Аппаратура для измерения поглощения в видимом и ультрафиолетовом свете

Измерение поглощения осуществляют с помощью спектрофото­метра. (При описании биохимических образцов почти всегда имеются в виду растворы этих образцов). Несмотря на различия в конструкции, все спектрофотометры состоят из источника света, монохроматора (для выделения определенной длины волны), прозрачной кюветы, куда помещается образец, детектора света и измерительного прибора или самописца для регистрации вы­ходного сигнала детектора (рис 3.). Ход работы обычно следующий: измеряют при одной длине волны интенсивность света, прошедшего через растворитель (который может быть буфером), затем следует измерение интенсивности света, прошедшего через раствор изучаемого вещества в том же растворителе Далее фик­сируется изменение в интенсивности света, по которому можно судить о поглощении растворенного вещества. На практике при­бор настраивают таким образом, чтобы он показывал нулевое поглощение при измерении одного растворителя (это называется настройкой прибора на нуль). Осуществив такую настройку, можно снимать показания, соответствующие непосредственно по­глощению образца.

Рис 3. Схематическое устройство спектрофотометра. Свет от лампы 1 проходит через монохроматор 2 для выделения пучка света с определённой длиной волны. Образец 3 и растворитель 4 содержатся в двух кюветах, помещённых в держатель кювет 5. Свет проходит через кювету и падает на фотоэлемент 6, выходной сигнал которого регистрируется измерительным прибором 7. Держатель кюветы находится на направляющих 8, так что каждая кювета может быть независимо помещена в пучок лучей.

Для получения спектра эта операция повто­ряется при многих длинах волн. Некоторые приборы, называе­мые автоматическими двухлучевыми регистрирующими спектро­фотометрами, позволяют осуществлять развертку длин волн и одновременно измерять поглощение образца и растворителя (которые находятся и различных кюветах) и фиксировать с по­мощью электронного оборудования суммированный поток излу­чении. При этом на самописце вычерчивается спектр.