая анатомия и вопросы патогенеза.Санкт-Петербург,СОТИС,1993.с.20-26)

После депарафинирования срезов(три порции ксилола,затем этанол нисходящей концентрации, окрашенные срезы заключаются в бальзам(быстрое осушение фильтровальной бумагой,быстрое обезвоживание 96% этанолом,просветление ксилолом

и заключение в бальзам).

 

Выявление возбудителей с помощью световой микроскопии.

1. Окраска метиленовым синим по Леффлеру:

-срез поместить в краситель(30 мл насыщенного, примерно 10%-го спиртового р-ра

метиленового синего + 100 мл 0,015-го едкого калия) на 5-10 мин,

-дифференцировать в 0,25-0,5% р-ре уксусной кислоты под контролем микроскопа-

несколько секунд)

-сполоснуть водой

-заключить в бальзам.

 

2.Окраска тионином по Нисслю:

-срез поместить в краситель(1 мл насыщенного, примерно 10%-го спиртового р-ра

тионина+ 10 мл 1%-го водного фенола) на 3-10 мин

-обезводить и дифференцировать 96% этанолом под контролем микроскопа 0,5-2 мин.

-заключить в бальзам.

 

РЕЗУЛЬТАТЫ: При обеих окрасках ядра клеток окрашиваются отчетливо,цитоплазма клеток и остальные компоненты тканей почти не видны.Выявляются грамположительная и грамотрицательная флора,причем первая окрашивается интенсивнее.

Окраски основным фуксином.

Возможно несколько вариантов окраски,в основе которых лежит применение насыщенного примерно 10%-го р-ра основного фуксина на 96% этаноле (НРОФ).

 

3а. Окраска по Пфейферу:

-срез поместить в краситель(0,1 мл НРОФ + 100 мл 5% водного фенола) на 5 мин.

-сполоснуть водой

-дифференцировать разведенным солянокислым этанолом-1 часть соляно-кислого

этанола(1% соляная кислота в 70% этаноле) на 4 части дистиллированной воды

(дважды налить)

-смыть водой

-заключить в бальзам.

РЕЗУЛЬТАТЫ: Ядра клеток и бактериальная флора,особенно грамположительная,окрашиваются в малиновый цвет,цитоплазма клеток и другие компоненты клеток почти не видны.

 

3б Окраска по Цилю-Нильсену:

-срез покрыть фильтровальной бумагой(ее края не должны заходить за край стекла)

на бумагу налить раствор карболового фуксина(1 часть НРОФ на 10 частей 5%-го

водного фенола),срез подогреть до появления паров,оставить краску на срезе еще на

20-30 минут или срез без подогревания оставить в красителе на 15-18 часов

-снять бумагу,сполоснуть срез в воде

-дифференцировать в 1%-м соляно-кислом спирте(1 часть солянокислого этанола-

1% соляная к-та в 70% этаноле на 4 части дистиллированной воды) до бледно-розо-

вого цвета

-промыть в воде

-окрасить гематоксилином или метиленовым синим по Леффлеру

-сполоснуть в воде

-заключить в бальзам

 

РЕЗУЛЬТАТЫ:ткань красится гематоксилином или метиленовым синим,кислото- и спиртоустойчивые бактерии(в частности,туберкулезные),и ооцисты криптоспоридий-малиновые.

 

3в Окраска основным фуксином-метиленовым синим.

Окраска применяется главным образом для мазков,но применима при парафиновой проводке,если не загрязнены спирты.

-срез поместить в краситель(10 мл дистиллированной воды,к которой добавлены

1-2 капли НРОФ и 3-4 капли насыщенного примерно 10%-го р-ра метиленового

метиленового синего.Смесь красок имеет синий цвет с фиолетовым оттенком.Р-ры приготавливаются по Селлеру на этаноле,при модификации Павловского-на метаноле:до употребления они должны созревать не менее 1 недели в теплом месте)на 0,5-5 мин под контролем микроскопа

-заключить в бальзам.

РЕЗУЛЬТАТЫ:ядра сине-фиолетовые,цитоплазма сиреневая,микроорганизмы синие(более темная грамположительная флора и светлее-грамотрицательная)Кроме того,при ОРВИ в цитоплазме пораженных клеток выявляются малиново-красные ФВ-включения.